Аижк кому одобрили: Программа АИЖК – отзыв о СберБанке от «yana9218»

07.05.1973 alexxlab Comments 0 Comment

Содержание

Ипотека пенсионерам в 2021 — условия ипотечного кредита для пенсионеров

Ипотечное кредитование пенсионеров считается высокорисковой финансовой операцией, однако целый ряд банков имеют в своей продуктовой линейке подобные предложения. Как правило, основное условие по таким программам – погашение кредита до достижения заемщиком возраста 75 лет. В самом выгодном положении находятся пенсионеры, получающие пенсию не по старости. К этой категории относятся балерины, военные, полицейские и т.п.

Ипотека для пенсионеров без первоначального взноса в банках предполагает тщательную проверку кредитной истории, платежеспособности и состояния здоровья заемщика. Охотнее всего ипотечный кредит для пенсионеров предоставляется лицам, продолжающим работать и предоставившим официальное подтверждение доходов помимо пенсии.

На портале Выберу.ру вы найдете полный список ипотечных программ пенсионеру, разработанных банками.

Вопросы и ответы

В какой банк я могу подать заявку на ипотеку?

Развитие интернет-технологий заставляет банки двигаться дальше, и все больше кредитных организаций предлагают своим клиентам возможность оформить ипотечный кредит онлайн, минуя очереди. Однако найти по-настоящему выгодный кредит все еще сложно. В этом поможет Выберу.Ру. Выбрав чекбокс “Возможность онлайн-заявки” в левой части экрана, вы получите полный список ипотечных продуктов, подать заявку на которые можно онлайн.

Можно ли получить ипотеку со справкой в свободной форме?

Во многих банках можно оформить ипотеку со справкой в свободной форме. Она служит подтверждением дохода вместо 2-НДФЛ в том случае, если официальная часть доходов заемщика слишком мала.

Какие требования банк предъявляет к заемщикам?

Заемщик, который хочет получить кредит под залог недвижимости без доходов, должен соответствовать требованиям банка. Так, некоторые организации выдают займы под залог квартиры клиентам от 21 года до 65 лет. Взять кредит под залог без подтверждения дохода пенсионерам бывает труднее, и каждый банк фактически устанавливает собственные возрастные границы. Как правило, кредит под залог квартиры выдается гражданам не старше 70 лет.

Задайте свой вопрос

Новости институтов развития

Согласие

Настоящим заявляю, что ознакомлен с настоящей

Политикой обработки персональных данных и даю свое согласие оператору (Внешэкономбанку),
юридический адрес: пр-т Академика Сахарова, 9, Москва, 107996 (далее — Банк), на сбор,
запись, систематизацию, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение),
извлечение, использование, обезличивание, блокирование, удаление и уничтожение, в том
числе автоматизированные, любой информации, относящейся ко мне и полученной как от меня,
так и от третьих лиц, в специализированной электронной базе данных, которая может быть
использована Банком при осуществлении обратной связи, а так же для информирования о
продуктах и услугах Банка.
Согласие предоставляется с момента оформления настоящего обращения и действительно в
течение срока, предусмотренного действующим законодательством Российской Федерации.
Я согласен с тем, что оператор в целях уточнения информации, содержащейся в обращении, и
информирования о ходе рассмотрения настоящего обращения может использовать сведения,
содержащиеся в электронном обращении.
Настоящее согласие может быть отозвано посредством направления в Банк письменного
уведомления, полученного Банком не менее чем за 30 (тридцать) календарных дней до даты
отзыва согласия.

Кому дают ипотеку на квартиру

Ипотека – это кредит на большую сумму и длительный срок (до 30 лет), предполагающий определенные риски для банков. Поэтому к кандидатам, отправляющим заявку, предъявляются строгие требования банка для ипотеки. Помимо основных критериев таких, как возраст или стабильный доход, банк волнуют и другие нюансы, о которых мы и поговорим.

Давайте попробуем создать образ идеального заемщика, кому дают ипотеку на жилье без проблем.

Как получить ипотеку и что для этого нужно?

Изначально количество факторов, влияющих на одобрение ипотеки может пугать, однако, если разложить все по полочкам, становится понятно, что взять ипотеку вполне реально, конечно, если вы соразмерили свои доходы с платежами.

Стабильный подтвержденный доход. Подробнее об этой теме читайте в разделе: Доход для ипотеки. Вполне реально взять ипотеку и с маленькой официальной зарплатой, и с «серым» доходом, и если вы являетесь фрилансером. Хотя для этого вам нужно будет потрудиться доказать все суммы банку. Идеальный же заемщик имеет стабильный высокий доход и работает в одной компании более 3 лет. К тем, кто часто меняет места работы, банк относится с недоверием.

Возраст. Официальный возраст, когда можно брать ипотеку, начинается с 18 лет. Однако у многих банков минимальный необходимый возраст заемщика — 21 год. Максимальным «потолком» является возраст в 75 лет (на момент окончания платежей) в программе Сбербанка для пенсионеров. В стандартных же программах банков, возраст тех, кому дают ипотеку, не должен превышать 65 лет, опять же на момент окончания ипотеки. Наиболее охотно банки дают заем лицам от 30 до 40 лет.

Кредитная история. Еще одно важное требование банка для ипотеки. В этом вопросе много нюансов – если один из банков «забраковал» вашу кредитную историю, не факт, что другой ее не одобрит. Все банки имеют различный алгоритм обработки кредитных историй. Подробнее об этом в статье: Кредитная история для ипотеки.

Первоначальный взнос. Всегда нужно иметь на руках сумму в 15-20% от стоимости недвижимости, которую, кстати, можно компенсировать и различными жилищными сертификатами или материнским капиталом. Ипотеку с меньшим первоначальным взносом вам не даст ни один банк. Читайте о том, как взять ипотеку без первоначального взноса.

Документы. Чем больше сведений о себе вы предоставляете, тем охотнее банки дают ипотеку. Хотя сейчас существую программы ипотеки, для которых необходимо всего два документа.

Кому не дают ипотеку на квартиру? Отрицательные факторы

Эти критерии банка являются относительными и при других положительных сторонах могут не играть роли в одобрении кредита. Кроме того, даже если ваш имидж покажется банку «подпорченным», он может одобрить заявку на более жестких условиях ипотечного кредитования: высокая ставка, ограниченный срок, большой первоначальный взнос.

Судимость;
Отсутствие диплома о высшем образовании;
Длительные и крупные просрочки по кредитам;
Отсутствие трудового стажа или частые смены работы;
Отсутствие в собственности недвижимости или другого ценного имущества;
Отсутствие супруга или поручителей;
Наличие иждевенцев.

Если вы находитесь в «зоне риска», можете обратиться в ипотечное агентство или прибегнуть к помощи ипотечного брокера. Во многих случаях они могут решить ваши проблемы с ипотекой, за исключением самых безнадежных случаев.

Задай вопрос об ипотеке | Онлайн

Овсянников Дмитрий 19:42 12/05/2012

Нет нельзя: сперва квартира оформляется на наследника, затем наследник продает. Умерший, извините, продать квартиру уже не может.
А вообще, если кратко, то М. Горький в свое время писал «Безумству храбрых поем мы песню». Это в полной мере относится к тем, кто покупает квартиру по доверенности, при условии, что правоустанавливающие документы — свежее наследство.
Если Вы не знали семью умершего «с песочницы» — бегите от такой квартиры как можно дальше! Ищите себе другую.
О сделках по доверенности несколько лет назад писал статью: «10:1 не в пользу доверенности»:
«Да простят меня господа юристы, если я назову доверенность — сделкой наполовину. Юридически — безграмотно, но по сути — верно.
Вообще доверенность — это односторонняя сделка, то есть, та сделка, для совершения которой необходимо и достаточно волеизъявления одной стороны: того человека, который эту самую доверенность дает. (Доверителя)
А что дальше? Дал доверитель доверенность и что?
А ничего …
… до тех пор, пока доверенное лицо не захочет этой доверенностью воспользоваться. Как воспользоваться — доверенному лицу виднее: может так, как в доверенности написано, а может так, как используют обычную бумажку. Сделка свершилась, но какая-то половинчатая.
Доверенности посвящены статьи 185 — 189 Гражданского Кодекса Российской Федерации.
Квартиры по доверенности лучше не покупать, желательно и не продавать. Слишком уж много «подводных камушков.»
Но обо всем по порядку:
«Подводный камушек №1»:
Доверенность может быть отозвана (Ст. 188 ГК п. 1, пп. 2)
Итак, как уже говорилось, доверенность — односторонняя сделка. Что это значит? А то, что доверитель сегодня дал доверенность, (Не спрашивая доверенное лицо), а завтра взял, да и отозвал (также не спрашивая доверенное лицо): моя доверенность, что хочу, то и делаю …
Что из этого следует?
А то, что если покупатель покупает квартиру, он должен знать, не отозвана ли доверенность.
А как это сделать?
Думаю, что никак, поскольку дать доверенность можно у одного нотариуса, а отозвать у другого: сегодня доверяю, завтра — не доверяю …
Вы квартиру купили, а к Вам претензии со стороны бывшего владельца: доверенность была отозвана, доверенное лицо об этом знало, верните квартиру, я подаю в суд. Привет Вам от бывшего владельца! Оцените вероятность того, что Вы выиграете этот судебный процесс!
«Подводный камушек №2»:
Доверитель может умереть (действие доверенности автоматически прекращается смертью доверителя) (Ст. 188 ГК п. 1, пп. 6), а доверенное лицо — «не знать об этом»:
Привет Вам от наследников! Самое смешное (хотя смех в такой ситуации — не хороший), что наследники будут на 100% правы!
С кого будем убытки взыскивать? И как, — не более трети от зарплаты? А чьей зарплаты, правопреемников, или доверенного лица?
Доверенность — не действительна, значит не действительна и сделка, совершенная с помощью этой доверенности. Значит, квартиру надо вернуть. А дальше, нотариус определит, кому из наследников она достанется. То есть, квартиру получат правопреемники. С этим, вроде разобрались.
Осталось разобраться, а где-же деньги? Видимо, у доверенного лица. Ведь он должен эти деньги доверителю. Но, доверителя — нет в живых.
У доверенного лица есть возможность:
Деньги отдать правопреемникам (когда будет ясно, кто-же им (ими) стал).
Есть возможность деньги оставить себе: доверителя нет, а другим — денег не должен.
Есть возможность их просто потерять. Чем в этом случае покупателю возвращать? Квартирой? Но квартира-то чужая!!! Она принадлежит наследникам, а не доверенному лицу!
и так далее…»
Рекомендую найти эту статью и ознакомиться.
Свежее наследство — тоже не шоколадная сделка, и своих «подводных камушков» — не меньше, чем при сделках по доверенности.
А уж «наследство» + «доверенность» — вообще гремучая смесь.
Если Вам деньги слишком легко достаются, что их не жалко потерять — пожалуйста действуйте: Ваш выбор — Ваши риски.
Но я лично обхожу такие сделки стороной: ну очень не хочется за свои кровные часть жизни провести в судах…
Вы обратились ко мне за советом, а потому мне не безразлична судьба Вас и Ваших денег, а потому, ищите себе другую квартиру с нормальными документами! Да, возможно, она будет немного дороже, но спокойный сон того стоит.

Сос!
Девочки , кому аижк отказал

— @lansiay81, они уперлись что это только ! Для валютной ипотеки , хотя в правилах это не главное правило . Там главных правил нет , они говорят есть

— @sveta_zhuravleva печально это все ,вроде нате делайте , а по факту фиг

— @lansiay81, у нас долг 180🙈я даже пытаться не буду . Тут одной девочке отказали даже ставку снизить — у них 2,5 млн долг

— А у нас то ещё и долгу то осталось 700 тысяч ,вообще могут ничего не оформить , основание маленький долг, слышала ,что от 500 тыс рефенасирование не делают

— Я хотела рефенансировать в сбере на себя(я работала в сбере до декрета), но я в декрете , боюсь ,что не оформят , хотя написали, что декрет не является основанием для отказа , но мне если честно времени жалко и денег для оформления рефенсирования

— @lansiay81, муж заёмщик основной . Я да, работник . В анкете писала что сотрудник — толку то)

— @sveta_zhuravleva так а вы вроде работник сбера ? Им всем снизили под 9,5 , или у вас муж заемщик?

— @lansiay81, под 6 там вообще караул , если только рефинансирования делать в другом банке , до 6 не Снизят . Нам снизили с 11,5 до 10,9

— @sveta_zhuravleva я конечно попробую все равно, но когда у них спрашивала про снижение ставки по ипотеке,говорю цб то снизил ставку , и другие банки автоматом снижают, они говорят ,у нас нет такого((((( а вот реально у кого то уже получилось ? Под 6 то процентов ?

— @lansiay81, попробуйте , мало ли

— @lansiay81, я больше скажу — это государство гасит . Банку это не выгодно — чем больше осн долг тем больше проценты

— @sveta_zhuravleva блин блинский

— @lansiay81, знаю что семье с 4 детьми, 1 из которых инвалид- и у них валютная Ипотека — отказали…. в Сбере . Так что я уже ни на что не надеюсь

— @sveta_zhuravleva просто на пойму, им же все равно государство компенсирует разницу, все значит не так просто , как жаль ,как жаль ,что ничего не добиться в нашей стране

— @sveta_zhuravleva блин, у нас тупой ВТБ, думаю ,что тоже окажут, хочу после рождения 3 го попробовать, у нам ставка 11,75 и не снижают как в сбере

с 1 июля вводятся в оборот электронные закладные по ипотеке

В России перешли на электронный документооборот при покупке жилья в ипотеку: с 1 июля вводятся в оборот электронные закладные по ипотеке. Новый механизм должен сократить расходы банков, сроки регистрации и способствовать снижению ставок по ипотеке.

В России перешли на электронный документооборот при покупке жилья в ипотеку: с 1 июля вводятся в оборот электронные закладные по ипотеке. Оформление закладной в электронном виде сделали возможным изменения в ФЗ от 16.07.1998 №102-ФЗ «Об ипотеке (залоге недвижимости)».

Cтавки по ипотеке в России достигли исторического минимума

Банковский сектор

Cтавки по ипотеке в России достигли исторического минимума

Законом определяется, что электронная закладная представляет собой бездокументарную ценную бумагу. Права по ней закрепляются в форме хранящегося в депозитарии электронного документа. Форму электронной закладной можно будет заполнить на портале Госуслуг, на официальном сайте Росреестра или с использованием других информационных технологий взаимодействия с органами регистрации.

Электронная закладная будет содержать сведения о залогодателе, первоначальном залогодержателе и о заемщике по ипотечному кредиту. А также название кредитного договора с указанием даты и места его заключения, сумму ипотечного кредита и срок ее уплаты, название и описание имущества, купленного в ипотеку, а также заключение об оценке этого имущества.

Первая ласточка

Сегодня крупнейший в стране банк, Сбербанк, подготовил и направил в Росреестр первую электронную закладную по ипотеке. “Возможность оформления электронной закладной позволяет ускорить регистрацию залога при жилищном кредитовании без дополнительных действий со стороны клиента. Электронная закладная — это, несомненно, важный этап цифровизации ипотеки”, — считает директор дивизиона “ДомКлик” Сбербанка Николай Васев. В конце прошлого года председатель правления Сбербанка Герман Греф заявил о планах выдавать 80% ипотек онлайн через 3-4 года.

Другие игроки рынка тоже планируют осваивать новый механизм. Так, ВТБ прорабатывает возможность использования электронных закладных, сообщили «ДП» в пресс-службе банка. Абсолют Банк собирается запустить электронные закладные во втором полугодии.

Экономия и скорость

За красивые глаза. Банки приветствуют введение единой биометрической системы распознавания личности

Банковский сектор

За красивые глаза. Банки приветствуют введение единой биометрической системы распознавания личности

Введение электронной закладной, по замыслу правительства, должно создать условия для перехода на полностью электронный документооборот при покупке жилья в ипотеку. Переход от бумажного к электронному документообороту призван сократить расходы банков на всех стадиях: от выдачи до обслуживания ипотечного кредита.

Это будет способствовать дальнейшему снижению ставок по ипотечным кредитам для граждан, считают в «Дом.рф» (ранее — АИЖК). Внедрение электронной закладной также упростит секьюритизацию, которая позволяет снизить нагрузку на капитал банков и привлекать долгосрочное фондирование.

«Внедрение электронных закладных позволит упростить процесс получения ипотечного кредита и его обслуживания как для клиента, так и для банков», — считает Мария Батталова, управляющая филиалом Абсолют Банка в Петербурге.

В ВТБ считают, что новый механизм позволит сделать серьезный шаг в сторону цифровизации ипотечной сделки. Преимущества уже работающей процедуры электронной государственной регистрации имущества станут доступны клиентам по сделкам, в рамках которых выдается закладная: сокращенные сроки оформления, отсутствие необходимости личного посещения МФЦ и др. Кроме того, электронная закладная сведет к минимуму риски мошенничества и позволит снизить издержки банка при выдаче кредита, убеждены в ВТБ.

Пока остается бумага

Однако утверждать, что время оформления и сопровождения документации по ипотеке сократится существенно, пока преждевременно, считает аналитик ГК «ФИНАМ» Алексей Коренев. Дело в том, что множество других документов, таких как кредитный договор, договор купли-продажи, расписки и прочее, до сих пор остаются только бумажными.

Но, с другой стороны, введение электронной закладной создает условия для перехода на полностью электронный документооборот при покупке жилья в ипотеку, так как стимулирует к переводу в электронный формат и другие документы, убежден аналитик.

Электронная закладная по сути является полным аналогом обычной бумажной закладной, но более удобным в силу целого ряда причин. Во-первых, такой документ быстрее оформляется, кредитному учреждению его легче учитывать в своих базах и меньше шансов совершить ошибку при оформлении электронной закладной, так как форма ее стандартизована и ошибочные данные просто не пройдут. Во-вторых, электронную закладную невозможно потерять, так как она хранится в виде электронной записи в депозитарии банка, перечисляет Алексей Коренев.

Никаких особых трудностей, которые бы могли тормозить массовое внедрение электронных закладных, игроки рынка не видят. Единственное, с чем придется столкнуться кредитным учреждениям, – это техническая сторона вопроса, изменение программного обеспечения, обучение персонала и т. д. Но подобные расходы в будущем отобьются с лихвой, уверен Алексей Коренев.

Выделите фрагмент с текстом ошибки и нажмите Ctrl+Enter

Новости институтов развития

Согласие

Глава FDA просит провести расследование в отношении утверждения препарата Aduhelm

Временный комиссар Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США Джанет Вудкок попросила провести стороннее расследование в отношении одобрения препарата для лечения болезни Альцгеймера.
Агентство одобрило препарат Адухельм в прошлом месяце, несмотря на отсутствие доказательств того, что препарат замедляет течение болезни.
Должностные лица Biogen и FDA работали в тесном сотрудничестве, чтобы возродить препарат, что вызывает опасения.

Идет загрузка.

Высший руководитель Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США просит провести расследование спорного решения агентства утвердить новое дорогостоящее лекарство от болезни Альцгеймера.

Джанет Вудкок, исполняющая обязанности комиссара FDA, в пятницу опубликовала письмо с просьбой к главному инспектору федерального правительства расследовать, работали ли сотрудники FDA ненадлежащим образом с биотехнологической компанией Biogen для утверждения нового препарата.

«В той мере, в какой эти опасения могут подорвать доверие общественности к решению FDA, я считаю, что критически важно, чтобы рассматриваемые события были рассмотрены независимым органом, таким как Управление Генерального инспектора, чтобы определить, есть ли какие-либо взаимодействия «, которая произошла между Biogen и сотрудниками FDA по анализу, несовместима с политикой и процедурами FDA», — написала она в открытом письме.

Рассматриваемый препарат, Адухельм, был одобрен агентством в прошлом месяце и вызвал бурю негодования в научном сообществе. После этого решения трое научных консультантов агентства подали в отставку.

Подробнее: Врачи опасаются, что спорное новое лекарство от болезни Альцгеймера помешает лучшему лечению

Документы, опубликованные FDA в прошлом месяце, показывают, что люди в агентстве думали, что препарат не должен был быть одобрен из-за тестирования на людях данные не показали, что это сработало, но их опасения были отвергнуты высшим руководством.

Официальные лица Biogen использовали обратные каналы, чтобы получить одобрение препарата после того, как клинические испытания на поздней стадии провалились в марте 2019 года, согласно отчету STAT News.

Связи предшествовали Вудкоку, который стал временным комиссаром в январе, когда администрация Байдена пришла к власти. По словам биотехнологических аналитиков, она проработала в FDA более двух десятилетий и является одним из главных претендентов на постоянное занятие этой должности.

После того, как FDA одобрило Адухельм, компания Biogen установила цену около 56 000 долларов в год.По оценкам аналитиков, программа Medicare в США может платить Адухельму от 6 до 29 миллиардов долларов в год, согласно недавнему анализу New York Times.

Акции Biogen, которые выросли, когда FDA одобрило Aduhelm, упали на 3,2% до 357,09 доллара за акцию в пятницу днем.

Подробнее: Ученые приходят к неожиданному новому пониманию болезни Альцгеймера, и это может ускорить разработку лекарств для решения проблемы стоимостью 1,1 триллиона долларов

FDA пытается проверить свое одобрение препарата от болезни Альцгеймера от Eisai / Biogen

The U.В пятницу регулирующий орган S. по лекарственным средствам призвал к независимому федеральному расследованию взаимодействий между его представителями и Biogen Inc, которое привело к одобрению препарата компании против болезни Альцгеймера в прошлом месяце.

Акции фармацевтического производителя упали на 3% после того, как исполняющая обязанности комиссара агентства Джанет Вудкок обратилась в Управление генерального инспектора Министерства здравоохранения и социальных служб с просьбой выяснить, не противоречат ли переговоры политике регулирующего органа.

Biogen заявила, что будет сотрудничать с любыми запросами в связи с возможной проверкой.

Препарат Адухельм был одобрен Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) 7 июня, несмотря на серьезные возражения со стороны его экспертной консультативной группы, в результате чего трое из 11 членов были уволены.

«По-прежнему возникают опасения … относительно контактов между представителями Biogen и FDA во время процесса проверки», — сказал Вудкок в письме, опубликованном в Twitter.

Вудкок, однако, сказала, что она «чрезвычайно уверена» в честности персонала, участвовавшего в проверке препарата.

Aduhelm был одобрен, несмотря на то, что одно из двух его крупномасштабных клинических испытаний не показало пользы для пациентов.

Этот шаг был основан на доказательствах того, что он может уменьшить бляшки в головном мозге, которые, вероятно, вносят вклад в болезнь Альцгеймера, а не на доказательстве того, что он замедляет прогрессирование смертельной болезни, истощающей разум.

Аналитик Stifel Пол Маттеис сказал, что последняя разработка вряд ли повлияет на статус Aduhelm как одобренного препарата.

«Письмо доктора Вудкока, кажется, больше похоже на маневр, чтобы уменьшить давление на FDA, и оно сосредоточено вокруг характера взаимодействия / обсуждений, а не фактической сути решения об одобрении», — сказал он.

Memos, выпущенные FDA в прошлом месяце, продемонстрировали явную борьбу внутри агентства перед его спорным решением одобрить Адухельма.

После нескольких месяцев внутренних обсуждений официальные лица агентства одобрили лекарство, используя ускоренную процедуру одобрения, что потребовало исследования, чтобы подтвердить, что лекарство работает так, как задумано.

(Reuters)

Анализ белок-белкового взаимодействия выявил новую мишень TMEM17, связанную с раковыми стволовыми клетками, при колоректальном раке

Cancer Cell Int.2021; 21: 94.

, ^# ^1, ², ^# ^1, ², ^2, ³, ^1, ², ^1, ², ^1, ², ^1, ^2, ³, ^# ^2, ³ и ^# ^1, ^2, ³

Чжао-лян Юй

¹ Отделение колоректальной хирургии, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, Гуанчжоу, Гуандун, Китай

² Провинциальная ключевая лаборатория заболеваний толстой кишки и тазового дна провинции Гуандун, Шестое отделение Больница Университета Сунь Ятсена, 26 Yuancun Erheng Rd, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

Ю-фэн Чен

² Ключевая лаборатория заболеваний толстой кишки и тазового дна провинции Гуандун, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, 26 Yuancun Erheng Rd, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

Бинь Чжэн

² Ключевая лаборатория колоректального отдела провинции Гуандун и заболеваний тазового дна, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, 26 Yuancun Erheng Rd, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

³ Гуандунский институт гастроэнтерологии, Гуанчжоу, Китай

Ze-rong Cai

² Провинциальная ключевая лаборатория заболеваний толстой кишки и тазового дна провинции Гуандун, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, 26 Yuancun Erheng Rd, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

Yi-feng Zou

¹ Департамент Колоре ctal Surgery, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, Гуанчжоу, Гуандун, Китай

² Ключевая лаборатория заболеваний толстой кишки и тазового дна провинции Гуандун, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, улица Юаньцун Эрхенг, 26, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

Цзя Кэ

² Провинциальная ключевая лаборатория заболеваний толстой и прямой кишки и тазового дна провинции Гуандун, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, 26 Yuancun Erheng Rd, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

Ping Lan

² Ключевая лаборатория колоректальных заболеваний и заболеваний тазового дна провинции Гуандун, Шестая дочерняя лаборатория H больница Университета Сунь Ятсена, 26 Yuancun Erheng Rd, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

³ Гуандунский институт гастроэнтерологии, Гуанчжоу, Китай

Фэн Гао

² Провинциальная ключевая лаборатория исследования толстой кишки и тазового дна провинции Гуандун , Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, 26 Yuancun Erheng Rd, Гуанчжоу, 510655 Гуандун, Китай

³ Гуандунский институт гастроэнтерологии, Гуанчжоу, Китай

Сяо-цзянь

¹ Отделение колоректальной хирургии, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, Гуанчжоу, Гуандун Китай

³ Гуандунский институт гастроэнтерологии, Гуанчжоу, Китай

90 072 1 Отделение колоректальной хирургии, Шестая дочерняя больница Университета Сунь Ятсена, Гуанчжоу, Гуандун, Китай

³ Гуандунский институт гастроэнтерологии, Гуанчжоу, Китай

Автор, отвечающий за переписку.

^# Внесено поровну.

Поступило 22.10.2020 г .; Принята 27 января 2021 года.

Открытый доступ Эта статья находится под международной лицензией Creative Commons Attribution 4.0, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или любом формате при условии, что вы надлежащим образом укажете оригинал Автор (ы) и источник предоставляют ссылку на лицензию Creative Commons и указывают, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной линии для материала.Если материал не включен в лицензию Creative Commons для статьи и ваше предполагаемое использование не разрешено законодательными актами или превышает разрешенное использование, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Отказ Creative Commons Public Domain Dedication (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) распространяется на данные, представленные в этой статье, если иное не указано в кредитной линии для данных.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Дополнительные материалы

Дополнительный файл 1: Рисунок S1. ( A ) Иммуноблоттинг-анализ экспрессии TMEM17 в панели клеток CRC. ( B ) Иммуноблоттинг-анализ экспрессии TMEM17 после истощения TMEM17 siRNA в нормальных клетках слизистой оболочки толстой кишки. ( C ) Репрезентативные изображения 48 ч после обработки нормальных клеток слизистой оболочки толстой кишки si-TMEM17 в прилипшей культуре. ( D ) Клоногенный анализ клеток CRC с истощением TMEM17 в период культивирования от 8 до 10 дней.

GUID: 17BBDCA4-5883-45B1-A425-F6AC31AEB90F

Дополнительный файл 2: Таблица S1. Анализ пути HALLMARK геномных профилей пациентов в наборе данных CIT.

GUID: B720A2E8-A15A-40E2-B87B-F45694CE9998

Дополнительный файл 3: Таблица S2. Характеристики пациентов базы данных микрочипов тканей.

GUID: F1994B38-7FED-4896-B6B7-26C9E7125CAF

Заявление о доступности данных: Наборы данных, сгенерированные и проанализированные в ходе текущего исследования, доступны в базе данных GEO (CIT / {«type»: «entrez -geo «,» attrs «: {» text «:» GSE39582 «,» term_id «:» 39582 «}} GSE39582, https: // www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc={«type»:»entrez-geo»,»attrs»:{«text»:»GSE39582″,»term_id»:»39582 «} } GSE39582) и Портал общих данных геномных данных (TCGA CRC, https://portal.gdc.cancer.gov/).

Реферат

Предпосылки

Раковые стволовые клетки (РСК) представляют собой небольшую субпопуляцию клеток в опухолях со свойством стволовых клеток. Все больше данных свидетельствуют о том, что ОСК могут быть ответственны за химиорезистентность и рецидивы колоректального рака (CRC). Однако надежной терапевтической мишени на РСК все еще нет.

Методы

Здесь мы описываем двухэтапную стратегию для создания мишеней CSC с высокой селективностью в отношении маркеров стволовых клеток толстой кишки, были отобраны специфические белки, которые взаимодействуют с маркерами CSC, и впоследствии подтверждены в анализе выживаемости. Был обнаружен белок TMEM17, и его биологические функции в клетках CRC были дополнительно изучены. Наконец, мы использовали анализ обогащения набора генов (GSEA), чтобы исследовать потенциальные механизмы TMEM17 в CRC.

Результаты

Объединив базу данных белок-белковых взаимодействий (PPI) и высокопроизводительные профили генов, сетевой анализ выявил кластер генов, связанных с РСК толстой кишки.В кластере TMEM17 был идентифицирован как новый ген, связанный с РСК. Результаты функционального исследования in vitro продемонстрировали, что истощение TMEM17 может подавлять пролиферацию клеток CRC и повышать чувствительность клеток CRC к химиотерапевтическим препаратам. Обогащающий анализ показал, что экспрессия TMEM17 связана с величиной активации пути Wnt / β-катенин. Дальнейшая проверка на клинических образцах продемонстрировала, что экспрессия TMEM17 была намного выше в опухоли, чем в нормальной ткани, и была связана с плохой выживаемостью у пациентов с CRC.

Заключение

В совокупности наши открытия раскрывают критическую роль TMEM17 в CRC, а TMEM17 может быть потенциальной эффективной терапевтической мишенью для рецидива опухоли и химиорезистентности при колоректальном раке (CRC).

Ключевые слова: Колоректальный рак, стволовые раковые клетки, TMEM17, химиорезистентность, белок-белковое взаимодействие

Введение

Колоректальный рак (CRC) является одним из наиболее распространенных типов рака в мире. Недавнее статистическое исследование показало, что в 2018 году во всем мире было выявлено более миллиона новых случаев CRC [1].Хотя успехи в лечении CRC улучшили исход заболевания, рецидив опухоли и химиорезистентность остаются основными причинами неудач терапии [2, 3]. Центральная часть раковых клеток с высокой устойчивостью к лечению, называемая «раковые стволовые клетки» (РСК), может быть ответственна за эти неудачи лечения. В соответствии с этой гипотезой, исследования открыли маркеры стволовых клеток, включая LGR5, CD24, CD44, EPCAM, CD133, на небольшой части популяции CRC [4–11]. Кроме того, эта популяция РСК с высокой химиотерапевтической устойчивостью проявляет свойства стволовых клеток, включая самообновление и образование зрелых дифференцированных раковых клеток [12, 13].Эти данные свидетельствуют о том, что популяция CSC может быть потенциальной целью для лечения CRC, поэтому необходимо изучить его практическую ценность в клинике.

Поскольку большое количество геномных профилей пациентов было собрано в общедоступных наборах данных, к которым нет доступа, высокопроизводительный анализ данных стал новым эффективным и экономичным методом исследования рака [14]. В этом исследовании мы обнаружили кластер белков, связанных с раковыми стволовыми клетками, с помощью систематического сетевого анализа и анализа взаимодействия белков.Среди этих белков TMEM17 тесно связан с маркерами стволовых клеток рака толстой кишки. TMEM17 принадлежит к семейству трансмембранных (TMEM) белков, которые участвуют во многих патологических процессах развития рака, таких как локальная инвазия, образование метастазов и интравазация [15, 16]. Сообщалось о разнообразных функциях члена семейства TMEM17, например, TMEM48, TMEM45A и TMEM97 были описаны как потенциальные прогностические биомаркеры рака, TMEM16A был связан с регуляцией кальция, а TMEM173, как сообщалось, контролировал иммунный ответ при канцерогенезе [16–18].

Насколько нам известно, всего несколько исследований показали, что TMEM17 связан с развитием рака. Один заявил, что TMEM17 является проонкогенным белком при раке груди, а другой заявил, что TMEM17 является антионкогенным белком при раке легких [19, 20]. До сих пор неизвестно, почему TMEM17 продемонстрировал эти противоречивые эффекты и каково его влияние на другие типы рака, такие как CRC. В этом исследовании мы описываем двухэтапную стратегию для создания мишеней CSC с высокой селективностью в отношении маркеров стволовых клеток толстой кишки, были отобраны специфические белки, связанные с маркерами CSC, и впоследствии подтверждены в анализе выживаемости.TMEM17 был обнаружен в процессе отбора, и его биологические функции были дополнительно исследованы в клеточных линиях CRC. Результаты продемонстрировали, что истощение TMEM17 увеличивает чувствительность химиотерапевтических препаратов и подавляет передачу сигналов Wnt / β-катенин. Взятые вместе, наше исследование определяет важную роль TMEM17 в раке толстой кишки и выясняет потенциальную мишень раковых стволовых клеток для сенсибилизации химиотерапии.

Методы

Пациенты

Мы ретроспективно проанализировали профили экспрессии генов замороженных образцов ткани опухоли колоректального рака из одного из крупнейших наборов индивидуальных данных: CIT / {«type»: «entrez-geo», «attrs»: {» text «:» GSE39582 «,» term_id «:» 39582 «}} GSE39582 Когорта CRC.Набор данных был получен непосредственно в обработанном формате из базы данных GEO с помощью пакета Bioconductor «GEOquery». Все пациенты были включены в это исследование. Пакетные эффекты были скорректированы с использованием «боевого» алгоритма, реализованного в R-пакете «sva», и z-значения для каждого гена использовались для следующих анализов. При необходимости тщательно проверялись как бумажные карты, так и электронные медицинские карты.

Построение и анализ сети белок-белковых взаимодействий

Чтобы найти потенциальные терапевтические мишени на РСК толстой кишки, девять маркеров стволовых клеток толстой кишки, выбранных из предыдущих исследований, были использованы для построения сети белок-белковых взаимодействий (ИПП), связанной с РСК толстой кишки (Таблица ).Информация о взаимодействии этих белков была получена из базы данных BioGRID (версия 3.5.168) [21, 22]. Чтобы изучить связь химиотерапевтической чувствительности, 232 пациента с химиотерапией и полной прогностической информацией в когорте CIT ({«type»: «entrez-geo», «attrs»: {«text»: «GSE39582», «term_id»: » 39582 «}} GSE39582) использовались в качестве набора данных обнаружения [23]. Чтобы получить гены, связанные с прогнозом колоректального рака, и избежать влияния распределения выборки, соответствующие гены, полученные в результате анализа PPI, были дополнительно исследованы с использованием лог-рангового теста с 1000-кратной рандомизацией (80% часть выборки каждый раз) для оценки ассоциации. между каждым геном и выживаемостью пациентов без болезней в когорте открытия.Гены со значительной частотой, обнаруженные более чем в 500 раз в повторных лог-ранговых тестах, были идентифицированы как ключевые гены.

Таблица 1

Список маркеров стволовых клеток рака толстой кишки

Ген	Другое название	Функция	Ссылки
Lgr5	Сигнальный ген GPR49	Wnt , 38–40]
ALDh2A1	ALDC, ALDh2	Фермент	[7]
CD24	CD24A	Молекула клеточной адгезии
Молекула клеточной адгезии	[8]
CD44	CDW44	Молекула клеточной адгезии, рецептор гиалуроновой кислоты	[5, 8, 9]
CD133	Самостоятельное обновление 1 , Ангиогенез опухоли	[6, 8]
CD166	ALCAM	Молекула клеточной адгезии	[8]
EPCAM	ESA, MK-1	Молекула клеточной адгезии	[9]
MSI1	Musashi-1	РНК-связывающий протеин	[10, 11]

36

Когорта CIT, один из крупнейших наборов индивидуальных данных по колоректальному раку, была использована для подтверждения потенциальной терапевтической ценности TMEM17.Экспрессия TMEM17 была проанализирована в 17 образцах рака и его парных нормальных тканях, в то время как данные других 566 пациентов были использованы для проведения прогностического анализа. Оптимальная точка отсечения экспрессии TMEM17 была определена на основе информации о безрецидивной выживаемости (DFS) этих пациентов с использованием функции «Surv_cutpoint» из пакета R «Survminer».

Короткая интерферирующая РНК

Используемая последовательность миРНК TMEM17 si TMEM17 # 1: GCAGCATTATGAT GCTTCA; si TMEM17 # 3: GGTCATGTATAGAAGAGAT.Набор Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen) использовали для трансфекции миРНК в соответствии с инструкциями производителя. Клетки трансфицировали конечной концентрацией дуплексов миРНК 100 нМ при оптимальной плотности посева. Через 24 часа клетки повторно засевали для следующих экспериментов.

RT-количественная ПЦР

Общая РНК была выделена с использованием реагента TRIzol (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) и RNeasy Mini Kit (Qiagen, Германия), а затем подвергнута обратной транскрипции в кДНК с использованием набора для синтеза кДНК (Transgen Biotech, Китай). ).ОТ-ПЦР выполняли с использованием набора KAPA SYBR Fast qPCR (KAPA Biosystems, Wilmington, MA). Для количественной оценки уровней мРНК в качестве внутреннего контроля использовали уровень 18S . Специфические праймеры, использованные для TMEM17 , были: 5′-GTTCAGTGATTCCAATCGGACC-3 ‘; 3’- ACCACAGTGGGAA ATAGTAGGT-5 ’.

Иммуноблоттинг

Клетки собирали и лизировали в буфере RIPA с добавлением ингибиторов протеаз и фосфатаз в течение 30 мин. Равные количества белкового экстракта разделяли на SDS-полиакриламидных гелях и переносили на поливинилдифторидные (PVDF) мембраны.Мембраны блокировали 5% BSA в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем зондировали первичным антителом в течение ночи при 4 ° C. Используемые антитела были анти-TMEM17 (Санта-Крус, Калифорния; sc-514433), анти-EPCAM (Beyotime, Китай; AF0141), анти-LGR5 (Abcam, Великобритания; ab75850), анти-MYC (Abcam, Великобритания; ab32072). , анти-виментин (Cell Signaling Technology, США; № 5741), анти-Snail (Cell Signaling Technology, США; № 3879) и анти-GAPDH (Cell Signaling Technology, США; № 5174).

Анализ пролиферации клеток

Для проведения анализа пролиферации клеток оптимальные клетки высевали в трех экземплярах в 96-луночном формате.Через 24 часа среду обновляли оптимальной лекарственной обработкой. Затем клетки лизировали с помощью CellTilter-Glo (CTG, Promega, Madison, WI), и сигнал флуоресценции детектировали с помощью ридера для микропланшетов в дни 0, 2, 3, 4 и 5.

Анализ образования колоний и анализ образования опухолевых сфер

Для проведения клоногенного анализа оптимальные клетки высевали в 6-луночные планшеты и обновляли среду каждые 3 дня при 37 ℃. Колонии образовывались после 8-10 дней культивирования. Колонии фиксировали метанолом и окрашивали кристаллическим фиолетовым (0.5% кристаллический фиолетовый, 20% метанол).

Для проведения анализа опухолевых сфер одноклеточные суспензии высевали (5000 клеток / лунку) в 12-луночные планшеты с ультранизким креплением со средой Mammocult (Stem Cell Technologies), в которую добавлен свежий гидрокортизон (0,5 мкг / мл). и гепарин (1: 500) и культивирование в инкубаторе при 37 ℃ 5% CO ₂. Среду обновляли каждые 3 дня, и опухолевые сферы формировались после 7–10 дней культивирования. Сферы выделяли и окрашивали 2- (4-иодфенил) -3- (4-нитрофенил) 5-фенил-2H-тетразолийхлоридом (INT) (Sigma-Aldrich) и определяли количественно.

Для создания резистентных к оксалиплатину клеток клетки DLD1 выращивали в среде, дополненной увеличивающейся концентрацией оксалиплатина в течение периода культивирования. Концентрация оксалиплатина в среде увеличивалась каждые три пассажа до тех пор, пока клетки не стали к ней полностью устойчивы. Клетки, устойчивые к оксалиплатину, проверяли клоногенным анализом.

Плазмидные конструкции и сконструированные клеточные линии

TMEM17 полной длины амплифицировали с помощью RT-PCR с использованием 100 нг общей РНК из клеток HEK293 и следующих праймеров: 5′-ATGGAGCTGCCGGATCCGGT-3 ‘и 5′-TCAGATCTCTTCTATACATG-3’.Продукт ПЦР клонировали в pCMV / GFP для исследований сверхэкспрессии. После отбора с помощью пуромицина (5 мкг / мл) полученные клоны подвергали скринингу для экспериментов.

Анализ пути

Анализ обогащения выполняли для дифференциально экспрессируемых генов между группами с высокой и низкой экспрессией TMEM17 с использованием пакета R «gProfileR» в наборе данных CIT. Точка отсечения высокой / низкой экспрессии TMEM17 была определена на основе оптимальной точки отсечения в анализе выживаемости без признаков заболевания (DFS) в CIT.Для заинтересованных биологических путей дополнительно был проведен анализ обогащения генетического набора (GSEA) с использованием пакета Bioconductor «HTSanalyzeR» [24, 25].

Микроматрица тканей и иммуногистохимическое окрашивание

В это исследование были включены в общей сложности 318 пациентов с КРР с pTNM стадии I – III с января 2002 г. по июнь 2006 г., а патологические образцы были сконструированы на тканевом микрочипе (ТМА). Стадия опухоли оценивалась в соответствии с критериями стадии седьмого издания Американского объединенного комитета по раку (AJCC) [26].Клинико-патологические данные были собраны из базы данных CRC отделения последующего наблюдения и одобрены институциональным наблюдательным советом Шестой дочерней больницы Университета Сунь Ятсена.

Залитые в парафин образцы ткани разрезали на срезы размером 5 мкм и извлечение антигена выполняли с цитратным буфером (Beyotime, Китай; P0081). После блокирования 10% козьей сывороткой образцы инкубировали с первичным антителом в течение ночи при 4 ° C с последующим окрашиванием диаминобензидином. Окрашивание ИГХ оценивали полуколичественным методом, как описано ранее [27].Каждое пятно ТМА было помечено баллом интенсивности, и процент положительных опухолевых клеток оценили от 1 до 4. Баллы ТМА определяли путем умножения показателя интенсивности на пропорцию балла площади. Окончательная оценка была рассчитана как среднее значение дуплекса. Оптимальная точка отсечения экспрессии TMEM17 была определена на основе программного обеспечения X-tile (X-tile 3.6.1) [28].

Статистический анализ

Графики были представлены как среднее значение ± SD из трех независимых экспериментов.Статистическую разницу между двумя группами оценивали с помощью двустороннего теста Стьюдента t или с помощью двустороннего дисперсионного анализа для нескольких групп. Кривые выживаемости оценивали с помощью лог-рангового теста (Мантела-Кокса). P -значения <0,05 считались статистически значимыми.

Результат

Анализ сети белок-белкового взаимодействия идентифицировал TMEM17 как связанный с CSC маркер

Для поиска потенциальных терапевтических мишеней на CSC толстой кишки была построена сеть PPI на основе списка маркеров стволовых клеток толстой кишки (рис.стол ). Всего с помощью анализа PPI было найдено 683 записи, содержащие 276 различных белков. Соответствующие гены этих 276 белков были проверены с использованием лог-рангового теста для оценки взаимосвязи между каждым геном и выживаемостью пациентов без болезней в наборе данных CIT. Одиннадцать генов были идентифицированы и занесены в список на основе значимой частоты в анализах выживаемости при повторной выборке и дополнительно отфильтрованы по среднему значению P (рис. B, таблица). Среди этих генов функция TMEM17 в развитии CSC неизвестна, и о его влиянии на развитие CRC еще не сообщалось.Анализ экспрессии мРНК TMEM17 показал, что в опухолевой ткани была обнаружена повышенная экспрессия по сравнению с соседней нормальной тканью (фиг. C). Кроме того, повышенная экспрессия TMEM17 была связана с рецидивом опухоли и плохой выживаемостью (рис. D, e). Этот результат показал, что это может быть новый биомаркер для прогнозирования прогноза CRC.

Сеть PPI и анализ выживаемости идентифицировали TMEM17 как ген, связанный с CSC. сеть PPI из девяти маркеров стволовых клеток толстой кишки.Размер узла равен -log2 преобразованным средним значениям P в 1000 рандомизационных лог-ранговых тестах. Цвет узла представляет собой частоту, рассчитанную как количество раз, когда соответствующий ген значительно ассоциировал с выживаемостью в том же анализе. Узлы с метками представляют ключевые гены, относящиеся к CSC (частота> 500). Края представляют собой физические ИПП между белками, полученные из базы данных BioGRID. b Достоверная частота 11 генов, связанных с CSC, в анализе выживаемости (лог-ранговый тест, P <0.05; частота> 500). с
Экспрессия TMEM17 значительно выше в образцах CRC, чем в парной нормальной ткани толстой кишки ( P = 0,002). d , e Анализ выживаемости Каплана-Мейера показал, что высокая экспрессия TMEM17 значимо коррелировала с рецидивом опухоли ( d ) и короткой общей выживаемостью ( e )

Таблица 2

Белки, связанные с маркером стволовых клеток

9034

TMEM17

9034

Трансмембранный белок

9034 9034

NologN

Nolog3

Ген	Полное имя	Частота повторной выборки
CD63	Молекула CD63	979
TMEM17		TMEM17 MC7 компонент комплекса обслуживания 2	952
CAV1	Caveolin 1	891
GLIS2	Цинковый палец семейства GLIS 2	849
9034 9034 9034 9034 9034 9034 9034 9034 9034 9034 9034	LATS2	Супрессор больших опухолей киназа 2	732
ANGPT2	Ангиопоэтин 2	727
ECSIT	Интегратор передачи сигналов ECSIT	711
RP134 Nolog3	Связывание	NologN
FGF2	Фактор роста фибробластов 2	699

Генетическое истощение TMEM17 подавляет пролиферацию клеток в CRC

Чтобы исследовать биологическую функцию TMEM17 в раковых клетках, мы обнаружили экспрессию TMEM17 в панели линий клеток CRC ( 1: Рисунок S1) и отобранные линии клеток с высокой экспрессией для генетического истощения с использованием миРНК.Эффект истощения подтверждался с помощью RT-qPCR и анализа иммуноблоттинга (рис. A, b). Значительное снижение образования колоний и пролиферации клеток было обнаружено, когда клетки были трансфицированы siRNA TMEM17 (рис. C, d). Для исследования биологической функции TMEM17 в нормальных клетках были отобраны две нормальные клеточные линии слизистой оболочки толстой кишки (NCM460 и HIEC6) для генетического истощения TMEM17 с помощью siRNA. Результаты показывают, что подавление экспрессии TMEM17 практически не влияет на пролиферацию нормальных клеток слизистой оболочки толстой кишки (дополнительный файл 1: Рисунок S1B – D).Эти результаты предполагают, что TMEM17 играет решающую роль в пролиферации клеток рака толстой кишки и может быть потенциальной терапевтической мишенью CRC.

Истощение TMEM17 подавляло пролиферацию клеток CRC. a , b Эффективность трансфекции после истощения TMEM17 siRNA в клетках CRC тестировали с помощью RT-PCR ( a ) и иммуноблоттинга ( b ). c Репрезентативные изображения 48 ч после обработки клеток CRC si-TMEM17 в прилипшей культуре.Полоса = 200 мкм. d Кривые роста клеток CRC с истощением TMEM17 за период 5 дней культивирования. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, T-критерий Стьюдента ( a ), однофакторный дисперсионный анализ ANOVA ( d ), по сравнению с контрольной группой

Targeting TMEM17 повысил чувствительность химиотерапевтических препаратов в CRC

Неудача химиотерапии является одной из важнейших причин рецидива опухоли у пациентов с CRC II – III стадий. Следовательно, повышение чувствительности химиотерапевтических препаратов является потенциальной терапевтической стратегией лечения CRC.Чтобы исследовать потенциальную фармакологическую ценность TMEM17, клетки обрабатывали химиотерапевтическими препаратами после трансфекции миРНК. Скорость пролиферации клеток была значительно подавлена в клетках, трансфицированных TMEM17 siRNA, обработанных противоопухолевыми лекарственными средствами, по сравнению с клетками, получавшими только лекарственную обработку. Выбор препарата, ни 5-Фу, ни оксалиплатин не повлияли на этот результат (рис. А, б). В соответствии с этими данными, si-TMEM17 увеличивал чувствительность к обработке 5-Fu и оксалиплатином в системе долговременного культивирования клеток (рис.в).

Таргетинг на TMEM17 повысил чувствительность химиотерапевтических препаратов при CRC. a Кривые роста клеток CRC с истощающей обработкой TMEM17 и 5-Fu за период 5 дней культивирования. b Кривые роста клеток CRC при истощении TMEM17 и обработке оксалиплатином в течение 5 дней культивирования. c Клоногенный анализ клеток CRC с истощением TMEM17 и обработкой 5-Fu / оксалиплатином в период культивирования от 8 до 10 дней. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0.001, двусторонний дисперсионный анализ ANOVA ( a )

Таргетинг на TMEM17 супрессивную характеристику CSC в клетках CRC

Чтобы проверить функциональную важность TMEM17 в CSC, клетки рака толстой кишки культивировали в бессывороточной среде для изучения образования сфер. Истощение TMEM17 значительно подавляло образование сфер (рис. А) и увеличивало чувствительность химиотерапевтических препаратов (рис. Б, в). Примечательно, что маркеры CSC, включая EPCAM и LGR5, были подавлены в клетках, трансфицированных si-TMEM17, и были активированы после избыточной экспрессии TMEM17 в клетках RKO (рис.г). Мы также исследовали экспрессию TMEM17 при культивировании клеток в различных питательных средах. TMEM17 был увеличен в культуре опухолевых сфер, что сопровождалось повышенной экспрессией маркеров CSC (фиг. E). Одна из хорошо известных гипотез химиорезистентности заключается в том, что РСК ускользают от убийства химиотерапевтических препаратов и образуют новую популяцию устойчивых к лекарствам раковых клеток [29, 30]. В соответствии с этой гипотезой, TMEM17 был активирован в клетках, резистентных к оксалиплатину DLD1. Это наблюдение показало, что TMEM17 может быть важным фактором при переключении клеток с лекарственной чувствительности на резистентность.Вместе эти данные показывают, что экспрессия TMEM17 связана с развитием CSCs толстой кишки, и нацеливание на TMEM17 может помочь повысить эффективность химиотерапии.

Нацеливание TMEM17 подавляет характеристику CSC в ячейках CRC. a Генное истощение TMEM17 уменьшало образование сфер раковых клеток, n = 3. Полоса = 400 мкм. b Анализ образования опухолевых сфер клеток CRC с истощающей обработкой TMEM17 и 5-Fu, n = 3. c Анализ образования опухолевых сфер клеток CRC с истощающей TMEM17 и обработкой оксалиплированием, n = 3. d Иммуноблоттинг-анализ экспрессии белков TMEM17, EPCAM и LGR5 из клеток CRC со скремблированием или TMEM siRNA. (Слева) Иммуноблоттинг-анализ экспрессии белков TMEM17, EPCAM и LGR5 из клеток CRC с вектором или TMEM17. (Справа) e Иммуноблоттинг-анализ экспрессии белков TMEM17, EPCAM и LGR5 из клеток CRC с прилипшей культурой или культурой опухолевых сфер. f Клоногенный анализ клеток устойчивости к оксалиплатину DLD1 и DLD1. г Иммуноблоттинг клеток с резистентностью к оксалиплатину DLD1 и DLD1.Планки погрешностей представляют ± SD. ** P <0,01, * P <0,05, T-тест парной выборки ( a — c )

CSC, связанные с TMEM17, были связаны с передачей сигналов Wnt / β-catenin

Чтобы найти лежащий в основе механизма TMEM17 опосредованного развития CSC, анализ путей проводился с геномными профилями пациентов в наборе данных CIT. Результат предположил, что высокая экспрессия TMEM17 была связана с активным эпителиальным мезенхимальным переходом, передачей сигналов Wnt / β-катенин и передачей сигналов TGF β (рис.a, Дополнительный файл 2: Таблица S1). Среди этих сигнальных путей передача сигналов Wnt / β-catenin, которая, как известно, регулирует активацию и дифференцировку опухолевых инициирующих клеток [31–34], была обогащена у пациентов с высоким уровнем TMEM17 и (Fig. A – c). Результаты анализа иммуноблоттинга продемонстрировали, что истощение TMEM17 подавляло некоторые производители передачи сигналов Wnt / β-catenin (рис. D). Таким образом, эти маркеры были активированы после избыточной экспрессии TMEM17 в клетках RKO (фиг. D). Кроме того, пациенты с высокой экспрессией TMEM17 показали значительное обогащение наборов генов стволовых клеток (рис.д). Эти данные позволяют предположить, что TMEM17 может быть положительным регулятором развития РСК.

Анализ обогащения пути между группами дифференциальной экспрессии TMEM17. a GSEA выявил в когорте CIT в когорте отличительных путей рака значительно дисрегулируемые пути. Десять основных путей были отобраны для представления по абсолютной оценке обогащения (положительный балл — зеленый, отрицательный — красный). b GSEA-график передачи сигналов Hallmarks Wnt / β-катенин в когорте CIT. c GSEA-график передачи сигналов Willert Wnt в когорте CIT. d Иммуноблоттинг-анализ экспрессии TMEM17 и нескольких белков сигнальных маркеров Wnt из клеток CRC со скремблированием или TMEM siRNA. (Слева) Иммуноблоттинг экспрессии TMEM17 и нескольких белков-маркеров Wnt из клеток CRC с вектором или TMEM17. (Справа) и GSEA-график передачи сигналов стволовых клеток Boquest и сигналов стволовых клеток глиомы Бейера в когорте CIT

TMEM17 активирован в CRC и связан с плохой выживаемостью CRC

Основываясь на функциональных исследованиях TMEM17, мы предположили, что Активность TMEM17 может влиять на клинический исход пациентов с CRC.Мы построили тканевый микрочип, содержащий большую группу пациентов с CRC, и протестировали экспрессию TMEM17 (рис. А, дополнительный файл 3: таблица S2). Повышенная экспрессия TMEM17 была обнаружена в опухолевой ткани по сравнению с нормальной тканью. Кроме того, группа с высоким уровнем TMEM17 была связана со значительно более низкой выживаемостью по сравнению с группой с низким уровнем TMEM17 (рис. B, c). Анализ выживаемости показал, что 10-летняя выживаемость составила 64% в группе с низким TMEM17 и 48% в группе с высоким TMEM17 (P = 0.037).

TMEM17 имеет повышенную регуляцию CRC и связано с плохой выживаемостью CRC. a Репрезентативное иммунохимическое окрашивание TMEM17 в CRC и нормальной ткани толстой кишки. Масштабная линейка представляет 100 мкм. b Анализ тканевого микрочипа экспрессии TMEM17 в CRC и нормальной ткани толстой кишки. Планки погрешностей представляют ± SD. *** P <0,001, двусторонний непарный t-критерий Стьюдента. c Высокая экспрессия TMEM17 была связана с плохой общей выживаемостью у пациентов с CRC.

Обсуждение

Считается, что

CSC обладают высокой химиорезистентностью и играют ключевую роль в качестве клеток-инициаторов опухоли в рецидиве рака после химиотерапии [35].Однако не существует эффективной стратегии нацеливания на CSC в клиническом применении, основная причина заключается в том, что действительная мишень для CSC еще не подтверждена [36, 37]. Это исследование направлено на поиск потенциальной терапевтической мишени на CSC с использованием метода анализа больших данных. Был обнаружен кластер потенциальных белков-мишеней, сочетающий базу данных белок-белковых взаимодействий (PPI) и профили генов с высокой пропускной способностью. Среди этих белков был выбран белок TMEM 17, который дополнительно исследовали на предмет его биологических функций в клетках CRC.

Существование CSC было предложено несколько десятилетий назад. Хотя все больше исследований находят доказательства, подтверждающие теорию CSC, их усилия все еще сталкиваются с фундаментальным скептицизмом, что многие до сих пор сомневаются, являются ли CSC отдельной популяцией опухолевых клеток и участвуют ли CSC в рецидиве всех типов рака [37]. В CRC серия исследований по отслеживанию клонов подтвердила, что популяция клеток LGR5 ⁺ обладает способностью подвергаться дифференцировке в разных моделях [38-40]. Эти исследования подтверждают, что CRC состоит из гетерогенных популяций клеток, включая небольшую часть CSC.В настоящее время большинство стратегий борьбы с CSCs основано на нацеливании на маркеры стволовых клеток или ингибировании передачи сигналов соответствующего пути, такого как антигены против CSCs и ингибиторы Wnt [41]. В этом исследовании мы выполнили анализ PPI с использованием выбранных маркеров CSC и обнаружили, что TMEM17 может быть потенциальной мишенью для CSC.

Сети PPI человека в масштабе генома представляют собой полезные системы, которые могут помочь найти кластеры генов с одинаковыми характеристиками и предоставить больше потенциальных мишеней для лечения рака [42].Сетевой анализ PPI оказался надежным инструментом для интерпретации функции многочисленных генов, связанных с развитием рака и аутизма [42]. Увеличивающееся количество исследований, использующих анализ ИПП в исследованиях рака, указывает на то, что это потенциальный метод для открытия новых терапевтических целей [43, 44]. Здесь мы построили сеть PPI с использованием девяти маркеров CSC толстой кишки и обнаружили кластер значимых целей. Большинство этих генов были связаны с ОСК, например CD63 [45], MCM2 [46], CAV1 [47], GLIS2 [48], CDC20 [49, 50], LATS2. [51] и FGF2 [52, 53].Интересно, что TMEM17 , являющийся вторым по частоте повторной выборки маркером в анализе выживаемости, еще не был зарегистрирован как маркер CSCs, и его патологическая функция в других опухолях, как было обнаружено, противоречит [19, 20]. Следовательно, это заслуживает расследования.

Анализ PPI — многообещающий метод обнаружения терапевтических целей из-за его высокой эффективности, но он также подвержен ограничениям биоинформатического анализа. Несмотря на то, что мы провели серию экспериментов in vitro для подтверждения патологической функции TMEM17, эти ограничения нельзя было полностью игнорировать.Во-первых, хотя мы анализировали прогностическую информацию из общедоступной базы данных и использовали большую когорту образцов пациентов с CRC, эксперименты in vitro с использованием первичных парных образцов ткани отсутствовали. Во-вторых, наши результаты показывают, что истощение TMEM17 может ингибировать пролиферацию CSCs путем подавления передачи сигналов Wnt / β-catenin, но лежащие в основе механизмы все еще неясны и нуждаются в уточнении в будущем.

В заключение, мы выполнили анализ PPI на основе производителей CSC толстой кишки и обнаружили новый ген, связанный с CSC TMEM17 .Исследуя биологическую функцию TMEM17 в клетках CRC, мы обнаружили, что TMEM17 может вносить вклад в пролиферацию популяции CSC внутри клеток CRC. Эти данные предполагают, что TMEM17 может быть потенциальной эффективной терапевтической мишенью для рецидива опухоли и химиорезистентности при колоректальном раке (CRC).

Дополнительная информация

Вклад авторов

XJW руководил проектом и участвовал в разработке и интерпретации всех экспериментов.ZLY, YFC и FG внесли свой вклад в разработку, проведение и интерпретацию всех экспериментов. ZLY и ZRC выполнили подготовку образцов опухоли, нокдаун генов и анализы опухолевых сфер. ZLY и YFC провели вестерн-блоттинг. FG выполнила биоинформатический и статистический анализ. YFC, JK, YFZ и PL способствовали сбору образцов пациентов и клинической информации, а также проводили иммуногистохимическое окрашивание. ZLY, BZ, FG и XJW написали рукопись при участии всех соавторов. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Финансирование

Эта работа была поддержана Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (№ 2017YFC1308800), Национальной ключевой клинической дисциплиной, Национальным фондом естественных наук Китая (№ 81972212, № 82002221, FG), Фондом естественных наук провинции Гуандун ( № 2017A030310517, № 2019A1515010063, № 2018A030310268), Проект планирования науки и технологий города Гуанчжоу (№ 201803040019) и Фонд медицинской науки и технологий провинции Гуандун (№ A2018274).

Утверждение этических норм и согласие на участие

Это исследование было одобрено институциональным наблюдательным советом (IRB) Шестой дочерней больницы Университета Сунь Ятсена.

Согласие на публикацию

Все авторы прочитали и утвердили окончательный вариант рукописи. Авторы заявили об отсутствии финансового конфликта интересов.

Конкурирующие интересы

Авторы заявили об отсутствии финансового конфликта интересов.

Сноски

Примечание издателя

Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и филиалов организаций.

Чжао-лян Юй и Ю-фэн Чен внесли равный вклад в это исследование

Фэн Гао и Сяо-цзянь Ву являются соавторами-соавторами

Дополнительная информация

Онлайн-версия содержит дополнительные материалы, доступные по адресу 10.1186 / s12935-021-01794-2.

Ссылки

1. Брей Ф., Ферли Дж., Сурджоматарам И., Сигель Р.Л., Торре Л.А., Джемаль А. Глобальная статистика рака 2018: оценки GLOBOCAN заболеваемости и смертности от 36 раковых заболеваний в 185 странах во всем мире. CA Cancer J Clin. 2018; 68 (6): 394–424. DOI: 10.3322 / caac.21492. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Марин Дж. Дж., Санчес де Медина Ф, Кастано Б., Буханда Л., Ромеро М. Р., Мартинес-Огюстин О., Морал-Авила Р. Д., Бриз О. Химиопрофилактика, химиотерапия и химиорезистентность при колоректальном раке.Drug Metab Rev.2012; 44 (2): 148–172. DOI: 10.3109 / 03602532.2011.638303. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Taieb J, Kourie HR, Emile JF, Le Malicot K, Balogoun R, Tabernero J, Mini E, Folprecht G, Van Laethem JL, Mulot C и др. Связь прогностической ценности локализации первичной опухоли при раке толстой кишки III стадии с мутационным статусом RAS и BRAF. JAMA Oncol. 2018; 4 (7): e173695. DOI: 10.1001 / jamaoncol.2017.3695. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. де Соуза и Мело Ф., Куртова А.В., Харносс Дж. М., Клявин Н., Хук Дж. Д., Хунг Дж., Андерсон Дж. Э., Сторм Э. Э., Модрусан З., Кёппен Х. и др.Особая роль стволовых клеток Lgr5 (+) в первичном и метастатическом раке толстой кишки. Природа. 2017; 543 (7647): 676–680. DOI: 10,1038 / природа21713. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Охата Х., Исигуро Т., Айхара Й., Сато А., Сакаи Х., Секин С., Танигучи Х., Акасу Т, Фудзита С., Накагама Х. и др. Индукция регулятора стволовых клеток CD44 посредством ингибирования Rho-киназы способствует поддержанию клеток, инициирующих рак толстой кишки. Может Res. 2012. 72 (19): 5101–5110. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-11-3812. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6.Фанг Д.Д., Ким Й.Дж., Ли С.Н., Аггарвал С., Маккиннон К., Месмер Д., Нортон Дж., Бирс К.Э., Хе Т, Рубен С.М. и др. Расширение CD133 (+) культур рака толстой кишки, сохраняющих свойства стволовых клеток, что делает возможным открытие мишеней для раковых стволовых клеток. Br J Рак. 2010. 102 (8): 1265–1275. DOI: 10.1038 / sj.bjc.6605610. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Хуанг Э.Х., Хайнс М.Дж., Чжан Т., Гинестьер К., Донту Дж., Аппельман Х., Филдс Д.З., Вича М.С., Боман Б.М. Альдегиддегидрогеназа 1 является маркером нормальных и злокачественных стволовых клеток толстой кишки (SC) человека и отслеживает перенаселение SC во время туморогенеза толстой кишки.Может Res. 2009. 69 (8): 3382–3389. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-08-4418. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Vermeulen L, Todaro M, de Sousa MF, Sprick MR, Kemper K, Perez Alea M, Richel DJ, Stassi G, Medema JP. Одноклеточное клонирование стволовых клеток рака толстой кишки показывает способность к дифференцировке нескольких линий. Proc Natl Acad Sci USA. 2008. 105 (36): 13427–13432. DOI: 10.1073 / pnas.0805706105. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Далерба П., Дилла С.Дж., Пак И.К., Лю Р., Ван Икс, Чо Р.В., Хои Т., Гурни А., Хуанг Э.Х., Симеоне Д.М. и др.Фенотипическая характеристика стволовых клеток колоректального рака человека. Proc Natl Acad Sci USA. 2007. 104 (24): 10158–10163. DOI: 10.1073 / pnas.0703478104. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Todaro M, Perez Alea M, Scopelliti A, Medema JP, Stassi G. ИЛ-4-опосредованная лекарственная устойчивость в стволовых клетках рака толстой кишки. Клеточный цикл. 2008. 7 (3): 309–313. DOI: 10.4161 / cc.7.3.5389. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Chiou GY, Yang TW, Huang CC, Tang CY, Yen JY, Tsai MC, Chen HY, Fadhilah N, Lin CC, Jong YJ.Musashi-1 способствует развитию линии раковых стволовых клеток и химиорезистентности клеток колоректального рака. Научный доклад 2017; 7 (1): 2172. DOI: 10.1038 / s41598-017-02057-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Пуиг I, Тенбаум С.П., Чикоте I, Аркес О, Мартинес-Кинтанилья Дж., Куэста-Боррас Е., Рамирес Л., Гонсало П., Сото А., Агилар С. и др. TET2 контролирует выживание химиорезистентных медленно меняющихся раковых клеток и рецидив опухоли. J Clin исследования. 2018; 128 (9): 3887–3905. DOI: 10,1172 / JCI96393. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13.Фекир К., Дюбуа-Пот-Шнайдер Х, Дезерт Р., Даниэль Й, Глез Д., Раух С., Морель Ф., Фроменти Б., Муссо О, Кабиллик Ф. и др. Ретродифференцировка опухолевых гепатоцитов человека в стволовые клетки приводит к метаболическому репрограммированию и устойчивости к химиотерапии. Может Res. 2019; 79 (8): 1869–1883. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-18-2110. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Браун Дж. А., Ни Чонгейл Т., Матчетт КБ, Линам-Леннон Н., Кили П.А. Исследования рака, применение и идеи на основе больших данных. Может Res. 2016. 76 (21): 6167–6170. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-16-0860. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Marx S, Dal Maso T, Chen JW, Bury M, Wouters J, Michiels C, Le Calve B. Члены семейства трансмембранных (TMEM) белков: плохо охарактеризованы, даже если они необходимы для метастатического процесса. Semin Cancer Biol. 2020; 60: 96–106. DOI: 10.1016 / j.semcancer.2019.08.018. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Данг С., Фенг С., Тьен Дж., Петерс С.Дж., Балкли Д., Лоликато М., Чжао Дж., Зубербулер К., Йе В, Ци Л. и др. Крио-ЭМ структуры кальций-активированного хлоридного канала TMEM16A.Природа. 2017; 552 (7685): 426–429. DOI: 10,1038 / природа25024. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Ван Х, Ху С, Чен Х, Ши Х, Чэнь Ц., Сунь Л., Чэнь Ц. cGAS необходим для противоопухолевого эффекта блокады иммунных контрольных точек. Proc Natl Acad Sci USA. 2017; 114 (7): 1637–1642. DOI: 10.1073 / pnas.1621363114. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Zhao Y, Song K, Zhang Y, Xu H, Zhang X, Wang L, Fan C, Jiang G, Wang E. TMEM17 способствует злокачественному прогрессированию рака груди через передачу сигналов AKT / GSK3beta.Cancer Manage Res. 2018; 10: 2419–2428. DOI: 10.2147 / CMAR.S168723. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Zhang X, Zhang Y, Miao Y, Zhou H, Jiang G, Wang E. TMEM17 подавляет инвазию и метастазирование в клетки рака легких. Oncotarget. 2017; 8 (41): 70685–70694. DOI: 10.18632 / oncotarget.19977. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Старк С., Брейткройц Б.Дж., Регули Т., Бушер Л., Брейткройц А., Тайерс М. BioGRID: общий репозиторий для наборов данных взаимодействия. Nucleic Acids Res.2006; 34 (выпуск базы данных): D535–539. DOI: 10.1093 / нар / gkj109. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Oughtred R, Stark C, Breitkreutz BJ, Rust J, Boucher L, Chang C, Kolas N, O’Donnell L, Leung G, McAdam R и др. База данных взаимодействия BioGRID: обновление 2019. Nucleic Acids Res. 2019; 47 (D1): D529 – D541. DOI: 10,1093 / нар / gky1079. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Мариса Л., де Рейнис А., Дюваль А., Селвес Дж., Гауб М.П., Весково Л., Этьен-Гримальди М.С., Скьяппа Р., Генот Д., Аяди М. и др.Классификация экспрессии генов рака толстой кишки на молекулярные подтипы: характеристика, валидация и прогностическая ценность. PLoS Med. 2013; 10 (5): e1001453. DOI: 10.1371 / journal.pmed.1001453. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Wang X, Terfve C, Rose JC, Markowetz F. HTSanalyzeR: пакет R / Bioconductor для интегрированного сетевого анализа высокопроизводительных экранов. Биоинформатика. 2011. 27 (6): 879–880. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btr028. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

25.Гао Ф, Мэй Х, Чжу Л., Чжан И, Ван В., Ван Х. HTSanalyzeR2: сверхбыстрый пакет R / Bioconductor для высокопроизводительных экранов с интерактивным отчетом. Празднование 25-й конференции по интеллектуальным системам для молекулярной биологии и 16-й Европейской конференции по компьютерной биологии 2017.

26. Эдж С.Б., Комптон С.К. Американский объединенный комитет по раку, 7-е издание руководства AJCC по стадированию рака и будущее TNM. Энн Сург Онкол 2010; 17 (6): 1471–1474. [PubMed] 27. Lin HX, Qiu HJ, Zeng F, Rao HL, Yang GF, Kung HF, Zhu XF, Zeng YX, Cai MY, Xie D.Снижение экспрессии Beclin 1 тесно коррелирует с экспрессией Bcl-xL и плохим прогнозом рака яичников. PLoS ONE. 2013; 8 (4): e60516. DOI: 10.1371 / journal.pone.0060516. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28. Лагерь RL, Доллед-Филхарт М, Римм DL. X-tile — новый инструмент биоинформатики для оценки биомаркеров и оптимизации точек отсечения на основе результатов. Clin Cancer Res. 2004. 10: 7252–7259. DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-04-0713. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Путцер Б.М., Соланки М., Херченродер О.Достижения в нацеливании на раковые стволовые клетки: как поразить корень зла. Adv Drug Deliv Rev. 2017; 120: 89–107. DOI: 10.1016 / j.addr.2017.07.013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Вен З, Пань Т., Ян С., Лю Дж, Тао Х, Чжао Ю, Сюй Д, Шао В., Ву Дж, Лю Х и др. Активная регуляция NRIP2 в клетках, инициирующих колоректальный рак, модулирует путь Wnt, воздействуя на RORbeta. Молекулярный рак. 2017; 16 (1): 20. DOI: 10.1186 / s12943-017-0590-2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Чжао Х, Чжао Ц., Ли Х, Чжан Д., Лю Г.E2A ослабляет способность клеток колоректального рака инициировать опухоль через путь Wnt / бета-катенин. Журнал экспериментальных и клинических исследований рака: CR. 2019; 38 (1): 276. DOI: 10.1186 / s13046-019-1261-5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Ван Т., Ву Х, Лю С., Лей З, Цинь З, Вэнь Л., Лю К., Ван Х, Го Й, Лю Цюй и др. SMYD3 управляет Wnt-зависимым эпигенетическим переключателем для активации ASCL2 и поддержания раковых стволовых клеток. Cancer Lett. 2018; 430: 11–24. DOI: 10.1016 / j.canlet.2018.05.003. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Шеной А.К., Фишер Р.С., Баттерворт Е.А., Пи Л., Чанг Л.Дж., Аппельман HD, Чанг М., Скотт Э.В., Хуанг Э. Переход от колита к раку: высокая активность Wnt поддерживает опухолевый потенциал предшественников стволовых клеток рака толстой кишки. Может Res. 2012. 72 (19): 5091–5100. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-12-1806. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Deshmukh A, Deshpande K, Arfuso F, Newsholme P, Dharmarajan A. Метаболизм раковых стволовых клеток: потенциальная цель для лечения рака.Молочный рак. 2016; 15 (1): 69. DOI: 10.1186 / s12943-016-0555-х. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Гаш К., Френч Б., О’Лири Дж. Дж., Галлахер М.Ф. Ловля движущихся целей: иерархия раковых стволовых клеток, устойчивость к терапии и рекомендации по клиническому вмешательству. Молочный рак. 2017; 16 (1): 43. DOI: 10.1186 / s12943-017-0601-3. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Батлле Э., Клеверс Х. Повторное посещение раковых стволовых клеток. Nat Med. 2017; 23 (10): 1124–1134. DOI: 10,1038 / нм.4409. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Козар С., Моррисси Е., Николсон А.М., ван дер Хейден М., Зеккини Н.И., Кемп Р., Таваре С., Вермёлен Л., Винтон Д. Непрерывное клональное мечение выявляет небольшое количество функциональных стволовых клеток в кишечных криптах и аденомах. Стволовая клетка. 2013. 13 (5): 626–633. DOI: 10.1016 / j.stem.2013.08.001. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39. Кортина С., Турон Дж., Аист Д., Эрнандо-Момблона Х, Севильано М., Агилера М., Този С., Мерлос-Суарес А., Стефан-Отто Аттолини С., Санчо Е. и др.Подход редактирования генома для изучения раковых стволовых клеток в опухолях человека. EMBO Mol Med. 2017; 9 (7): 869–879. DOI: 10.15252 / emmm.201707550. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Симокава М., Охта Ю., Нишикори С., Матано М., Такано А., Фуджи М., Дате С., Сугимото С., Канаи Т., Сато Т. Визуализация и нацеливание стволовых клеток рака толстой кишки человека LGR5 (+). Природа. 2017; 545 (7653): 187–192. DOI: 10,1038 / природа22081. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Сайгин Ч., Матей Д., Маджети Р., Рейзес О, Латиа Дж.Устойчивость рака в клинике: от шумихи к надежде. Стволовая клетка. 2019; 24 (1): 25–40. DOI: 10.1016 / j.stem.2018.11.017. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Ли Т., Вернерссон Р., Хансен Р. Б., Хорн Х., Мерсер Дж., Слодкович Г., Уоркман К. Т., Рижина О., Рапацкий К., Штарфельдт Х. Х. и др. Оцененная сеть белок-белкового взаимодействия человека для ускорения интерпретации генома. Нат методы. 2017; 14 (1): 61–64. DOI: 10,1038 / Nmeth.4083. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Ли З, Иванов А.А., Су Р., Гонсалес-Печчи В., Ци Кью, Лю С., Уэббер П., Макмиллан Э., Руснак Л., Фам С. и др.Сеть OncoPPi белок-белковых взаимодействий, ориентированных на рак, для получения информации о биологических исследованиях и терапевтических стратегиях. Nat Commun. 2017; 8: 14356. DOI: 10,1038 / ncomms14356. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Иванов А.А., Хури Ф.Р., Фу Х. Нацеливание на белок-белковые взаимодействия как противораковая стратегия. Trends Pharmacol Sci. 2013. 34 (7): 393–400. DOI: 10.1016 / j.tips.2013.04.007. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Beckmann J, Scheitza S, Wernet P, Fischer JC, Giebel B.Асимметричное деление клеток в компартменте человеческих гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников: идентификация асимметрично сегрегационных белков. Кровь. 2007. 109 (12): 5494–5501. DOI: 10.1182 / кровь-2006-11-055921. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Прюитт С.К., Бейли К.Дж., Фриланд А. Снижение экспрессии Mcm2 приводит к тяжелой недостаточности стволовых клеток-предшественников и раку. Стволовые клетки. 2009. 25 (12): 3121–3132. DOI: 10.1634 / стволовые клетки.2007-0483. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Schönle AHF, Mentzel J, Nöltner T, Rauch KS, Prestipino A, Wohlfeil SA, Apostolova P, Hechinger AK, Melchinger W, Fehrenbach K, Guadamillas MC, Follo M, Prinz G, Ruess AK, Pfeifer D, del Pozo MA, Schmitt -Грефф А., Дуйстер Дж., Хиппен К.И., Блазар Б.Р., Шачтруп К., Минге С., Цайзер Р.Кавеолин-1 регулирует силу сигнала TCR и регулирует дифференцировку Т-клеток в аллореактивные Т-клетки. Кровь. 2016; 125 (15): 1930–1939. DOI: 10.1182 / кровь-2015-09-672428. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 48. Shima H, Takamatsu-Ichihara E, Shino M, Yamagata K, Katsumoto T., Aikawa Y, Fujita S, Koseki H, Kitabayashi I. Ring1A и Ring1B подавляют экспрессию Glis2 для поддержания мышиных стволовых клеток MOZ-TIF2 AML. Кровь. 2018; 131 (16): 1833–1845. DOI: 10.1182 / кровь-2017-05-787226. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49.Мао Д.Д., Гуджар А.Д., Махлокозера Т., Чен И., Пэн И., Ло Дж., Брост Т., Томпсон Э.А., Турски А., Лойтхардт Е.С. и др. Ось передачи сигналов CDC20-APC / SOX2 регулирует стволовые клетки глиобластомы человека. Cell Rep. 2015; 11 (11): 1809–1821. DOI: 10.1016 / j.celrep.2015.05.027. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Zhang Q, Huang H, Liu A, Li J, Liu C, Sun B, Chen L, Gao Y, Xu D, Su C. Цикл 20 деления клеток (CDC20) стимулирует прогрессирование рака простаты за счет стабилизации β-катенина в стволе рака -подобные клетки.EBioMedicine. 2019; 42: 397–407. DOI: 10.1016 / j.ebiom.2019.03.032. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Aylon Y, Sarver A, Tovy A, Ainbinder E, Oren M. Lats2 имеет решающее значение для плюрипотентности и правильной дифференцировки стволовых клеток. Смерть клетки отличается. 2014. 21 (4): 624–633. DOI: 10.1038 / cdd.2013.188. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Yu P, Pan G, Yu J, Thomson JA. FGF2 поддерживает NANOG и переключает результат индуцированной BMP4 дифференцировки эмбриональных стволовых клеток человека.Стволовая клетка. 2011. 8 (3): 326–334. DOI: 10.1016 / j.stem.2011.01.001. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Zhang Y, Wang S, Wang X, Liao S, Wu Y, Han C. Эндогенно продуцируемый FGF2 необходим для выживания и пролиферации культивируемых сперматогониальных стволовых клеток мыши. Cell Res. 2012. 22 (4): 773–776. DOI: 10.1038 / cr.2012.17. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

FDA требует обзора собственных сделок с биогеном, одобрения лекарств от болезни Альцгеймера

Мэтью Перроне
| Associated Press

Болезнь Альцгеймера: новое лекарство может изменить жизнь, но стоит 56 000 долларов.

Недавно одобренный Biogen лекарство от болезни Альцгеймера может изменить жизнь людей, у которых диагностировано психотропное заболевание, но его цена довольно высока.

Staff Video, USA СЕГОДНЯ

ВАШИНГТОН — Исполняющая обязанности главы Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов в пятницу призвала правительство провести расследование крайне необычных контактов между обозревателями лекарств ее агентства и создателем спорного нового лекарства от болезни Альцгеймера.

Доктор Джанет Вудкок объявила о необычном шаге через Twitter. Это последние последствия одобрения Адухельма в прошлом месяце, дорогостоящей и недоказанной терапии, которую агентство одобрило вопреки советам собственных внешних экспертов.

Вудкок обратился с запросом к генеральному инспектору Министерства здравоохранения и социальных служб, контролирующему агентству, контролирующему FDA и другие федеральные агентства здравоохранения. Этот шаг был предпринят после многочисленных призывов к расследованию получения одобрения со стороны медицинских экспертов, защитников интересов потребителей и членов Конгресса. Два комитета Конгресса уже начали свою собственную проверку.

Адухельм, новое лекарство от болезни Альцгеймера за 56 000 долларов — дорогое удовольствие: Вот почему.

«Мы считаем, что независимая оценка — лучший способ определить, не противоречили ли какие-либо взаимодействия между производителем и специалистами агентства политике и процедурам FDA», — написал Вудкок в Twitter.Biogen обязалась сотрудничать с расследованием.

В прошлом месяце сайт новостей здравоохранения Stat сообщил о необычайно тесном сотрудничестве между производителем лекарств Aduhelm Biogen и сотрудниками FDA. В частности, сайт сообщил о неформальной встрече в мае 2019 года между топ-менеджером Biogen и ведущим обозревателем FDA лекарств от болезни Альцгеймера.

Встреча состоялась после того, как Biogen прекратил два исследования, потому что препарат не замедлял течение болезни, как предполагалось. Biogen и FDA начали повторный анализ данных вместе, сделав вывод, что препарат действительно может работать.Сотрудничество в конечном итоге привело к условному одобрению препарата два года спустя на том основании, что он уменьшил накопление липких бляшек в головном мозге, которые, как считается, играют роль в болезни Альцгеймера.

Взаимодействие FDA с персоналом фармацевтической промышленности строго контролируется и почти всегда тщательно документируется. Неясно, нарушила ли встреча в мае 2019 года правила агентства.

Когда Biogen и FDA представили препарат перед группой внешних консультантов FDA в ноябре, группа почти единодушно призвала его отказаться.

FDA не обязано следовать рекомендациям группы. А ведущий обозреватель FDA, который месяцами работал с Biogen над данными о препарате, назвал его «исключительно убедительным», «полностью положительным» и «надежным».

Группа защиты прав потребителей Public Citizen призвала к расследованию сотрудничества после ноябрьской консультативной встречи. Директор группы по здравоохранению доктор Майкл Каром приветствовал просьбу Вудкока о расследовании.

«Давай поженимся!»: Забыв о десятилетнем браке, муж с болезнью Альцгеймера снова делает предложение своей жене

«Мы рады видеть, что она с опозданием обратилась с этой просьбой, которую следовало сделать несколько месяцев назад, «Сказал Кэром.«Признаки неуместного сотрудничества были нам ясны с ноября».

FDA столкнулось с серьезной негативной реакцией после утверждения препарата, который стоит 56 000 долларов в год и требует ежемесячных внутривенных инъекций.

Трое советников FDA, выступавших против препарата, подали в отставку из-за принятого решения. Среди прочего, они протестовали против того, что агентство не сообщило, что рассматривает возможность утверждения препарата на условной основе, исходя из его воздействия на бляшку головного мозга, а не из-за какой-либо реальной пользы для пациентов.Адухельм — первое лекарство от болезни Альцгеймера, одобренное таким образом.

«Я думаю, что все части решения заслуживают независимого расследования», — сказал исследователь Гарвардского университета доктор Аарон Кессельхейм, один из трех советников, ушедших в отставку. «Доверие, которое мы испытываем к способности FDA принимать независимые решения, очень важно».

В четверг FDA предприняло необычный шаг, значительно сократив объем предписываемой информации о препарате. Агентство и Biogen объявили, что новый лейбл будет рекомендовать давать его только пациентам с легкой или ранней стадией болезни Альцгеймера.Это произошло после того, как многие врачи раскритиковали первоначальную этикетку как слишком широкую, поскольку в ней говорилось, что препарат можно давать любому, кто страдает болезнью Альцгеймера.

Адухельм не может обратить вспять или значительно замедлить болезнь. Но FDA заявило, что его способность уменьшать скопления бляшек в головном мозге, вероятно, замедлит развитие деменции.

Более двух десятков других препаратов ранее пробовали этот подход, но не дали положительных результатов. Biogen требуется для проведения последующего исследования, чтобы окончательно ответить, действительно ли он работает.Другие препараты от болезни Альцгеймера только временно облегчают симптомы.

Департамент здравоохранения и науки Ассошиэйтед Пресс получает поддержку от Департамента естественнонаучного образования Медицинского института Говарда Хьюза. AP несет полную ответственность за весь контент.

% PDF-1.3
%
1 0 объект
>>>
эндобдж
2 0 obj
> поток
uuid: d2da5793-62f5-435d-bccd-17087145b340xmp.did: E194B48A202F1168923FBC339E003274adobe: docid: indd: 200c4863-406c-11de-b745-9d576d92b5e3proof: pdfxmp.iid: 77330312202A1168923FBC339E003274xmp.did: 77330311202A1168923FBC339E003274adobe: docid: indd: 200c4863-406c-11de-b745-9d576d92b5e3default

Savedxmp7683D08 / 0D08B0887F0887F08118D08D08B0887S0887F08118D03

savedxmp.iid: ADB50CA42008116889FCE8B037038D5A2009-12-30T07: 13: 03 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: 7733030D202A1168923FBC339E0032742010-01-12T11: 56: 09 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: 7733030E202A1168923FBC339E0032742010-01-12T11: 56: 09 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: 7733030F202A1168923FBC339E0032742010-01-12T11: 58: 34 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 77330310202A1168923FBC339E0032742010-01-12T11: 58: 46 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: 77330311202A1168923FBC339E0032742010-01-12T11: 58: 46 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 /; / метаданные

savexmp.iid: 77330312202A1168923FBC339E0032742010-01-12T11: 59: 08 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: E194B48A202F1168923FBC339E0032742010-01-12T11: 59: 08 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: E194B4F1168923FBC339E0032742010-01-12T12: 43: 59 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: E194B492202F1168923FBC339E0032742010-01-12T12: 43: 59 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: E194B494202F1168923FBC339E0032742010-01-12T12: 45: 58 + 01: 00 Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 6C73716C20361168923FBC339E0032742010-01-12T12: 45: 58 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: 40C0D530200A1168A46CBBC6DDEE22862010-03-19T08: 42: 24 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 40C0D531200A1168A46CBBC6DDEE22862010-03-19T08: 42: 24 + 01: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: A1E8DD84200B1168AE56A627EB33707E2010-05-12T07: 56: 47 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: A1E8DD85200B1168AE56A627EB33707E2010-05-12T07: 56: 47 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: F0E5DA9C203F1168A46C9306111491682010-05-18T14: 38: 31 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: F0E5DA9D203F1168A46C9306111491682010-05-18T14: 38: 31 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 / метаданные

savedxmp.iid: F0E5DA9E203F1168A46C9306111491682010-05-18T14: 43: 01 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5C220461168A46C9306111491682010-05-18T14: 43: 41 + 02: 00 Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 7888D5C320461168A46C9306111491682010-05-18T14: 49: 47 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5C420461168A46C9306111491682010-05-18T14: 55: 18 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5C520461168A46C9306111491682010-05-18T14: 57: 43 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5C620461168A46C9306111491682010-05-18T15: 06: 08 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: 7888D5C720461168A46C9306111491682010-05-18T15: 07: 02 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5C820461168A46C9306111491682010-05-18T15: 13: 55 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5C920461168A46C9306111491682010-05-18T15: 15: 17 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5CA20461168A46C9306111491682010-05-18T15: 18 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 7888D5CB20461168A46C9306111491682010-05-18T15: 25: 17 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 7888D5CC20461168A46C9306111491682010-05-18T15: 27: 24 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: A2A192E4204C1168A46C9306111491682010-05-18T15: 27: 48 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 74117FD9200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T07: 56: 57 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 74117FDA200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T07: 57: 27 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: 74117FDB200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T07: 59: 46 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 74117FDC200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 12: 04 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 74117FDD200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 12: 30 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 74117FDE200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 13: 10 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 74117FDF200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 20: 43 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 74117FE0200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 25: 11 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

Savedxmp.iid: 74117FE1200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 27: 29 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 74117FE2200711688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 30: 27 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E5E200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 31: 36 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: 4B300E5F200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 37: 25 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E60200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 40: 40 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E61200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 43: 42 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E62200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 46: 44 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E63200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T08: 48: 19 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 4B300E64200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 12: 09 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E65200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 18: 50 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E66200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 21: 59 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 4B300E67200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 27 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: 4B300E68200C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 39: 15 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD44201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 39: 55 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD45201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 41: 55 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD46201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 44: 20 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD47201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 49: 33 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: D643FD48201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 54: 41 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD49201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T09: 56: 11 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD4A201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 04: 21 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD4B201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 05: 52 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: D643FD4C201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 07: 25 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD4D201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 19: 49 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: D643FD4E201511688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 23: 40 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187BC201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 24: 23 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187BD201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 25: 26 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 0CE187BE201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 29: 33 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187BF201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 31: 51 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187C0201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 33: 48 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187C1201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 36: 42 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: 0CE187C2201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 37: 08 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187C3201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 45: 46 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187C4201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 48: 33 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187C5201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 52: 10 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 0CE187C6201C11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 54: 35 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 6672D2F0202011688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 55: 32 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 6672D2F1202011688D4AEE562A415F1A2010-05-19T10: 56: 38 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: B035A046202F11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T13: 06: 01 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: B035A047202F11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T13: 07: 44 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: B035A048202F11688D4AEE562A415F1A2010-05-19T13: 08: 09 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 33EAEB0C203311688D4AEE562A415F1A2010-05-19T13: 10: 07 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 33EAEB0D203311688D4AEE562A415F1A2010-05-19T13: 10: 32 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: BC277F8C20131168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 01: 11 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE020171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 09: 57 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: C95B8BE120171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 10: 45 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE220171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 12: 30 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE320171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 21: 32 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE420171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 22: 11 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: C95B8BE520171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 23: 19 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE620171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 34: 17 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE720171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 42: 33 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE820171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 48: 40 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C95B8BE920171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 51: 23 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: C95B8BEA20171168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 52: 16 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 41DB2D54201E1168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T11: 56: 16 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 41DB2D56201E1168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T12: 55: 10 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 41DB2D57201E1168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T12: 57: 03 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: 41DB2D58201E1168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T12: 57: 14 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 41DB2D5C201E1168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T13: 28: 24 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 41DB2D5D201E1168B1A4BFCAE73820EE2010-06-08T13: 28: 51 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 5FAC7D092035116898DBB2249AD1A9D52010-06-14T15: 48: 02 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 5FAC7D0A2035116898DBB2249AD1A9D52010-06-14T15: 48: 32 + 02: 00Adobe InDesign 6.0/

savedxmp.iid: 5FAC7D0B2035116898DBB2249AD1A9D52010-06-14T15: 49: 57 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 5FAC7D0C2035116898DBB2249AD1A9D52010-06-14T15: 50: 33 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 5FAC7D0D2035116898DBB2249AD1A9D52010-06-14T15: 52: 05 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: 5FAC7D0E2035116898DBB2249AD1A9D52010-06-14T15: 52: 19 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savexmp.iid: C5CC6E8220101168B34BC3640BC7B5872010-06-18T09: 42: 56 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

savedxmp.iid: C5CC6E8320101168B34BC3640BC7B5872010-06-18T09: 44: 55 + 02: 00Adobe InDesign 6.0 /

АртикулStream300.00300.00Inchesuuid: 3b41652f-c1ad-11dc-9a61-ec17b285acc1adobe: docid: photoshop: 59e969ba-c1ac-11dc-9a61-ec17b285acc1

Ссылочный поток72.0072.00Inchesuuid: a2ee95b6-b417-4bb1-82e0-8046bba93bcbuuid: f7fb5a2b-b8d6-4853-864a-af5bfb6f2899

СсылкаStream72.0072.00Inchesuuid: fe769219-f135-45fe-9a9f-aa132dc15642uuid: f7fb5a2b-b8d6-4853-864a-af5bfb6f2899

ReferenceStream72.0072.00Inchesuuid: 3a0fbadc-bd89-4e5f-9ae7-6ac2a78d349duuid: f7fb5a2b-b8d6-4853-864a-af5bfb6f2899

ReferenceStream72.0072.00Inchesuuid: dc03ff4f-0ce4-4cc6-9241-1fc1d754fb5auuid: f7fb5a2b-b8d6-4853-864a-af5bfb6f2899

Артикул72.0072.00Inchesuuid: 1855bedb-b1d4-4a4b-aeaa-e584ccf974eeuuid: 45e933cd-2491-4b57-879f-92834e10bdd3

СсылкаStream72.0072.00Inchesuuid: 54c58708-2553-42ff-bd17-9350f43b7c16uuid: 17ccb21d-7780-44b9-8e5b-12b6053ff0d8

Ссылочный поток72.0072.00Inchesuuid: 9ba897b6-cf76-47c8-9f1f-438ca657bb8fuid: c02ecfa2-b57c-4685-a431-8169cd1ae215

2010-06-25T11: 48: 31 + 02: 002010-06-25T11: 48: 37 + 02: 002010-06-25T11: 48: 37 + 02: 00Adobe InDesign CS4 (6.0.4)

JPEG256256 / 9j / 4AAQSkZJRgABAgEASABIAAD / 7QAsUGhvdG9zaG9wIDMuMAA4QklNA + 0AAAAAABAASAAAAAEA
AQBIAAAAAQAB / + 4ADkFkb2JlAGQAAAAAAf / bAIQADAgICAgIDAgIDBALCwsQFA4NDQ4UGBITExMS
GBQSFBQUFBIUFBseHh5bFCQnJycnJDI1NTUyOzs7Ozs7Ozs7OwENCwsQDhAiGBgiMighKDI7MjIy
Mjs7Ozs7Ozs7Ozs7Ozs7Ozs7QEBAQEA7QEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBA / 8AAEQgBAAC1AwER
AAIRAQMRAf / EAUIAAAEFAQEBAQEBAAAAAAAAAAAMAAQIEBQYHCAkKCwEAAQUBAQEBAQEAAAAAAAAA
AQACAwQFBgcICQoLEAABBAEDAgQCBQcGCAUDDDMBAAIRAwQhEjEFQVFhEyJxgTIGFJGhsUIjJBVS
wWIzNHKC0UMHJZJT8OHxY3M1FqKygyZEk1RkRcKjdDYX0lXiZfKzhMPTdePzRieUpIW0lcTU5PSl
tcXV5fVWZnaGlqa2xtbm9jdHV2d3h5ent8fX5 / cRAAICAQIEBAMEBQYHBwYCOwEAAhEDITESBEFR
YXEiEwUygZEUobFCI8FS0fAzJGLhcoKSQ1MVY3M08SUGFqKygwcmNcLSRJNUoxdkRVU2dGXi8rOE
w9N14 / NGlKSFtJXE1OT0pbXF1eX1VmZ2hpamtsbW5vYnN0dXZ3eHl6e3x9fn9 // aAAwDAQACEQMR
AD8A636sfVj6t5h2b6Tff0nBtttwcZ9lj8apznOdUwuc5xZJJKSnS / 5p / VX / AMpun / 8AsLT / AOk0
lK / 5p / VX / wApun / + wtP / AKTSUr / mn9Vf / Kbp / wD7C0 / + k0lK / wCaf1V / 8pun / wDsLT / 6TSUr / mn9
Vf8Aym6f / wCwtP8A6TSUr / mn9Vf / ACm6f / 7C0 / 8ApNJSv + af1V / 8pun / APsLT / 6TSUr / AJp / VX / y
m6f / AOwtP / pNJSv + af1V / wDKbp // ALC0 / wDpNJSv + af1V / 8AKbp // sLT / wCk0lK / 5p / VX / ym6f8A
+ wtP / pNJSv8Amn9Vf / Kbp / 8A7C0 / + k0lK / 5p / VX / AMpun / 8AsLT / AOk0lK / 5p / VX / wApun / + wtP /
AKTSUr / mn9Vf / Kbp / wD7C0 / + k0lK / wCaf1V / 8pun / wDsLT / 6TSUr / mn9Vf8Aym6f / wCwtP8A6TSU
r / mn9Vf / ACm6f / 7C0 / 8ApNJSv + af1V / 8pun / APsLT / 6TSUr / AJp / VX / ym6f / AOwtP / pNJSv + af1V
/ wDKbp // ALC0 / wDpNJTm5h2Y + rbfrJgUDpOCKn4Oa99YxqtrnMtwA1xbsiQHuj4lJTpfVP8A8SvR
v / Tfi / 8AnmtJTrJKUkpSSlJKUkpSSlJKa9mfg0vNduTUx7eWue0EfEEpKY / tPpv / AHLo / wC3Gf8A
kklK / afTf + 5dH / bjP / JJKTU5GPkAux7WWhuhLHB0fdKSkiSlJKUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSnJyf /
ABVdO / 8ATfn / APn7pqSlfVP / AMSvRv8A034v / nmtJTY6vfbj4gfW41tNjG2WtEljCfc4aFVucySh
jsGtRZ7Bn5WAnPXs4ruq5uLdXYy111Afc2r1DAtaxrduoaN2rtPNZp5vLjkCDcblV9W8OXxziRVH
S66Nt / 1iva64fZmt9Ih3vsDXAgtEuDo0O7RWJfEpgy9O3iwjkYmvVv4MH9TzBleo2wMY9 + OCHzsD
bGWO + iR7fo6pp5rJ7lg6enfxBSOXhwVX734ENmjquZki2o1CqxrxjggzNpcd22QfosG7hWuV5ieU
yBFVp9WLJy8IUbsb / Rf9q2MvZj7q / e59Rc9w9jmF3ueRsEHY6GgdhqJ0tWt9gGNs8TLzHZvpX202
V2PtDQxu1zPRhm0j1Hh4ODnT8u4SRkxw4LAPT8XF6zg9Nt6lfZfV011jiNxyM + 2mz6I + lW1hDUUQ
jy / D6jK / AD + LT / Z3SP8AQ9H / APcnf / 6TSXcPK / vS / wAUf98r9ndI / wBD0f8A9yd // pNJXDyv70v8
Uf8AfN7p2UzpTh24H7HqbYdzh + 0bHSRp + fS5JXDyv70v8Uf982 / + cGZ / pej / APse7 / 3nSVw8r + 9L
/ FH / AHyv + cGZ / pej / wDse7 / 3nSVw8r + 9L / FH / fK / 5wZn + l6P / wCx7v8A3nSVw8r + 9L / FH / fK / wCc
GZ / pej / + x7v / AHnSVw8r + 9L / ABR / 3yv + cGZ / pej / APse7 / 3nSVw8r + 9L / FH / AHzKvrfULXbKn9Je
7mG5zifwx0lcPK / vS / xR / wB8l / aXWf3emf8AsW // AN5klcPK / vS / xR / 3yv2l1n93pn / sW / 8A95kl
cPK / vS / xR / 3yv2l1n93pn / sW / wD95klcPK / vS / xR / wB87AJIBMTHbhJrOVk / + Krp3 / pvz / 8Az901
JSvqn / 4lejf + m / F / 881pKdZJSklKSUhuGWZFJrg9nBwIHxBSKkOHjX4tfpgV6uD3O3PcXE / TJLtS
fP8AuTMWKOMUF + TIZmyl / XS0fzTTyR7nDjifb37 / AIJ6xer7Vvm70wyNAySZnxMdvL / alOP1D6v5
eZmW5NdmI1thBAtxK7X6ADV7tTwkpr / 81c3 / AE2D / wCwNSSlf81c3 / TYP / sDUkpsYP1aNN4fnDCy
KoINbcOphnsdwCSnR / YnRv8AuBi / 9ss / 8ikpX7E6N / 3Axf8Atln / AJFJSv2J0b / uBi / 9ss / 8ikpX
7E6N / wBwMX / tln / kUlK / YnRv + 4GL / wBss / 8AIpKV + xejf9wMb / tln / kUlK / YnRv + 4GL / ANss / wDI
pKV + xOjf9wMX / tln / kUlK / YnRv8AuBi / 9ss / 8ikpuAACBoBwElOVk / 8Aiq6d / wCm / P8A / P3TUlK +
qf8A4lejf + m / F / 8APNaSnWSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSk
lOTk / wDiq6d / 6b8 // wA / dNSU0vq9hdQv + rfR7MfqNmMw9OxAKm1VPAIpr1mytxQZ8eXHGNGAP1LY
yqczBYLMzrz6GuO0Osqx2gnmNakqK / 38P + bh3y / i1vttf / zzD / Mxv / SaVFXv4f8ANj7ZfxV9tr / +
eYf5mN / 6TSoq9 / D / AJsfbL + Lfxut9JpobXf1SnIsbO61zmNLtfBm0ItechKVgUl / 5wdE / wC51H / b
g / vSWq / 5wdE / 7nUf9uD + 9JSv + cHRP + 51H / bg / vSUr / nB0T / udR / 24P70lK / 5wdE / 7nUf9uD + 9JSv
+ cHRP + 51H / bg / vSUr / nB0T / udR / 24P70lK / 5wdE / 7nUf9uD + 9JSv + cHRP + 51H / bg / vSUr / nB0T / u
dR / 24P70lK / 5wdE / 7nUf9uD + 9JSv + cHRP + 51H / bg / vSUr / nB0T / udR / 24P70lK / 5wdE / 7nUf9uD +
9JSv + cHRP + 51H / bg / vSU2cXOw85rn4dzL2sMONbg4A / JJSdJTk5P / iq6d / 6b8 / 8A8 / dNSUr6p / 8A
iV6N / wCm / F / 881pKav1zZ09 + BQOo2W11 + t7TS0OJdtdzuISU8h6h2W / 7lZn / AG0z / wAmkpXofVb /
ALlZn / bTP / JpKV6h2W / 7lZn / AG0z / wAmkpXofVb / ALlZn / bTP / JpKV6h2W / 7lZn / AG0z / wAmkpXo
fVb / ALlZn / bTP / JpKV6h2W / 7lZn / AG0z / wAmkpXofVb / ALlZn / bTP / JpKV6h2W / 7lZn / AG0z / wAm
kpXofVb / ALlZn / bTP / JpKV6h2W / 7lZn / AG0z / wAmkpXofVb / ALlZn / bTP / JpKV6h2W / 7lZn / AG0z
/ wAmkpXofVb / ALlZn / bTP / JpKdDph2c6h2t1rcPKyQaQC71GNb9KYiCfBJTpf + N5hf8Acu3 / ADWp
KV / 43mF / 3Lt / zWpKV / 43mF / 3Lt / zWpKdnoXQqehU2002utFrg4lwAiBHZJTqJKcnJ / 8AFV07 / wBN
+ f8A + fumpKV9U / 8AxK9G / wDTfi / + ea0lNX655WPi4FD8nFZltN0Bj3OaAdrtfaQkp5D9sdK / 8p6P
+ 3LP / JJKV + 2Olf8AlPR / 25Z / 5JJSv2x0r / yno / 7cs / 8AJJKV + 2Olf + U9H / млрд / kklK / bHSv / ACno
/ wC3LP8AySSlftjpX / lPR / 25Z / 5JJSv2x0r / AMp6P + 3LP / JJKV + 2Olf + U9H / AG5Z / wCSSUr9sdK /
8p6P + 3LP / JJKV + 2Olf8AlPR / 25Z / 5JJSv2x0r / yno / 7cs / 8AJJKV + 2Olf + U9H / млрд / kklK / bHSv /
ACno / wC3LP8AySSlftjpX / lPR / 25Z / 5JJTawPrZV0wvdg9NppNkB8PeZjj6RPikpuf8Ajh5n / cSr
/ Ockp7et29jXn84A / ekpkkpSSlJKcnJ / 8VXTv / Tfn / 8An7pqSlfVP / xK9G / 9N + L / AOea0lMPrM7r
DcSo9FaXW + p7wGMf7dru1gI5SU856n18 / wBE7 / tmj / yCSlep9fP9E7 / tmj / yCSlep9fP9E7 / ALZo
/ wDIJKV6n18 / 0Tv + 2aP / ACCSlep9fP8ARO / 7Zo / 8gkpXqfXz / RO / 7Zo / 8gkpXqfXz / RO / wC2aP8A
yCSlep9fP9E7 / tmj / wAgkpXqfXz / AETv + 2aP / IJKV6n18 / 0Tv + 2aP / IJKV6n18 / 0Tv8Atmj / AMgk
pXqfXz / RO / 7Zo / 8AIJKV6n18 / wBE7 / tmj / yCSnssCpzsHHdl1t + 0GphulrQd + 0b9AI5SUn9Gn / Rt
+ 4JKV6NP + jb9wSUzSUpJSklKSU5OT / 4qunf + m / P / APP3TUlK + qf / AIlejf8Apvxf / PNaSmx1bPy +
n0Mtw8N + c9ztpYw7S0QTu0a9JTlf85euf + UN / wDnn / 0ikpX / ADl65 / 5Q3 / 55 / wDSKSlf85euf + UN
/ wDnn / 0ikpX / ADl65 / 5Q3 / 55 / wDSKSlf85euf + UN / wDnn / 0ikpsYHXerZWXXj5HR7cat5Idc55Ib
AJ1HpN / Kkp20lKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSU5OT / AOKrp3 / pvz // AD901JSvqn / 4
lejf + m / F / wDPNaSm51B3U21NPS2Uvs3e4Xlwbtjtt7ykpoer9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 59n9y
Sler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 5
9n9ySler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9Bg / 59n9ySler9bv9
Bg / 59n9ySm / 093UXUuPU2VMt3HaKC4t2wInd3mUlNpJSklKSUpJSklKSUpJTk5P / AIqunf8Apvz /
APz901JSvqn / AOJXo3 / pvxf / ADzWkp1klKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSU
pJSklKSUpJTk5P8A4qunf + m / P / 8AP3TUlK + qf / iV6N / 6b8X / AM81pKdR9ldYmxwaD3cY / Kkph9px
v9Kz / OH96Slfacb / AErP84f3pKZMtqsn03tfHO0g / kSUzSUpJSklKSUpJSklKSUpJSklKSUpJSkl
KSUpJSklKSUpJTk5P / iq6d / 6b8 // AM / dNSUr6p / + JXo3 / pvxf / PNaSmh2mvNGJU4WZdU2ROE0Oef
afpS5uiSnnP2g / 8A7l9b / wC22 / 8ApRJTpdO + s9GFj + jdV1PLduLvUtqaXQY0 / nElNr / nlh / 9wc //
ALZb / wClElK / 55Yf / cHP / wC2W / 8ApRJSv + eWH / 3Bz / 8Atlv / AKUSUr / nlh / 9wc // ALZb / wClElK /
55Yf / cHP / wC2W / 8ApRJSv + eWH / 3Bz / 8Atlv / AKUSU3 + ldbp6s6xtVGRR6QBPrsDJ3T9GHO8ElNX6
zXelXQfXy8eS7XDbuJ0H09Qkpwftn / mw6x / 21 / 5kkpX2z / zYdY / 7a / 8AMklK + 2f + bDrH / bX / AJkk
pX2z / wA2HWP + 2v8AzJJSvtn / AJsOsf8AbX / mSSlfbP8AzYdY / wC2v / MklK + 2f + bDrH / bX / mSSlfb
P / Nh2j / tr / zJJSvtn / mw6x / 21 / 5kkp7evVjeToNTz80lOXk / + Krp3 / pvz / 8Az901JSvqn / 4lejf +
m / F / 881pKbHVcMZtLKzmW4W127fQ / wBMu0I2k + CSnM / YLP8Ay9zv / YhJSv2Cz / y9zv8A2ISUyZ9X
TZPp9az3xztvn8iSmX / Ni7 / y46j / ANvFJSv + bF3 / AJcdR / 7eKSlf82Lv / LjqP / bxSU3emdJf0573
vzcnL3gDbkWbw2O7UlOgkpSSmj1Ppr + otrazLyMT0yTOM / YXTH0vuSU0P + bF3 / lx1H / t4pKV / wA2
Lv8Ay46j / wBvFJSv + bF3 / lx1H / t4pKV / zYu / 8uOo / wDbxSUnwehWYeUzJd1LNyAyf0V1pcx0gt9w
8plJTrJKUkpSSlJKUkpycn / xVdO / 9N + f / wCfumpKV9U // Er0b / 034v8A55rSUw + szXOxKtjM2w + p
xgGH / Rd9L2u9qSnnPTu / 7j9f / wA8 / wDpFJTq4PW8rp + KzGb0rqd4bJ33NL3mSTqdgSUn / wCdGZ / 5
S5 // AG27 / wAikpX / ADozP / KXP / 7bd / 5FJSv + dGZ / 5S5 // bbv / IpKV / zozP8Aylz / APtt3 / kUlK / 5
0Zn / AJS5 / wD227 / yKSlf86Mz / wApc / 8A7bd / 5FJSv + dGZ / 5S5 / 8A227 / AMikpv5vVrMPHouGFk5B
vEmulhe6vQGHjtykpp / 857v / ACn6j / 2yUlNjA65Zm5Lcd3TszGDgT6t9RawQJ1KSnVSUpJSklKSU
pJSklKSUpJTk5P8A4qunf + m / P / 8AP3TUlK + qf / iV6N / 6b8X / AM81pKY / Wat9uJUGUZOSRZO3Efsc
PadSdrtElPN / ZLv / ACt6t / 2 + f / SSSlfZLv8Ayt6t / wBvn / 0kkpX2S7 / yt6t / 2 + f / AEkkpX2S7 / yt
6t / 2 + f8A0kkpX2S7 / wArerf9vn / 0kkpX2S7 / AMrerf8Ab5 / 9JJKV9ku / 8rerf9vn / wBJJKV9ku / 8
rerf9vn / ANJJKV9ku / 8AK3q3 / b5 / 9JJKepvz7 + n4WL6OFkZRcwBzGe57Ia36Z8UlNb / nFn / + U2Z9
wSUr / nFn / wDlNmfcElK / 5xZ // lNmfcELK / 5xZ / 8A5TZn3BJSv + cWf / 5TZn3BJSv + cWf / AOU2Z9wS
Ur / nFn / + U2Z9wSUr / nFn / wDlNmfcElK / 5xZ // lNmfcElO20y0EiJEweySnKyf / FV07 / 035 // AJ + 6
akpX1T / 8SvRv / Tfi / wDnmtJS31kx / tGLU37LdmRZOyiz0yNDqT4JKed / Zn / mlzv / AGJ / 2JKV + zP /
ADS53 / sT / sSUr9mf + aXO / wDYn / YkpX7M / wDNLnf + xP8AsSUr9mf + aXO / 9if9iSlfsz / zS53 / ALE /
7ElK / Zf / AJpc7 / 2J / wDMUlK / Zn / mlzv / AGJ / 2JKV + y // ADS53 / sT / wCYpKdnreNZbg4LK8XKt2Ng
149orcz2t0eS0ykpxv2dk / 8Ald1P / wBih / 5BJSv2dk / + V3U // Yof + QSUr9nZP / ld1P8A9ih / 5BJS
v2dk / wDld1P / ANih / wCQSUr9nZP / AJXdT / 8AYof + QSUr9nZP / ld1P / 2KH / kElK / Z2T / 5XdT / APYo
f + QSUr9nZP8A5XdT / wDYof8AkElK / Z2T / wCV3U // AGKH / kElPb16MaII0Gh5SU5eT / 4qunf + m / P /
APP3TUlK + qf / AIlejf8Apvxf / PNaSmh2mx25OJUx + Ec8CyfTF3obfa73bu / wSU85 + yqf / nfd / wCx
с uSUr9lU / 8Azvu / 9jh / ckpX7Kp / + d93 / scP7klK / ZVP / wA77v8A2OH9ySlfsqn / AOd93 / scP7kl
K / ZVP / zvu / 8AY4f3JKV + yqf / AJ33f + xw / uSUr9lU / wDzvu / 9jh / ckpX7Kp / + d93 / ALHD + 5JTudaw
rMjBwWVdPtyfTZHpV5AqNftboXQdySnG / ZGT / wCUeT / 7HD / yCSlfsjJ / 8o8n / wBjh / 5BJSv2Rk / +
UeT / AOxw / wDIJKV + yMn / AMo8n / 2OH / kElK / ZGT / 5R5P / ALHD / wAgkpX7Iyf / ACjyf / Y4f + QSUr9k
ZP8A5R5P / scP / IJKV + yMn / yjyf8A2OH / AJBJSv2Rk / 8AlHk / + xw / 8gkp7esQxoiIA05hJTl5P / iq
6d / 6b8 // AM / dNSUr6p / + JXo3 / pvxf / PNaSmh2mobfiVNfhszgLJ2Pv8As4b7Xe7dubPwSU85 + zqf
/ KGj / wByA / 8ASySlfs6n / wAoaP8A3ID / ANLJKV + zqf8Ayho / 9yA / 9LJKV + zqf / KGj / 3ID / 0skpX7
Op / 8oaP / AHID / wBLJKV + zqf / ACho / wDcgP8A0skpX7Op / wDKGj / 3ID / 0skpX7Op / 8oaP / cgP / SyS
lfs6n / yho / 8AcgP / AEskp2uuYJysDBY3p7cr02fzf2gVCv2s0Dy4bklOL + xHf + UTf / Y9v / k0lK / Y
jv8Ayib / AOx7f / JpKV + xHf8AlE3 / ANj2 / wDk0lK / Yjv / ACib / wCx7f8AyaSlfsR3 / lE3 / wBj2 / 8A
k0lK / Yjv / KJv / se3 / wAmkpX7Ed / 5RN / 9j2 / + TSUr9iO / 8om / + x7f / JpKV + xHf + UTf / Y9v / k0lPdV
iGNERAGnMJKcvJ / 8VXTv / Tfn / wDn7pqSlfVP / wASvRv / AE34v / nmtJTH6zVssxKg / HoyQLJ25Fvo
tHtOodubJSU839lp / wDKvp3 / ALGD / wBKpKV9lp / 8q + nf + xg / 9KpKV9lp / wDKvp3 / ALGD / wBKpKV9
lp / 8q + nf + xg / 9KpKV9lp / wDKvp3 / ALGD / wBKpKV9lp / 8q + nf + xg / 9KpKV9lp / wDKvp3 / ALGD / wBK
pKV9lp / 8q + nf + xg / 9KpKV9lp / wDKvp3 / ALGD / wBKpKdrrmI3JwMFv2OjIDGaMsyDU1ntb9Bwe3ck
pxf2Qz / yow // AGOd / wClklK / ZDP / ACow / wD2Od / 6WSUr9kM / 8qMP / wBjnf8ApZJSv2Qz / wAqMP8A
9jnf + lklK / ZDP / KjD / 8AY53 / AKWSUr9kM / 8AKjD / APY53 / pZJSv2Qz / yow // AGOd / wClklK / ZDP /
ACow / wD2Od / 6WSUr9kM / 8qMP / wBjnf8ApZJT3VYhjREQBoNUlOXk / wDiq6d / 6b8 // wA / dNSUr6p /
+ JXo3 / pvxf8AzzWkph9Zgw4lW + vEsHqcZr / TYPafonc3VJTzm2j / ALjdE / 8AYgf + lElK20f9xuif
+ xA / 9KJKVto / 7jdE / wDYgf8ApRJSttH / AHG6J / 7ED / 0okpW2j / uN0T / 2IH / pRJSttH / cbon / ALED
/ wBKJKVto / 7jdE / 9iB / 6USUrbR / 3G6J / 7ED / ANKJKVto / wC43RP / AGIH / pRJTtdcobdgYI9DDtDW
aNvtNbG + 1v8ANEPbISU4v2Bn / cLpP / sU7 / 0qkpX2Bn / cLpP / ALFO / wDSqSlfYGf9wuk / + xTv / SqS
lfYGf9wuk / 8AsU7 / ANKpKV9gZ / 3C6T / 7FO / 9KpKV9gZ / 3C6T / wCxTv8A0qkpX2Bn / cLpP / sU7 / 0q
kpX2Bn / cLpP / ALFO / wDSqSlfYGf9wuk / + xTv / SqSnuq9GNGg0HHCSnLyf / FV07 / 035 // AJ + 6akpX
1T / 8SvRv / Tfi / wDnmtJSP60Bpw6tww3fpf8AtcXBn0XfR2luqSnmttX7nQv8 + z / 0okpW2r9zoX + f
Z / 6USUrbV + 50L / Ps / wDSiSlbav3Ohf59n / pRJSttX7nQv8 + z / wBKJKVtq / c6F / n2f + lElK21fudC
/ wA + z / 0okpW2r9zoX + fZ / wClElK21fudC / z7P / SiSnd65W1 + BgCOnEBmn2x5bX9Fn8z72yElOL6D
P3egf9vO / wDSqSlegz93oH / bzv8A0qkpXoM / d6B / 287 / ANKpKV6DP3egf9vO / wDSqSlegz93oH / b
zv8A0qkpXoM / d6B / 287 / ANKpKV6DP3egf9vO / wDSqSlegz93oH / bzv8A0qkpXoM / d6B / 287 / ANKp
Ke6r + g3jgccfJJTl5P8A4qunf + m / P / 8AP3TUlK + qf / iV6N / 6b8X / AM81pKR / WgtGHVuOG39L / wBr
g4s + i76O0O1SU81uq / f6F / mWf + k0lK3Vfv8AQv8AMs / 9JpKVuq / f6F / mWf8ApNJSt1X7 / Qv8yz / 0
mkpW6r9 / oX + ZZ / 6TSUrdV + / 0L / Ms / wDSaSlbqv3 + hf5ln / pNJSt1X7 / Qv8yz / wBJpKVuq / f6F / mW
f + k0lO71wNdgYHu6c0bNDmA + mfaz + Z04SU4vpt / 0n1f / AOl / 5FJSvTb / AKT6v / 8AS / 8AIpKV6bf9
J9X / APpf + RSUr02 / 6T6v / wDS / wDIpKV6bf8ASfV // pf + RSUr02 / 6T6v / APS / 8ikpXpt / 0n1f / wCl
/ wCRSUr02 / 6T6v8A / S / 8ikpXpt / 0n1f / AOl / 5FJT3Vf0G8cDjj5JKcvJ / wDFV07 / ANN + f / 5 + 6akp
X1T / APEr0b / 034v / AJ5rSUj + tD62YdRsfi1j1ecyr1WfRd9EBr9UlPNfaMb / ALk9H / 8AYQ / + kUlK
+ 0Y3 / cno / wD7CH / 0ikpX2jG / 7k9H / wDYQ / 8ApFJSvtGN / wByej / + wh / 9IpKV9oxv + 5PR / wD2EP8A
6RSUr7Rjf9yej / 8AsIf / AEikpX2jG / 7k9H / 9hD / 6RSUr7Rjf9yej / wDsIf8A0ikpX2jG / wC5PR //
AGEP / pFJTu9cdX9gwC63AYCzQ5VW9h9rP5ppYdoSU4u6j / uT0T / 2HH / pNJSt1H / cnon / ALDj / wBJ
pKVuo / 7k9E / 9hx / 6TSUrdR / 3J6J / 7Dj / ANJpKVuo / wC5PRP / AGHH / pNJSt1H / cnon / sOP / SaSlbq
P + 5PRP8A2HH / AKTSUrdR / wByeif + w4 / 9JpKVuo / 7k9E / 9hx / 6TSU91X9BvHA44 + SSnLyf / FV07 / 0
35 // AJ + 6akpX1T / 8SvRv / Tfi / wDnmtJSP60XV0YdTrMinGBtjdfSbwfa7QNDHwfNJTzX7Qxv / LPB
/ wDYA / 8ApFJSv2hjf + WeD / 7AH / 0ikpX7Qxv / ACzwf / YA / wDpFJSv2hjf + WeD / wCwB / 8ASKSlftDG
/ wDLPB / 9gD / 6RSUr9oY3 / lng / wDsAf8A0ikpX7Qxv / LPB / 8AYA / + kUlK / AGN / wCWeD / 7AH / 0ikpX
7Qxv / LPB / wDYA / 8ApFJTu9burb0 / AecvGoD2Sh4Ueo1 / tZqxpYdqSnF + 1U / + WnTv / YMf + kklK + 1U
/ wDlp07 / ANgx / wCkklK + 1U / + WnTv / YMf + kklK + 1U / wDlp07 / ANgx / wCkklK + 1U / + WnTv / YMf + kkl
K + 1U / wDlp07 / ANgx / wCkklK + 1U / + WnTv / YMf + kklK + 1U / wDlp07 / ANgx / wCkklK + 1U / + WnTv / YMf
+ kklPdV / QbrOg1GgSU5eT / 4qunf + m / P / APP3TUlK + qf / AIlejf8Apvxf / PNaSkf1oyBjYdT3ZTcO
bY3upGRPtdptcHR8UlPNftWv / wAuqv8A3Hs / 9JpKV + 1a / wDy6q / 9x7P / AEmkpX7Vr / 8ALqr / ANx7
P / SaSlftWv8A8uqv / cez / wBJpKV + 1a // AC6q / wDcez / 0mkpX7Vr / APLqr / 3Hs / 8ASaSlftWv / wAu
qv8A3Hs / 9JpKW / atf / lzV / 7j2f8ApNJS / wC1a / 8Ay6q / 9x7P / SaSnqMzDzM7Axh5eXXSGVhz7H0M
sDwWt1DHj2 / JJTzX7Rp / 8vqP / ceP / SKSlftGn / y + o / 8AceP / AEikpX7Rp / 8AL6j / ANx4 / wDSKSlf
tGn / AMvqP / ceP / SKSlftGn / y + o / 9×4 / 9IpKV + 0af / L6j / wBx4 / 8ASKSlftGn / wAvqP8A3Hj / ANIp
KV + 0af8Ay + o / 9×4 / 9IpKdbD + sh2ZqxmV5mVVkXNHvtGM5m4z + 62qAkp6VpBaC3giR8ElOVk / + Krp
3 / pvz / 8Az901JSvqn / 4lejf + m / F / 881pKR / WjKGLh2POW7Cm2N7aRdPtd7driI + KSnmv2wz / AMvL
f / YFn / k0lK / bDP8Ay8t / 9gWf + TSUr9sM / wDLy3 / 2BZ / 5NJSv2wz / AMvLf / YFn / k0lK / bDP8Ay8t /
9gWf + TSUr9sM / wDLy3 / 2BZ / 5NJSv2wz / AMvLf / YFn / k0lK / bDP8Ay8t / 9gWf + TSUr9sM / wDLy3 / 2
BZ / 5NJT0HWOonEwMGwdTOF6rAfU + zi71fa0yWn6PKSnF / bTP / L // AOFzElK / bTP / AC // APhcxJSv
20z / AMv / AP4XMSUr9tM / 8v8A / wCFzElK / bTP / L // AOFzElK / bTP / AC // APhcxJSv20z / AMv / AP4X
MSUr9tM / 8v8A / wCFzElK / bTP / L // AOFzElPb1mWNMzIGvEpKcvJ / 8VXTv / Tfn / 8An7pqSlfVP / xK
9G / 9N + L / AOea0lNrqWHlZtTa8XLfhua7cXsAcSII26wkpz / 2D1j / AMu7 / wDttv8A5JJSv2D1j / y7
v / 7bb / 5JJSv2D1j / AMu7 / wDttv8A5JJSv2D1j / y7v / 7bb / 5JJSv2D1j / AMu7 / wDttv8A5JJSv2D1
j / y7v / 7bb / 5JJSv2D1j / AMu7 / wDttv8A5JJSv2D1j / y7v / 7bb / 5JJSv2D1j / AMu7 / wDttv8A5JJT
czsDqWRRRVh9QdivqEWWem2w2aASQXCOElNL9i / WH / y9d / 7DM / 8AJpKV + xfrD / 5eu / 8AYZn / AJNJ
Sv2L9Yf / AC9d / wCwzP8AyaSlfsX6w / 8Al67 / ANhmf + TSUr9i / WH / AMvXf + wzP / JpKV + xfrD / AOXr
v / YZn / k0lK / Yv1h / 8vXf + wzP / JpKV + xfrD / 5eu / 9hmf + TSUr9i / WH / y9d / 7DM / 8AJpKdxoIaATJA
1Pikpysn / wAVXTv / AE35 / wD5 + 6akpX1T / wDEr0b / ANN + L / 55rSU38rKZiiveWg2vFbNxIlxBMaNd
4JKaY67iOaXtsrLWta8kF5hrhuB / mvAfw5SU2cbMOW1z8cVvDHFjjucIcIcIJGtY8UlJHWXsaXuYyG
gk + 9x0HwrSU5v / OXB / lf9tZH / vMkpX / OXB / lf9tZH / vMkpX / ADlwf5X / AG1kf + 8ySm7i5rs2kX47
WlhJEuL2GR / JfU0pKTbsn9xn + ef / AEmkpW7J / cZ / nn / 0mkpBn9Rp6e2t1 + nqSBDbH6iP9HW / x7pK
af8Azlwf5X / bWR / 7zJKZV / WLDtsbWyS55DWzXeBJ05OOAkp0d2T + 4z / PP / pNJSt2T + 4z / PP / AKTS
Urdk / uM / zz / 6TSUrdk / uM / zz / wCk0lK3ZP7jP88 / + k0lK3ZP7jP88 / 8ApNJSt2T + 4z / PP / pNJSVJ
Tk5P / iq6d / 6b8 / 8A8 / dNSUr6p / 8AiV6N / wCm / F / 881pKZfWDJsxsWt1Ya7dZBDqvWHB / N31 / ekpw
ndVy3 / TZW7WdcIHXx / pCSm5gdU6oLGO9F7qC73inDLZ / tC9wSU9FaXNre5n0g0kaTrHhokp5z9qf
WH / R2f8AsC7 / AN6ElLjqf1hJA2WCdJOE6P8A24SU9KkpSSlJKUkpwvrS1prx9zd3uf8AmOs7N / cu
qSU89sr / ANF / 4BZ / 72JKbeJhMba1 + XgX20wZbXj2sJ00hxyXJKbv2fov / lPnf5ln / pVJSvs / Rf8A
ynzv8yz / ANKpKb3SK + n15ROJgZOI8sINlzXBpEg7fc92uiSnYSUpJSklKSUpJTk5P / iq6d / 6b8 //
AM / dNSU5v1Y + s / 1bx / q30mi / q2DVbVg4zLK35NTXNc2pgc1zS + QQUlN3I + sP1Ly2hmX1Ppd7WmQ2
3IoeAfGHPKSkH7S / xef9yui / 9uY396SmzR9ZfqdjVinG6r0ymsTDK8ihrROvDXhJTP8A52fVX / y5
6f8A + xVP / pRJSv8AnZ9Vf / Lnp / 8A7FU / + lElK / 52fVX / AMuen / 8AsVT / AOlElK / 52fVX / wAuen / +
xVP / AKUSUr / nZ9Vf / Lnp / wD7FU / + lElK / wCdn1V / 8uen / wDsVT / 6USUr / nZ9Vf8Ay56f / wCxVP8A
6USUgyuu / UnODRmdS6ZeGSWizIpdE8xL0lNf7Z / i6 / 7l9I / 7fo / 8mkpvN + tX1UY0Nb1jp4a0QAMq
nQD + 2kpf / nZ9Vf8Ay56f / wCxVP8A6USUr / nZ9Vf / AC56f / 7FU / 8ApRJSv + dn1V / 8uen / APsVT / 6U
SUr / AJ2fVX / y56f / AOxVP / pRJSv + dn1V / wDLnp // ALFU / wDpRJSv + dn1V / 8ALnp // sVT / wClElK /
52fVX / y56f8A + xVP / pRJSv8AnZ9Vf / Lnp / 8A7FU / + lElObkfWf6tu + smBeOrYJqZg5rh3DJq2tc +
3ALWl2 + JIY6PgUlP / 9k =

2351application / pdf Библиотека Adobe PDF 9.0 Ложь
конечный поток
эндобдж
5 0 obj
>
эндобдж
3 0 obj
>
эндобдж
7 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / XObject >>> / TrimBox [0.0 0.0 595.276 841.89] / Type / Page >>
эндобдж
8 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / XObject >>> / TrimBox [0.0 0.0 595.276 841.89] / Type / Page >>
эндобдж
9 0 объект
> / ExtGState> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / Properties >>> / XObject >>> / TrimBox [0.0 0.0 595.276 841.89] / Type / Page >>
эндобдж
10 0 obj
> / ExtGState> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / Properties> / MC1> / MC2 >>> / XObject >>> / TrimBox [0.0 0,0 595,276 841,89] / Тип / Страница >>
эндобдж
11 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / XObject >>> / TrimBox [0.0 0.0 595.276 841.89] / Type / Page >>
эндобдж
12 0 объект
> / ExtGState> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / Properties >>> / XObject >>> / TrimBox [0.0 0.0 595.276 841.89] / Type / Page >>
эндобдж
13 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / XObject >>> / TrimBox [0.0 0.0 595.276 841.89] / Type / Page >>
эндобдж
14 0 объект
> / ExtGState> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] / Свойства >>> / XObject >>> / TrimBox [0.XH ׉ Ȍ,; Y! QM # ǋI_o> wp_7 & ɥϧCOsq> | = # Z ㇻ | wO6ԧo ~ {] i7) $ dq6AX
; {$ X1w? Oow ן

% PDF-1.6
%
1114 0 объект
>
эндобдж

xref
1114 75
0000000016 00000 н.
0000003056 00000 н.
0000003226 00000 н.
0000003820 00000 н.
0000003876 00000 н.
0000004031 00000 н.
0000004184 00000 п.
0000004339 00000 н.
0000004495 00000 н.
0000004975 00000 н.
0000005523 00000 н.
0000005894 00000 н.
0000006296 00000 н.
0000006567 00000 н.
0000007021 00000 н.
0000007530 00000 н.
0000007977 00000 п.
0000008478 00000 п.
0000009257 00000 н.
0000009343 00000 п.
0000009600 00000 н.
0000009716 00000 н.
0000009967 00000 н.
0000010551 00000 п.
0000010816 00000 п.
0000011321 00000 п.
0000011594 00000 п.
0000012277 00000 п.
0000012381 00000 п.
0000012496 00000 п.
0000012609 00000 п.
0000014244 00000 п.
0000015667 00000 п.
0000015807 00000 п.
0000015836 00000 п.
0000016302 00000 п.
0000017794 00000 п.
0000019004 00000 п.
0000019139 00000 п.
0000019168 00000 п. «TJԪ = (J / CT * TUU8’i & H |

cijk — Синонимы cijk | Антонимы cijk | Определение cijk | Пример cijk | Синонимы слов API

CIJK -FM	Даррин Харви был назначен ведущим утреннего шоу после нескольких лет работы в середине дня.Мел Сэмпсон вернулся в качестве директора программы.
CIJK -FM	Кертис Брэй стал программным и музыкальным руководителем 89.3 K-ROCK Kentville. Он был с Corus Radio Kitchener.
CIJK -FM	Дуэйн Савчин был повышен до регионального менеджера по продажам Newcap Maritimes (шесть рынков с 10 станциями в NS, NB и PEI) и базировался в Галифаксе.Он был руководителем розничных продаж в CFRQ-FM / CKUL-FM Дармут / Галифакс.
CIJK -FM	Уилл Маккей, ранее работавший в Corus Radio Kitchener, стал генеральным менеджером / генеральным менеджером по продажам в Newcap’s K-Rock 89.3 Kentville 28 июня. Маккей с 15-летним опытом продаж и маркетинга был старшим торговым представителем Corus.
CIJK -FM	Согласно выпуску Northeast Radio Watch от 16 июня, номер CIJK подписан в эфире 12 июня 2008 г. в 8:09.м. и изменен на обновленный формат в июле 2012 года.
CIJK -FM	Кен Геддес, бывший генеральный менеджер K-Rock ( CIJK -FM) Kentville, теперь был генеральным менеджером по продажам на двух станциях Newcap Halifax / Dartmouth.
CIJK -FM	Гэри Тредуэлл больше не был директором программы K-Rock 89.3.
CIJK -FM	CIJK -FM «K-Rock 89.3» подписан в прямом эфире 12 июня в 8:09:30. Станция предлагала формат Classic Rock, который хорошо зарекомендовал себя среди 18-54-летних. Особое внимание будет уделяться местной информации и погоде, а новости будут доставляться семь дней в неделю группой из трех человек. Изначально в CIJK работало 17 человек, занятых полный рабочий день, и шесть человек, работающих неполный рабочий день.Кен Геддес был генеральным менеджером, Гэри Тредуэлл — программным директором, а Дэйв Чок — директором новостей. Среди других сотрудников в эфире были Джулия Кирки (новости), Колин Макиннис (утро), Кейт Пирдон (утро), Даррин Харви (полдень и утро выходных), Мелани Сэмпсон (после обеда) и Нил Спенс (выходные). Студии и офисы располагались по адресу 8794 Commercial Street (Suite 3) в Нью-Минасе.
CIJK -FM	6 июля CRTC одобрил заявку Newcap Inc.за лицензию на вещание на англоязычную коммерческую FM-станцию в Кентвилле. Новая станция будет работать на частоте 89,3 МГц со средней эффективной излучаемой мощностью 9 900 Вт. Предлагаемая радиостанция будет предлагать музыкальный формат Classic Hits, включающий хиты 70-х, 80-х и 90-х годов и ориентированный на взрослых в возрасте от 24 до 54 лет. Все программы будут локальными. Приблизительно 98 часов каждой вещательной недели будут состоять из прямых трансляций, а оставшиеся часы — из голосовых программ.В каждую неделю вещания станция будет предлагать 16 часов разговорных программ, включая 7 часов 30 минут новостей, из которых 75% будут местного содержания, и 8 часов 30 минут материалов наблюдения, таких как местная погода, движение и продвижение общественные мероприятия, а также другая информация, представляющая общий интерес. No related posts. Разное Post navigation NEXT Стоит ли рефинансировать кредит: Выгодно ли рефинансирование кредита PREVIOUS Как накопить бонусы спасибо быстро: Где получать и тратить бонусы СПАСИБО Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт Поиск в: Рубрики Кабинет Карт Мобильный Разное Сбер Советы 2024 © Все права защищены.

Ипотека пенсионерам в 2021 — условия ипотечного кредита для пенсионеров

Вопросы и ответы

Новости институтов развития

Согласие

Кому дают ипотеку на квартиру

Как получить ипотеку и что для этого нужно?

Кому не дают ипотеку на квартиру? Отрицательные факторы

Задай вопрос об ипотеке | Онлайн

Сос! Девочки , кому аижк отказал

с 1 июля вводятся в оборот электронные закладные по ипотеке

Cтавки по ипотеке в России достигли исторического минимума

Первая ласточка

Экономия и скорость

За красивые глаза. Банки приветствуют введение единой биометрической системы распознавания личности

Пока остается бумага

Новости институтов развития

Согласие

Глава FDA просит провести расследование в отношении утверждения препарата Aduhelm

FDA пытается проверить свое одобрение препарата от болезни Альцгеймера от Eisai / Biogen

Анализ белок-белкового взаимодействия выявил новую мишень TMEM17, связанную с раковыми стволовыми клетками, при колоректальном раке

Чжао-лян Юй

Ю-фэн Чен

Бинь Чжэн

Ze-rong Cai

Yi-feng Zou

Цзя Кэ

Ping Lan

Фэн Гао

Сяо-цзянь

Реферат

Предпосылки

Методы

Результаты

Заключение

Введение

Методы

Пациенты

Построение и анализ сети белок-белковых взаимодействий

Таблица 1

36

Короткая интерферирующая РНК

RT-количественная ПЦР

Иммуноблоттинг

Анализ пролиферации клеток

Анализ образования колоний и анализ образования опухолевых сфер

Плазмидные конструкции и сконструированные клеточные линии

Анализ пути

Микроматрица тканей и иммуногистохимическое окрашивание

Статистический анализ

Результат

Анализ сети белок-белкового взаимодействия идентифицировал TMEM17 как связанный с CSC маркер

Таблица 2

Генетическое истощение TMEM17 подавляет пролиферацию клеток в CRC

Targeting TMEM17 повысил чувствительность химиотерапевтических препаратов в CRC

Таргетинг на TMEM17 супрессивную характеристику CSC в клетках CRC

CSC, связанные с TMEM17, были связаны с передачей сигналов Wnt / β-catenin

TMEM17 активирован в CRC и связан с плохой выживаемостью CRC

Обсуждение

Дополнительная информация

Вклад авторов

Финансирование

Утверждение этических норм и согласие на участие

Согласие на публикацию

Конкурирующие интересы

Сноски

Дополнительная информация

Ссылки

FDA требует обзора собственных сделок с биогеном, одобрения лекарств от болезни Альцгеймера

cijk — Синонимы cijk | Антонимы cijk | Определение cijk | Пример cijk | Синонимы слов API

Добавить комментарий Отменить ответ

Сос!
Девочки , кому аижк отказал