МТС- Бонус; как накопить, проверить и потратить баллы на сайте www.bonus.mts.ru – урок TeachVideo

МТС-Бонус

Оператор сотовой связи МТС предоставляет своим абонентам бонусную систему, информацию о которой можно изучить на сайте www.bonus.mts.ru.

По правилам программы, каждый абонент МТС может получать дополнительные минуты, sms и другие вознаграждения , пользуясь услугами связи МТС.

Правила о накопительной бонусной программе «МТС Бонус» вы также можете изучить на сайте.

Регистрация и участие в программе бесплатны. Баллы начисляются участникам программы за все услуги связи МТС. Также за заполнение анкеты, подтверждение своего электронного адреса — абонент будет получать дополнительные баллы.

Каждый участник программы имеет свою персональную страницу, на которой он сможет в любой момент проверить баланс своего бонусного счета, получить подробную информацию о накопленных и потраченных баллах, а также узнать о новых специальных предложениях, которые разработаны компанией МТС.

Узнать более подробно как накопить баллы, на что их потратить и другие условия программы вы можете, изучив информацию, перейдя на соответствующие вкладки сайта.

Процесс регистрации в программе очень прост. Для этого нажмите кнопку «Регистрация» и заполните стандартную анкету. После чего вы получите пароль для входа в свою учетную запись.

На персональной странице будет отображена подробная статистика: Текущий баланс, Ваш стаж в программе и полная информация по бонусному счету.

Если вы уже накопили достаточное количество баллов, вы можете ими воспользоваться, выбрав одно из предложенных вознаграждений. Для этого перейдите по ссылке «Заказать вознаграждение».

На странице «каталог вознаграждений» вы вправе выбрать любое вознаграждение за свои накопленные баллы. Например, журналы, подарочные сертификаты, Бонусные минуты, Бонусные SMS или MMS, а также бонусные мегабайты мобильного Интернета.

Таким образом, бонусная программа МТС позволяет вам ежемесячно получать бесплатные минуты ваших разговоров по телефону и SMS-сообщения.

можно ли оплатить счет мобильного телефона, на что можно потратить, как платить баллами

Оператор сотовой связи МТС предоставляет всем своим абонентам возможность принять участие в специальном предложении «МТС Бонус». Благодаря данной акции, её участники получают возможность использовать свои накопления на различные покупки, а также на другие услуги. Однако пополнить счет МТС бонусами не получится.

В статье представлена подробная информация о том, как можно, не пополняя баланс мобильного телефона, воспользоваться дополнительными услугами с помощью представленной программы.

Получится ли пополнить счет мобильного бонусами от МТС

Накопленные баллы за участие в указанной программе, можно потратить на следующие категории товаров:

1. Техника. Можно приобрести скидочный купон на покупку смартфона или других аксессуаров в специальных магазинах. 10 бонусов равны одному рублю.
2. Бесплатные пакеты. Можно расплатиться за мегабайты интернет-трафика, бесплатные минуты, SMS и MMS сообщения, а также за подключение дополнительных опций.
3. Развлечения. Оператор предлагает возможность приобрести подписки в различных развлекательных сервисах.
4. Предложения от партнёров. Скидочные и подарочные купоны в интернет-магазинах.
5. Книги.
6. Домашний интернет и телевидение. Участники акции в любой момент могут расплатиться за интернет и телевидение с помощью накоплений, собранных в ходе акции.
7. Банк. Можно расплатиться за SMS-уведомления, а также за годовое обслуживание по банковской карте.

Важно! Таким образом, видно, что прямого способа пополнения счета мобильного телефона за счёт указанной акции – не предусмотрено. Однако вы можете приобрести дополнительные опции.

Видео о способах пополнения баланса мобильного на МТС

Пошаговая инструкция по оплате пакетов дополнительных услуг

Как было сказано выше, пополнять баланс телефона за счёт баллов – невозможно. Однако если вы хотите оплатить своими баллами пакеты с опциями, то можете сделать это следующим образом:

1. Перейдите на сайт bonus.mts.ru.
2. Нажмите кнопку «Войти в Мой МТС».
3. Выберите вкладку «Мобильная связь».

   Сайт МТС

4. Далее введите свой номер телефона и пароль, либо получите пароль в SMS-сообщении.
5. После авторизации, перейдите в раздел «Потратить баллы».
6. На открывшейся странице нажмите кнопку «Перейти в каталог вознаграждений».
7. Далее выберите раздел вознаграждений (если хотите приобрести бесплатные минуты, SMS или интернет-трафик, то выберите раздел «Услуги связи»).

   Каталог вознаграждений

8. В разделе выберите тип вознаграждений, который хотите получить.
9. После этого нажмите кнопку «Получить». Также вы можете воспользоваться специальной USSD комбинацией для подключения опции на свой телефон. Узнать номер комбинации можно, выбрав любой пакет с опциями связи на сайте оператора.
10. Через некоторое время после отправки заявки на получение услуг связи, вы получите SMS-уведомление с информацией о статусе заказа.

Ограничения

Абонент может пользоваться своими бонусными баллами для приобретения любых товаров и услуг, предлагаемых оператором в том случае, если у него имеется достаточное количество бонусов, чтобы совершить покупку.

Ограничения для участников представленной акции:

1. Приобретённые пакеты с бесплатными минутами, сообщениями или интернет-трафиком, действительно только в течение одного месяца с момента их получения. По истечению указанного срока, пакет автоматически отключается, а не расходованные минуты, сообщения или трафик – сгорают.
2. Не расходованные услуги связи, аннулированные по истечению действия пакетов – не переносятся на следующий месяц.
3. Приобрести скидочные сертификаты за счёт бонусов, можно только в личном кабинете на сайте бонусной программы.

Принять участие в представленной бонусной программе могут только абоненты представленного оператора.

( Пока оценок нет )

Как пополнить счет МТС: несколько простых способов

Дата: 7 августа 2017 | Обновлено: 19 мая 2019 | Автор: Moblie-man

Сегодня, благодаря повсеместному развитию интернета и использованию его даже на мобильных телефонах и смарт-часах, способов оплаты всевозможных услуг и товаров стало по-настоящему много. Это же касается и непосредственно самих услуг сотовой связи. Впрочем, какие-то из способов внесения платежей являются более простыми и выгодными, другие же – более сложными, но выгодными, а третьи – неудобными, устаревшими и невыгодными. Поэтому сегодня мы предлагаем разобраться с тем, как лучше пополнить счет МТС, в зависимости от ваших возможностей и предпочтений.

Как пополнить счет МТС с банковской карты

Разумеется, практически каждый современный абонент сотовой связи, независимо от того, клиентом какого оператора он является, имеет персональную банковскую карту. И именно с её помощью он нередко оплачивает покупки в супермаркетах, в городских магазинах, и в онлайне тоже.

Так уж сложилось, что сегодня покупки в Сети наиболее удобно оплачивать картой, и свой счет МТС также можно пополнить таким способом, для этого оператор даже реализовал соответствующую форму на сайте, позволяющую обойти стороной всевозможные сторонние порталы, и даже официальный интернет-банкинг.

Пополнить счет с банковской карты можно следующим образом:

1. Посетите официальный сайт оператора МТС, который размещен в сети по адресу mts.ru.
2. На главной странице сайта обратите внимание на основное меню категорий. Вас интересует раздел «Финансовые услуги и платежи», на него и наведите курсор мыши (или нажмите, если используете сайт с мобильных девайсов с сенсорным дисплеем).
3. В выпадающем списке найдите подраздел «Платежи», а в нем – категорию – «Сотовая связь». Нажмите на нее.
4. На открывшейся странице выберите первый из списка операторов вариант: «МТС».
5. В списке доступных вариантов пополнения нажмите на «Оплата МТС с банковской карты». Таким образом, вы окажетесь в меню оплаты. В которое, к слову, можно перейти и по прямой ссылке, избежав необходимости «бродить» по разделам сайта оператора.
6. Введите номер МТС, который вы хотите пополнить, в соответствующее поле вверху, в котором уже заполнено его начало (+7).
7. Укажите сумму, необходимую к занесению на счет, в соответствующее окно.
8. Введите данные банковской карты, с которой будет производиться оплата, указав номер карты, срок её действия, имя и фамилию носителя карты, а также защитный CVV2-код (изображен под магнитной лентой на обратной стороне карточки, не путать с PIN-кодом).
9. Введите ваш адрес электронной почты, куда поступит квитанция о совершенной транзакции.
10. Сохраните, если такая необходимость присутствует, данные для последующих платежей, установив флажок в соответствующий чекбокс.
11. Нажмите на кнопку «Оплатить».
12. Подтвердите транзакцию, если банком будет запрошена такая необходимость.

Как пополнить счет МТС без комиссии

Если же вас интересует возможность пополнения своего мобильного счета без необходимости дополнительной оплаты комиссии, то здесь существует несколько способов.

1. Как правило, банки предлагают пополнять счет своего мобильного счета при условии использования сервиса интернет-банкинг. То есть, если вы являетесь абонентом Сбербанка России, например, без комиссии оплатить услуги связи от МТС вы можете посредством использования веб-портала «Сбербанк Онлайн».
2. А если вы являетесь клиентом, например, Альфа-Банка, пополнить свой счет можно через систему «Альфа-Клик», и т.д. , в зависимости от используемой карты банка.
3. Впрочем, стоит подчеркнуть и тот факт, что пополнение счета непосредственно через сайт mts.ru, инструкцию к которому мы рассмотрели немного выше, предлагается без взимания дополнительной комиссии.

Как пополнить счет МТС онлайн

Наконец, наиболее распространенный запрос от современных абонентов, который касается возможности пополнения счета в удаленном режиме. Разумеется, использование интернет-банкинга, либо же сайта МТС, это тоже онлайн пополнение, однако существуют и другие возможные варианты выгодного пополнения баланса, которым также следует уделить внимание.

Наиболее распространенными сервисами для оплаты связи можно назвать следующие:

• plati.ru – огромный портал, на котором предлагается продажа массы всевозможных цифровых товаров и услуг;
• webmoney.ru – официальный сайт платежной системы «Webmoney», на котором также присутствует и возможность оплаты сотовой связи;
• Яндекс.Деньги – небезызвестная платежная система от поисковой системы Yandex, позволяющая в любое время пополнить счет на необходимую сумму;
• Qiwi – еще один сервис интернет-кошельков, благодаря которому можно быстро и выгодно оплатить свой счет МТС.

Перечисленных в нашей статье способов вам должно хватить для того чтобы всегда иметь возможность быстро и выгодно пополнить баланс своего мобильного телефона.

Как перевести баллы с МТС на МТС другому абоненту с телефона

Сейчас все пользователи МТС, у которых есть накопленные баллы за использованные минуты и сообщения, могут не только их тратить на собственные нужды, но и переводить своим близким и друзьям. Это очень удобная услуга, которая может выручить друга в трудную минуту. Бывают жизненные ситуации, когда нет возможности пополнить своевременно счет, а позвонить или отправить СМС нужно срочно, в таких случаях бонусы товарища помогут решить эту проблему. Как же перевести баллы с МТС на МТС?

Способы передачи баллов другому абоненту

Перечислить баллы не составит труда даже самому некомпетентному пользователю. Представленные инструкции дадут возможность сделать это за несколько минут. Никакие дополнительные знания для этой процедуры не требуются.

Есть два варианта передачи бонусных баллов МТС другу:

1. Можно подарить бонусы МТС при помощи смс на номер 4-5-5-5. Тут вписываем текст «Дар» или «GIFT» отступаем с помощью пробела, вводим телефон того человека, которому вы решили перекинуть бонусы, состоящий из одиннадцати цифр, снова пробел и количество бонусов. (Пример GIFT 78541269884 500) Нажимаем отправить.
2. Также для передачи можно использовать сайт компании. Как перевести баллы на МТС с сайта? Осуществляется вход на mts.ru, а потом и в личный кабинет. Выбирается вкладка, где указана необходимая нам услуга. Изначально не забудьте проверить, сколько баллов имеется у вас на счете в настоящий момент, а уже потом переходите в пункт «Передачи баллов». Введите все нужные данные в заявку. Человеку, которому вы дарите бонусы должно прийти сообщение на номер телефона, о том, что осуществляется данная операция. После передачи им бесплатного подтверждающего СМС, ему будут зачислены ваши бонусы.

Стоимость услуги

Теперь вы знаете, как подарить баллы на МТС. Если вы еще даже не произвели подключение этой опции, то немедленно сделайте это, не теряйте возможность сэкономить.

Сама передача бонусов другу в домашнем регионе абсолютно бесплатна. В роуминге придется оплатить такой перевод, согласно местным тарифам. Но есть один нюанс, ваш товарищ должен быть участником программы «МТС-Бонус». Как передать бонус, если друг не является участником? Тут выход один, подключить эту опцию.

Ограничения

Имейте в виду, что перечислять бонусы нельзя в неограниченном количестве, так как существует определенный лимит.

• На протяжении одного месяца можно скидывать баллы только 10 раз;
• один абонент от вас сможет в сутки получить только 3 тысячи бонусов.

Абоненты МТС уже с 2011 года имеют возможность приносить в дар свои бонусы. Это очень удобно и приятно.

Операции с SIM/USIM-картами и номером Vodafone Украина

У каждой SIM/USIM-карты есть срок действия номера.  После активации карты он составляет:

После каждого последующего пополнения счета на сумму от 5 грн (кроме услуги «Перевод денег») срок действия продлевается на 365 дней. Проверить срок действия номера можно с помощью запроса: *101#

Если срок действия номера истек, карта может быть заблокирована оператором.

После завершения срока действия номера Vodafone Предоплата предоставление услуг будет ограничено оператором. Абонентский номер, тарифный план, баланс счета и возможность получать входящие звонки сохраняются еще в течение 60 дней. После завершения этого срока, обслуживание абонентского номера будет полностью остановлено, но в течение еще 30 дней абонент может восстановить номер, обратившись в компанию Vodafone Украина.

Также карта может быть заблокирована в случае отсутствия исходящих событий по номеру (звонков, SMS, пользование мобильным интернетом) более чем 180 дней.
Если по истечению срока действия номера карта регистрируется в сети Vodafone, поступают входящие вызовы, но при этом совершать исходящие звонки вы не можете – для продления срока действия номера достаточно пополнить счет на сумму от 5 грн. Пополнение можно произвести любым способом, кроме услуги «Перевод денег».
Если карта не регистрируется в сети – обратитесь в компанию Vodafone Украина для уточнения возможности восстановления такого номера:
111  – бесплатно с мобильного Vodafone в Украине;
0800 400 111  – для абонентов других операторов украины (бесплатно с любого номера в Украине).

Армения | SIM-карта с предоплатой данных Wiki

Армения имеет трех сетевых операторов:

• ВиваСелл МТС (по МТС Армения)
• Билайн (по Veon)
• UCOM (ранее Orange)

2G / GSM на 900 и 1800 МГц, 3G / UMTS на 2100 МГц (и 900 МГц на UCOM), как и в остальной части Европы. ВиваСелл МТС начал с 4G / LTE в 2012 году на 2600 МГц (диапазон 7) и Beeline 2016 на необычных 450 МГц (диапазон 31) и тестирование UCOM на 800, 1800 и 2600 МГц.

Покрытие всех трех провайдеров довольно хорошее. В наши дни вы можете получить услуги мобильной связи практически в любой точке страны, если только вы не путешествуете по сельской местности.

В Нагорном Карабахе, регионе, отколовшемся независимом, но непризнанном на международном уровне государстве Карабах Телеком — единственный оператор мобильной связи. Теперь он перемещен в раздел об Азербайджане, так как у нас есть статья об этой стране, и эта территория де-юре признана во всем мире как часть Азербайджана.Все армянские провайдеры будут работать в Нагорном Карабахе, валюта — драмы.

ВиваСелл МТС (от МТС Армения) [редактировать | править источник]

ВиваСелл МТС — лидер рынка в стране с более чем 60% абонентов мобильной связи в своей сети. В 2017 году он изменил название компании с ВиваСелл МТС на МТС Армения, но название бренда осталось.

Покрытие 2G и 3G составляет 99,8% и 98,8% населения соответственно; при этом 47% жителей Армении обслуживались сигналом 4G / LTE в 2017 году.У него лучшее покрытие и скорость: 2G / 3G / 4G / карта покрытия по самым дорогим ценам.

На пограничном переходе Садахло-Баграташен (основной маршрут между Тбилиси и Ереваном): после армянской иммиграционной службы / таможни с правой стороны находится офис ВиваСелл МТС, открытый круглосуточно и без выходных, который установит SIM-карту / счет за несколько минут. . Они кажутся очень привыкшими к посетителям, которые не говорят по-армянски. Паспорт необходим, сделают ксерокопию.

Наличие [редактировать | править источник]

Их предоплаченная SIM-карта доступна за минимальную плату (100 драмов: вы должны заплатить 1000 драмов, и вы получите SIM-карту вместе с кредитом в размере 900 драмов) в их магазинах: (Карта сервисного центра).SIM-карта предоставляется бесплатно при покупке вместе с пакетом. У них есть две тарифные линии с предоплатой, которые называются «ДА» (ԵՍ) или «Диалект» (Բարբառ). Скорость передачи данных по умолчанию без пакета составляет 20 драм за МБ по обеим линиям.

Комбинированные пакеты [править | править источник]

Viva — это их новый комбинированный тарифный план с минутами внутри сети, минутами внутри страны, SMS и данными на 30 дней:

Цена	Данные	звонков внутри сети	дом. звонки	дом.SMS	Активация
1500 др.	1 ГБ	1500 минут	—	150	* 161 * 1500 #
2500 др.	2 ГБ	2500 минут	50 минут	250	* 161 * 2500 #
3500 др.	3 ГБ	3500 минут	100 минут	250	* 161 * 3500 #
5500 др.	5 ГБ	5500 минут	200 минут	250	* 161 * 5500 #
7500 др.	10 ГБ	7500 минут	350 минут	350	* 161 * 7500 #

Плата за превышение лимита составляет 20 драм за Мб.Пакеты обновляются автоматически. Чтобы остановиться, введите * 161 * 0 #, для проверки остатка — * 160 # и для досрочного обновления * 161 * 4 #.

Пакеты функций данных [править | править источник]

Пакеты услуг

BIT предоставляют доступ в Интернет на 1 день и могут быть активированы на линиях ДА и Диалект:

• на 1 день: BIT1: 200 МБ, 100 драм, активация: * 777 * 1 #
• на 1 день: SuperBIT1: 500 МБ, 150 драм, активация: * 778 * 1 #

Статус услуги можно проверить отправив * 777 # или * 778 #.

Дополнительная информация [редактировать | править источник]

Beeline by Veon Armenia является вторым оператором в стране и имеет хорошее покрытие в 2G (зона 2G) и 3G (зона 3G). В сентябре 2016 года он запустил 4G / LTE в Ереване пока только на необычной частоте 450 МГц (на полосе 31).

Наличие [редактировать | править источник]

У них есть различные предоплаченные SIM-карты, доступные в их магазинах (расположение). Для посетителей SIM-карта «Добро пожаловать» продается за 500 драм, включая кредит в 400 драм.Скорость передачи данных по умолчанию составляет 50 драм за МБ.

Пополнить можно в любой из их торговых точек. Подзарядка вне времени. SIM-карта будет активна, пока ваш баланс положительный (и на вашем балансе есть деньги). Проверить баланс можно набрав * 102 #.

Пакеты функций данных [править | править источник]

Эти пакеты данных предназначены для всех предоплаченных SIM-карт:

Данные	Время	Цена	Активация	Деактивация
200 МБ	24 часа	90 драм	* 1150 #	* 1151 #
500 МБ		150 др.	* 1500 #	* 1501 #
50 МБ	30 дней	200 др.	* 450 #
250 МБ		600 драм	* 4250 #
500 МБ		800 др.	* 4500 #
1 ГБ		1000 драм	* 4401 #
3 ГБ		2000 драм	* 1103 #	* 1003 #
3 ГБ		2500 др.	* 4403 #
6 ГБ		3500 др.	* 1106 #	* 1006 #
10 ГБ		6000 др.	* 4410 #
12 Гбайт		6000 др.	* 1112 #	* 1012 #

Чтобы проверить баланс данных, наберите * 103 #

Подробнее [редактировать | править источник]

• APN: интернет.beeline.am
• Имя пользователя: Интернет
• Пароль: internet

UCOM (переименован в Orange) [редактировать | править источник]

UCOM — самый маленький оператор в стране, но у него по-прежнему хорошая карта покрытия сети по самым низким ценам. Их 4G / LTE был запущен в 2017 году на частотах 800, 1800 и 2600 МГц. В 2017 году 3G доступен для 90% населения, а 4G — для 56% населения.

В 2016 году они были приобретены оператором широкополосного доступа UCOM, который изменил бренд своей сети с прежнего лейбла Orange.

Наличие [редактировать | править источник]

SIM-карты с предоплатой можно приобрести в любом сервисном центре Ucom (расположение), во всех почтовых отделениях супермаркетов Ереван Сити, а также в Carrefour, Zigzag Megastore (Dalma Garden Mall) и других. Для активации вставьте SIM-карту в свой телефон, позвоните на короткий номер 111, следуйте инструкциям голосового меню и выберите нужный язык. После выполнения этих действий ваш номер будет активирован, и вы будете подключены к номеру, по которому звоните.

У Вас будет активирован номер на 3 месяца для доступа ко всем услугам Ucom. Если в течение этого времени счет не будет пополнен, вы также будете получать звонки и SMS еще в течение 6 месяцев (неактивный период). Пополнения на 500, 1000, 2000, 5000 и 10 000 драмов драм, дающие вам услуги от 30 дней до 6 месяцев в зависимости от суммы, проданной в точках обслуживания и супермаркетах. Проверить баланс можно по * 133 #.

SIM-карта для передачи голоса и данных [редактировать | править источник]

Они предлагают две предоплаченные линии U! SIMPLE и их комбинированные планы U! Prepaid:

• U! Просто: этот тариф без базовой ставки можно активировать, набрав * 111 * 11 #.Стоимость данных составляет 15 драм за МБ.
• U! Предоплата: ежемесячный комбинированный план четырех размеров:

План	Данные	SMS	Голос	Цена	Активация
У! 1000	100 МБ	100		1000 драм	* 254 #
U! 1500	1 ГБ	150	100 мин	1500 др.	* 251 #
U! 2000 г.	1.5 ГБ	200	150 мин	2000 драм	* 252 #
U! 300	3 ГБ	300	200 мин	3000 др.	* 253 #

Данные за пределами квоты — 15 драм за Мб. Вы всегда можете сменить тарифный план на другой, просто набрав * 255 #.

Пакеты функций данных [править | править источник]

В дополнение к каждому тарифному плану U! Prepaid и U! Simple можно загрузить следующие пакеты данных.После использования лимита данных вы вернетесь к тарифу на передачу данных в соответствии с предоплаченным планом. Для проверки остатка данных * 205 * 20 #.

Данные	Время	Цена	Активация
300 МБ	1 день	100 др.	* 205 * 1 #
500 МБ	30 дней	750 драм	* 205 * 2 #
1 ГБ	30 дней	1000 драм	* 205 * 3 #
2 ГБ	30 дней	1500 др.	* 205 * 4 #
10 ГБ	30 дней	5000 драм	* 205 * 5 #

Проверить баланс данных набрав * 205 * 20 #.

SIM-карта только для данных [редактировать | править источник]

Они также предлагают тарифный план только для передачи данных под названием U! Daily. Он содержит только данные и SMS, без голоса. Ставка по умолчанию — дневная ставка (до полуночи) 500 МБ за 250 драмов. Вы можете добавить один из трех пакетов:

• 1 ГБ на 7 дней: 1000

драмов РА

• 2 ГБ на 15 дней: 1500 драм
• 5 ГБ на 30 дней: 3000 драм

В случае чрезмерного использования скорость будет снижена до 64 кбит / с.

Дополнительная информация [редактировать | править источник]

по номеру телефона без пароля.Домашний интернет и цифровое телевидение МТС Барнаул. Как отключить и удалить личный кабинет МТС

Вопрос: Здравствуйте! Помогите войти в личный кабинет МТС. Я никогда им не пользовался, но обстоятельства вынуждают разобраться во всех этих вопросах. Деньги на счету пропадают, звонил операторам, говорят, все нормально, но замечаю, что уже несколько дней не звонил, и 20 рублей уже не хватает. Мне сказали, что в личном кабинете можно посмотреть подробную информацию и подключенные платные услуги.

Ответ: Здравствуйте! Войти в личный кабинет МТС очень просто, достаточно один раз увидеть, как это делается, и все станет ясно. Нам понадобится любое устройство, будь то смартфон, планшет или ноутбук, главное, чтобы был доступ в Интернет.

Пошагово покажем, как войти в личный кабинет МТС, а по подробностям и платным услугам я сделаю отдельные статьи и приложу их в конце инструкции. Итак, приступим к обучению.

Шаг 1 — поехали!

1.
Заходим на сайт компании МТС по адресу — mts.ru. После полной загрузки страницы в правом верхнем углу появится ссылка — «Мой МТС». Если навести на него указатель мыши и щелкнуть, появится всплывающее меню. Взгляните на изображение ниже.

Здесь я сделал большую картину. Нажмите «Мой МТС» — «мобильная связь».
«.

Шаг второй!

2.
Выбираем «Мобильная связь» и попадаем на страницу авторизации.Здесь вам нужно ввести свой номер телефона и пароль. Мы знаем номер телефона, но нам нужно получить пароль. Для этого нажмите ссылку — «Получить пароль по SMS». См. Изображение ниже.

Шаг третий!

3.
Чтобы получить пароль — заполните специальную форму. Вводим ваш номер телефона без восьмерки. Далее вводим символы с картинки в специальное поле. Нажимаем кнопку — «Получить пароль». Взгляните на изображение ниже.

Если код с картинки введен правильно, вы увидите это уведомление.

Шаг четвертый!

5.
Вынимаем телефон и ждем смс с паролем. Получил? Отлично! Заходим на страницу авторизации, вводим номер телефона и пароль из смс сообщения.

Обратите внимание на символы верхнего и нижнего регистра в пароле. Например: hT8Nwd — в пароле буквы T и N заглавные, если вводить их маленькими буквами, то войти не получится — будет ошибка.

Готово! Зашли в личный кабинет МТС!

Что можно сделать в личном кабинете МТС?

Многие абоненты не пользуются личным кабинетом МТС и не понимают, для чего он нужен.

В личном кабинете вы можете самостоятельно менять тарифный план, подключать и отключать услуги, принимать детализацию звонков, контролировать свои расходы и многое другое. Используя личный кабинет, вы избавляетесь от утомительных звонков им. поддержка МТС.

В личном кабинете МТС вы можете:

• Узнайте, для кого предназначена SIM-карта;
• Посмотрите свой номер и текущий баланс;
• Пополнить баланс;
• Узнай свой тариф — переключись на другой;
• Услуги подключения и отключения;
• Отключить платные подписки;
• Узнать остаток бесплатных минут, SMS, MMS, Интернет;
• Детализируйте разговоры за необходимый период времени;
• Выставить счет на оплату;
• Заблокируйте свой номер телефона;
• потратить бонусные баллы в бонусной программе МТС;

Это далеко не полный список, со всеми возможностями личного кабинета вы можете ознакомиться самостоятельно.

Хотите самостоятельно обслуживать свой номер в сети МТС, управлять различными функциями? Тогда вам понадобится интернет-помощник, через который он предоставит доступ ко всем услугам, предлагаемым провайдером. сотовая связь … Такие возможности предоставляет услуга личного кабинета МТС. Благодаря ему можно проводить такие операции как:

• Активировать или деактивировать опции.
• Сменить тарифный пакет.
• Узнать состояние баланса.
• Пополнить счет.

Как зарегистрироваться в личном кабинете «Мой МТС»?

Регистрация происходит автоматически при получении SIM-карты МТС.

Как войти в личный кабинет

Если вы забыли пароль, вы можете получить новый тем же способом:

Чтобы быстро получить логин и пароль в личный кабинет, отправьте SMS со словом ПАРОЛЬ на номер.

Чтобы не запоминать комбинацию, есть еще один вариант — привязать свой личный аккаунт к аккаунту в социальной сети . .. Нажмите на значок выбранной социальной сети при входе в систему. При вводе имени пользователя и пароля произойдет привязка. Тогда для входа в Мой МТС пароль не потребуется.

Внешний вид главной страницы личного кабинета МТС

Иногда невозможно войти в офис, если перегружает сеть или выполняет наладочные работы оператором. Пожалуйста, попробуйте войти позже.

Если ни один из описанных вариантов не подошел, и вы все равно не смогли попасть в личный кабинет, позвоните в службу поддержки.Короткий номер центра обслуживания клиентов, федеральный: 8-800-250-0890. Нет платы за соединение и звонки.

Рядовому пользователю сотовой связи не всегда удается самостоятельно разобраться, как подключить тот или иной вариант. Поэтому для удобства и комфорта использования тарифных планов компания начала использовать интернет-помощника МТС и личный кабинет. Этот робот позволяет быстро находить ответы на интересующие вас вопросы с минимальными затратами времени и усилий. Давайте разберемся, как подключить помощника МТС к номеру МТС.

Какой помощник

Если вы когда-либо пользовались «Личным кабинетом» от МТС, вы лучше поймете суть Интернет-помощника. Сервис предоставляет тот же функционал, только версия более современная и адаптирована к запросам пользователей. Услуга разработана таким образом, чтобы рядовой пользователь сотового оператора мог решить свои проблемы без помощи сотрудников салона связи.

В чем преимущества подключения мобильного помощника от сотового оператора?

1. Лучше и практичнее заниматься управлением услугами или опциями.
2. Полностью контролируйте расходы, связанные с использованием услуг сотового оператора.
3. Монитор бонусной программы.
4. Наблюдать и настраивать режимы опции звукового сигнала.
5. Быстро находите местонахождение друзей, выполняйте другие операции со своим номером телефона.

Как активировать услугу сотового помощника

Вы можете использовать эту услугу не только через веб-интерфейс, который разработан как приложение. Как подключить интернет-помощника с телефона Android или Apple? Вы можете получить доступ к этой программе для своего смартфона через специальные приложения для загрузки.Кроме того, если вы выходите в Интернет, сторонние сайты также полны приложений для загрузки. Это касается телефонов на платформе Windows.

Чтобы получить прямую ссылку и единый пароль для доступа к помощнику, наберите * 111 * 1 # и гудок. После этого вы получите ссылку для входа в Интернет-помощник по SMS. Ваши действия — просто перейдите по этой ссылке, и вы сможете скачать то, что вам нужно.

Как авторизоваться без установки приложения?

Как подключить услугу, если у вас старый телефон, вы также можете пользоваться этой услугой, даже не устанавливая приложение.Просто через программу выполнять определенные операции намного проще.

Для входа с кнопочного телефона достаточно набрать * 111 #, а затем кнопку вызова. Таким образом, выбрав тот или иной набор команд в автоответчике, вы также можете повлиять на подключение или отключение опций. Единственное неудобство — необходимость ждать.

Теперь как отключить интернет-помощник МТС. Чтобы отключить опцию, просто удалите приложение с телефона и все.Мобильный помощник МТС и стоимость — бесплатно. Услуга предоставляется оператором «Мобильные телесистемы» бесплатно, поэтому с абонентского счета не будет взиматься дополнительная плата.

Для проверки баланса, подключения, отключения услуг, изменения тарифа или получения интересующей информации абоненты сотовой связи часто обращаются к специалистам технической службы. Намного удобнее воспользоваться онлайн-сервисом в Интернете и попробовать решить проблему самостоятельно. Богатый функционал и понятный интерфейс позволяют получить желаемый результат без помощи специалиста.

Вход в личный кабинет

Быстрая навигация

Для того, чтобы использовать все возможности, предоставляемые компанией, вам необходимо авторизоваться. В качестве логина используется номер в формате + 7xxx. Если вы впервые заходите в Личный кабинет МТС, вам необходимо зарегистрировать .

Регистрация состоит из нескольких простых шагов:

1. На сайте login.mts.ru найдите ссылку «Войти».
2. Нажмите на надпись «Получать по SMS».
3. Введите SIM-карту, для которой вы хотите создать учетную запись.
4. На мобильный будет отправлено сообщение с четырьмя цифрами.
5. Введите полученные номера в специальную форму.

Есть несколько вариантов идентификации, каждый из которых может быть удобен в конкретной ситуации.

Как войти по номеру телефона

Вам не нужно регистрироваться, чтобы воспользоваться преимуществами. Любое устройство (планшет, смартфон, компьютер), находящееся в зоне обслуживания в России или за рубежом, подключенное к сети Интернет через оборудование оператора, позволяет ввести логин в личный кабинет.mts.ru автоматически без пароля.

Нет телефона

Вы можете оформить заявку в личном кабинете. Узнать это можно из договора, на официальном сайте после регистрации или в салоне у консультанта. Этот способ полезен для тех пользователей, которые хотят управлять сразу несколькими SIM-картами в одной учетной записи. Также, чтобы привязать новую SIM-карту, вы можете набрать команду * 111 * 828 * 1 # и следовать появляющимся инструкциям. Вы можете добавить в аккаунт дополнительную SIM-карту, написав заявку в офисе обслуживания.Этот вариант можно использовать только в том случае, если все SIM-карты зарегистрированы на ваше имя.

Авторизация в социальных сетях

В социальных сетях можно установить специальное приложение для быстрого управления тарифами и услугами. По словам представителей оператора связи, сервис поможет «получать информацию о балансе, количестве бонусов на своей странице в социальной сети, а также перейти в Личный кабинет МТС без дополнительной авторизации». «Зайдите в социальные сети« Вконтакте »,« Одноклассники », Facebook, затем установите приложение.В первый раз, когда вы откроете приложение, вам нужно будет идентифицировать себя по номеру. После этого сделайте ссылку на свою учетную запись в социальной сети в меню настроек.

Как восстановить пароль

После трех неудачных попыток входа учетная запись будет заблокирована и вам придется восстановить ее. Также вам может потребоваться повторно получить цифровой код, если вы забыли или потеряли старую комбинацию. В этой же форме на сайте login.mts.ru перейдите по ссылке «Получить по SMS».Вам будет предложено ввести капчу, то есть цифры или буквы с картинки, после чего нажмите «Продолжить». На указанный мобильный телефон будет отправлено сообщение с временным кодом. Воспользуйтесь им и сразу поменяйте на постоянный.

Какие возможности дает официальный сайт

Основные плюсы — 24/7 самообслуживание и мгновенная сдача … Минус только один — нужно иметь под рукой устройство с выходом в сеть. Оцените все преимущества сервиса прямо сейчас, и вы убедитесь, что даже неопытный пользователь сможет освоить понятный и простой интерфейс.Вам не нужно звонить в службу поддержки или обращаться в офис обслуживания, теперь вы самостоятельно меняете настройки тарифа и удаляете ненужные подписки по мере необходимости. Если у вас возникли трудности, обратитесь в службу технической поддержки через чат или форму обратной связи. Ответ придет оперативно, и вы сможете получить максимально достоверную информацию.

В этом разделе вы можете:

• включение и отключение пакетов;
• выбирать мелодии вместо гудков;
• проверить остатки пакетов;
• установить родительский контроль;
• запрос подробностей звонка;
• заблокировать и активировать SIM-карту;
• настроить переадресацию звонков;
• использовать акции и специальные предложения;
• пополнить баланс без комиссии;
• сменить тарифный план.

Вы также можете сохранить все контакты на случай потери смартфона, отправить SMS-сообщения, создать облачное хранилище данных. Чтобы активировать или деактивировать пакеты, проверить, какие из них были подключены и по какой цене, перейдите в специальное меню. Одним щелчком мыши вы можете управлять предложениями от оператора. Использование всех перечисленных функций бесплатно для любого абонента , независимо от того, в каком регионе вы находитесь: Москва, Московская область, Воронежская область или Хабаровский край. Вы платите только за потребленный трафик.

Еще не так давно нам было сложно даже представить, как можно проводить транзакции, связанные с мобильным счетом через Интернет. Теперь это доступно каждому. Практически все операторы мобильной связи предоставляют своим клиентам услуги личного кабинета, при входе в который любой абонент получает доступ к своему мобильному счету. Управлять услугами сотовой связи по сети намного проще и быстрее, чем обращаться в офис компании по любому вопросу.

Итак, внедрение услуги личного кабинета можно назвать результатом масштабных разработок сотовых операторов, в том числе МТС, в сфере удаленного обслуживания клиентов.Мы рассмотрим процедуру регистрации и порядок проведения транзакций в личном кабинете МТС, а также узнаем больше о программе МТС Бонус, возможности давать бонусы и детально звонить.

Как зарегистрироваться в личном кабинете МТС

Чтобы стать пользователем личного кабинета, необходимо сначала пройти процедуру регистрации. Для этого зайдите на сайт и найдите ссылку «Мой МТС», расположенную в самом верху страницы справа. Нажав на нее, вы раскроете небольшой список, в котором нужно выбрать пункт « мобильная связь ».

Вы перейдете на страницу. Сделав на нем закладку, вы в дальнейшем сможете быстро попасть в личный кабинет (раньше он назывался Интернет-помощник).

Теперь вам нужно узнать пароль от личного кабинета.

Как получить пароль от личного кабинета

Чтобы получить доступ к своим тарифам и всем доступным вам сервисам через личный кабинет, введите номер своего мобильного телефона в специальное поле. Вы можете указать номер, начиная с +7 или 8.Затем нажмите ссылку, расположенную чуть ниже « Получить пароль по SMS ».

Вскоре вы получите сообщение на свой телефон с указанием пароля для входа. Поэтому не расставайтесь со своим мобильным телефоном на момент регистрации. Есть еще один способ — набрать на телефоне uSSD команду «111» 25 # и получить SMS с нужным паролем. Аналогичным образом выполняется восстановление забытого пароля.

Как войти в личный кабинет МТС

Введя полученный код в колонку «пароль», вы получаете бесплатный доступ к своей виртуальной учетной записи, где вы можете получать информацию о состоянии счета, менять тарифы, добавлять и удалять подписки, тратить или давать бонусные баллы и выполнять множество других операций, которые предлагает вам Интернет.Ассистент. Для авторизации достаточно ввести номер телефона в одну колонку, а полученный пароль — в другую.

Никому не сообщайте свой пароль, чтобы не попасть в затруднительную ситуацию.

Как происходит детализация звонков в личном кабинете МТС?

Если вы успешно выполнили все описанные выше операции, можете переходить к изучению процедуры получения детализации разговоров. Стоит отметить, что данная услуга предоставляется абонентам МТС абсолютно бесплатно. Для уточнения деталей выберите в меню, расположенном слева на странице личного кабинета, строку «Контроль затрат»

и в выпадающем списке найдите пункт «Детали звонка».

Указав интересующий вас период, распечатку разговоров, по которым вы хотели бы видеть, нажмите кнопку «Далее». Затем выберите способ доставки: это может быть электронная почта или напрямую в личный кабинет МТС. В первом случае вам нужно ввести свой адрес электронной почты в свободное поле; если вы предпочитаете второй вариант, подождите несколько минут, пока нужный документ не появится в разделе «Заказанные документы».Срок детализации не должен превышать 6 месяцев.

Как пожертвовать баллы через личный кабинет

Для этой операции вам также понадобится меню в левой части страницы.

Чтобы сделать подарок своим друзьям, отправив им полученные бонусные баллы, перейдите в пункт меню « Подарочные баллы », введите номер телефона получателя и количество бонусов, с которыми вы хотите расстаться.

После того, как вы нажмете кнопку «Отправить», человек, которому предназначен подарок, получит сообщение с кодом, подтверждающий, что он получит указанное количество бонусных баллов МТС.

Перечисленные операции представляют собой лишь часть всего разнообразия возможностей, которые вы получаете при регистрации на сайте МТС. Таким образом, вы всегда будете знать, сколько денег у вас на счету, вы можете быстро пополнить баланс, отключить или подключить платные и бесплатные услуги, выбрать нужный тарифный план, изменить гудок, установить мобильный Интернет и т. Д.

Так что спешите зарегистрироваться в личном кабинете и будьте всегда на связи!

Жизненный цикл МТ: постоянный рост внутри клетки, асимметричные частоты переходов и эффекты границы клетки

Введение

Быстрое ремоделирование массива микротрубочек (МТ) важно при большой подвижности
ячеек, потому что такие ячейки постоянно меняют свои
форма.В фибробластоподобных клетках МТ образуют радиальный массив, выходящий из
центросома с минус-концами, привязанными к центросоме, и плюс-концами, идущими
к периферии клетки (рассмотрено

Десаи и Митчисон, 1997;

Китинг и Бориси, 1999).
Хотя многие исследования посвящены аспектам динамики МП, полное
понимание жизненного цикла MT еще не достигнуто. В частности,
первые фазы, а именно формирование на центросоме и рост в клетке
интерьер не анализировался напрямую из-за технических ограничений
обусловлено высокой плотностью МТ в центросомной области.

В предыдущих исследованиях динамика и оборот MT в культивируемых клетках
линии были проанализированы в основном с использованием флуоресцентно меченного тубулина. В
картина, которая возникла в результате этих исследований, заключается в том, что МТ in vivo подвергаются
частые переходы между фазами роста и сокращения
(

Саммак и др., 1987;

Cassimeris et al., 1988;

Шелден и Уодсворт, 1993;

Waterman-Storer и Лосось,
1997;

Ивон и Уодсворт,
1997).

Однако некоторые соображения позволяют предположить, что эта картина неполная.Один из основных моментов состоит в том, что почти все наблюдения индивидуальной динамики МП в
vivo были сделаны рядом с краем клетки. Это потому, что ячейка тоньше
а плотность МТ ниже у края ячейки, что позволяет лучше
визуализация отдельных МП. Следовательно, динамика МТ в клетке
внутренние помещения остались практически неизученными, а формальная возможность
существует то, что они отличаются от таковых на краю ячейки. Второй момент
что динамика MT in vivo демонстрирует сложность, не наблюдаемую in vitro.In vitro, т
динамика характеризуется переходами между четко определенными фазами
рост и укорочение (

Митчисон и
Киршнер, 1984а;

Mitchison
и Киршнер, 1984b;

Хорио
и Хотани, 1986;

Уокер и др.
др., 1988). Напротив, МТ во многих типах клеток плохо проявляются.
определенные фазы. Кроме того, МТ in vivo часто находятся в состоянии покоя, ни
ни рост, ни сокращение — такое поведение называется паузой. Рост и сокращение
сильно варьируется с точки зрения скорости, продолжительности и протяженности, но в целом
быть краткими.Например, средняя длина роста составила 1,3 мкм.
м в клетках PtK ₁ и 3,2 мкм в клетках СНО
(

Шелден и Уодсворт,
1993).

Трудность четкого определения фаз роста и сокращения in vivo
вел нас (

Воробьев и др., 1999;

Воробьев и др., 1997) на
представить альтернативное описание динамики МП. Динамика МП была
рассматривается как одномерное случайное блуждание их плюсовых концов по ячейке
радиус и их общие свойства характеризовались двумя параметрами:
коэффициент диффузии и коэффициент дрейфа.Распространение
коэффициент — мера амплитуды (квадрат) роста и сокращения
экскурсий в единицу времени, в то время как параметр дрейфа представляет дисбаланс
увеличения и уменьшения экскурсий с течением времени. Эта структура предоставила
анализ динамики, не зависящий от подробных предположений о росте или
укорачивающее поведение. Параметры диффузии и дрейфа позволили прогнозировать
распределения длины установившегося состояния MT и времени оборота
население МТ. Тем не менее, время оборота, прогнозируемое на основе заявленных
параметры нестабильности были существенно больше экспериментальных
определения (

Воробьев и др. ,
1997). Аналогичный вывод был сделан из анализа Монте-Карло.
с использованием модели динамической неустойчивости
(

Гликсман и др., 1993).
Исходя из предположения, что на концах МТ плюс происходят стохастические экскурсии
такие как случайное блуждание, наблюдаемое в ламеллярной области PtK ₁
клетки (

Воробьев и др., 1997).
или в меланофорах рыб (

Воробьев и др.,
1999), время зарождающейся МП плюс конец, начиная с
центросома, чтобы вырасти до края клетки (или укорочиться от края клетки назад
к центросоме) будет несколько часов для типичной культивируемой клетки радиусом
25 мкм.Такое долгое время кажется несовместимым с требованиями быстрого
ремоделирование цитоскелета в поведении подвижности клеток. Это несоответствие между
теоретический и экспериментальный анализ оборачиваемости МП — третий пункт
предполагая неполноту нашего понимания динамики МТ in vivo.
Таким образом, мы посчитали, что динамика МП внутри клетки может каким-то образом
отличаться от такового у края ячейки. Поддерживая эту точку зрения, некоторые
исследования сообщили о способности МТ in vivo проявлять поведение, отличное от
быстрые колебания между сокращением и ростом.Было замечено, что MT
постоянно растут в ламеллоподиях тритона клеток легких
(

Waterman-Storer и Лосось,
1997) и непрерывно превращаться во вновь образованные выступы
стимулированных HGF клеток PtK ₁
(

Wadsworth, 1999).

Эти соображения, взятые вместе, побудили нас заново исследовать жизнь
цикл МТ процедурами, предназначенными для оценки их поведения в ячейке
внутрь и, в частности, в окрестности центросомы. Используя
сочетание новых подходов, мы обнаружили, что поведение МТ в клетке
интерьер действительно отличался от такового у края камеры.Примечательно, зарождающийся
МТ, недавно зародившиеся на центросоме, постоянно росли, пока
подошла к краю ячейки. Только тогда они показали частые
колебания между ростом и сокращением, которые считаются
признак динамической нестабильности. Мы предлагаем пересмотренный взгляд на динамику МП в
vivo, при котором «стандартным» состоянием зарождающейся МТ является постоянный рост. В
с этой точки зрения, «динамическая нестабильность» на краю ячейки является результатом поведения
системы МП, работающей при ограничении «граничного условия».

Материалы и методы

Культуры клеток и цифровая флуоресцентная визуализация

клеток CHO-K1 и NRK выращивали в среде F-10 с добавлением 10% фетального
бычья сыворотка и антибиотики на покровных стеклах с фототравлением локаторными сетками
(Bellco Glass, Вайнленд, Нью-Джерси). Для наблюдения за динамикой МТ in vivo клетки
культивировали в течение 2 дней после посева и микроинъектировали Cy3-tagged
тубулин в игле с концентрацией 10 мг / мл. Клетки хранились на
предметный столик микроскопа при температуре 36-37 ° C во время наблюдения и температуре
измеряется до и после каждого эксперимента.Клетки, которым вводили Cy3-тубулин
лечились кислородно-истощающим препаратом Оксираза (Oxyrase, Ashland,
OH), чтобы уменьшить фотоповреждение и фотообесцвечивание
(

Михайлов и Гундерсен,
1995). Введенные клетки наблюдались на Nikon Diaphot 300.
инвертированный микроскоп, оснащенный объективом Plan 100 ×, 1,25 NA с использованием
Набор фильтров Cy3 для наблюдений за MT, меченных Cy3, и набор фильтров GFP для
наблюдение GFP-CLIP-170 в временно трансфицированных клетках. Изображения 16-битного
глубину собирали с помощью ПЗС-камеры с медленным сканированием Ch450 (Photometrics,
Тусон, Аризона), управляемый программным обеспечением для визуализации Metamorph (Universal Imaging,
Вестчестер, Пенсильвания).Изображение проецировалось на ПЗС-чип с увеличением.
250 ×, что соответствует разрешению 1 пиксель = 0,09 мкм (11,1
пикселей на мкм). Покадровые серии из 50-200 изображений были собраны на 3-5
секундные интервалы. 16-битные изображения были обработаны и масштабированы с помощью Metamorph
программное обеспечение и 8-битные изображения были подготовлены для презентации в Adobe PhotoShop
(Adobe Systems, Маунтин-Вью, Калифорния). Чтобы выделить интересующие МП в некоторых
фигур, цветные наложения закрашены с непрозрачностью 15% в цветовом режиме
слой в Adobe PhotoShop.

Путь фотообесцвечивания

Фотообесцвечивание проводили на инвертированном микроскопе Zeiss IM-35 с использованием 3
W аргоновый ионный лазер, как описано в другом месте
(

Keating et al., 1997), за исключением
что клетки инкубировали при 37 ° C. Лазерный луч имел форму
стержень примерно 20 × 3 мкм с использованием цилиндрической линзы и Neofluar
100 ×, объектив 1.3 NA. Зона была размещена для фотообесцвечивания прохода через
клетка с центросомой в центре.

Подготовка цитопластов

Цитопласты были приготовлены модификацией описанного метода.
(

Karsenti et al., 1984).
Вкратце, через 2 дня после посева на покровные стекла клетки обрабатывали
нокодазол (1 мкг / мл) и цитохалазин D (1,5 мкг / мл) в течение 90 минут.
Затем покровные стекла помещали «клетками вниз» в центрифужные пробирки, содержащие
питательной среды с лекарствами и центрифугировали при 10000 г для
25 минут для энуклеации клеток. Энуклеация привела к примерно равному количеству
цитопластов, содержащих или не содержащих центросому. Покровные стекла были вымыты
со свежей средой для удаления лекарств и инкубируют 2 часа для полной
восстановление МТ в цитопластах.Для наблюдения за МТ клетки были
микроинъекцию тубулина, меченного Cy3, перед энуклеацией. Для одновременного
наблюдение за МТ и CLIP-170 (см. следующий раздел), клетки были первыми
трансфицированы и позволили экспрессировать GFP-CLIP-170, GFP-CLIP-170-положительный
клетки были микроинъектированы Cy3-тубулином, а затем цитопласты были
готовый.

Трансфекция клеток микроинъекцией

Клетки трансфицировали микроинъекцией ДНК в стеклянные капилляры
ядра по ранее описанной процедуре
(

Perez et al., 1999) с
незначительные изменения и наблюдались через 10-20 часов. Вкратце,
pCB6-myc-GFP-CLIP-170 использовали при концентрации иглы 20 мкг / мл, что
дали достаточно низкие уровни экспрессии рекомбинантного белка без
добавление циклогексимида. Для визуализации центросомы в некоторых
экспериментов, ДНК HsCen-2-GFP (человеческий центрин) смешивали с
ДНК pCB6-myc-GFP-CLIP-170 с таким же промотором. Последняя игла
концентрация каждого вектора была одинаковой, -20 мкг / мл.

Анализ вычитания

Положение активных концов МП и длина роста или укорочения
эпизоды анализировались путем вычитания последовательных изображений
(I _n —I _{n + 1} ) в покадровой серии, как описано
ранее (

Воробьев и др.,
1999). Полученные разностные изображения определили степень
рост или сокращение в виде черных или белых доменов соответственно на концах
индивидуальные МП. Порог (минимальная длина) для определения укорочения
или рост при анализе вычитания был установлен на 0,45 мкм, то есть 5
пикселей в цифровом изображении. Выявлены боковые смещения МП.
от эпизодов роста и сокращения, потому что они давали параллельное расположение
длинных черных и белых сегментов, тогда как рост или сокращение давали одиночные
короткие сегменты, которые были либо черными, либо белыми, но не тем и другим одновременно.

Анализ динамики микротрубочек

Определены следующие параметры динамики МП: мгновенные.
темпы роста и сокращения; коэффициенты сноса и диффузии; и значит
скорость роста. Длины отдельных МТ измерялись по
центросомы (0,0 позиция центросомы) и истории жизни МТ
график зависимости длины (мкм) от времени (секунды). Мгновенные скорости были
измеряется как смещение положительного конца, деленное на время между
последовательные изображения (3-5 секунд) в покадровой серии.Минимум
измеряемое смещение составляло два пикселя на цифровом изображении,
что соответствует 0,18 мкм в ячейке. Гистограммы мгновенных
скорости были получены для MT-популяции, а также средние значения и стандартное отклонение.
были рассчитаны. Гистограмма скорости роста МП включала все смещения
(эпизоды роста, редкие паузы или эпизоды сокращения), которые произошли во время МТ
рост от центросомы к краю клетки, определяемый здесь как зона 3 мкм
от границы ячейки. Динамика МП обрабатывалась как 1D случайное блуждание
характеризуются коэффициентами диффузии и дрейфа. Обработка данных была выполнена
с использованием программного обеспечения SigmaPlot (Jandel Scientific, Сан-Рафаэль, Калифорния), как описано
в другом месте (

Воробьев и др.,
1999). Коэффициент сноса, v _d , является мерой
дисбаланс роста и сокращения, тогда как коэффициент диффузии D является
мера абсолютной величины (квадрата) роста и сокращения
экскурсии на МП заканчиваются в единицу времени. Для расчета этих коэффициентов при
МТ плюс концы, мы использовали прямую визуализацию МТ, а также анализ вычитания
эти изображения.Первоначально истории жизни МТ в интервале 45-60 секунд
были использованы для построения графиков смещения и дисперсии от времени
(

Воробьев и др., 1999). Здесь
мы упростили сбор данных и использовали мгновенные перемещения для
оцените коэффициенты. Позиции МП плюс концов были определены в
были построены последовательные изображения и гистограмма смещений. Значение
смещение, вычисленное по этой гистограмме, представляет собой коэффициент дрейфа
а дисперсия представляет собой оценку коэффициента диффузии:

где s _i — смещение конца МТ между двумя последовательными кадрами,
Σ (t _i ) — общее время наблюдения смещений
включены в гистограмму, и

где s _i — смещение конца МТ между двумя последовательными кадрами,
s _d — среднее смещение, а Σ (t _i ) — полное время
наблюдения. Анализ гистограмм мгновенного смещения прост.
и дает то преимущество, что любой МТ, положительный конец которого виден через два
учитываются последовательные кадры.

Средняя скорость роста МТ была определена путем прямого наблюдения за
Cy3-меченные MT и подход CLIP-170. Для прямого наблюдения
подход, MT отслеживали, пока они не достигли 90% радиуса ячейки. В
скорость кажущегося движения CLIP-170 определялась путем отслеживания головы
индивидуальная CLIP-170-положительная структура от центросомы до ее
исчезли в цитоплазме или около плазматической мембраны.

Степень устойчивого роста выражалась как абсолютное расстояние
и в процентах от местного радиуса соты. Для последнего расчета
локальный радиус ячейки определялся как расстояние по прямой от
центросома к краю клетки в направлении MT плюс конец или CLIP
смещение.

Результаты

Прямой анализ динамики МП внутри ячейки

Две проблемы ранее препятствовали прямому наблюдению за МП
зарождение на центросоме. Во-первых, плотность МТ в центросоме высока,
исключающая визуализацию отдельных МТ. Во-вторых, ячейка обычно
толстый в области центросомы, что приводит к значительному
расфокусированная флуоресценция, которая ухудшает визуализацию отдельных МТ. Преодолеть
Эти препятствия мы использовали два подхода. В первом подходе мы
фотообесцвечивает путь через центросомную область, чтобы уменьшить
плотность флуоресценции ранее существовавших МТ. Это позволило наблюдать
зарождающиеся МТ, растущие от центросомы в направлении пути.в
Во втором подходе мы получили цитопласты, которые из-за отсутствия ядра
намного тоньше целых клеток, что облегчает прямое наблюдение
отдельные MT, пока еще близки к центросоме.

Анализ поведения MT после фотообесцвечивания контура

Cy3-тубулин вводили микроинъекцией в клетки и позволяли включиться в
МЦ. МТ в клетках CHO расположены преимущественно радиально с
центросома в ее фокусе. Лазер на ионах аргона и оптический трек с
цилиндрические линзы использовались для фотообесцвечивания пути через ячейку с помощью
центросома в ее центре. MT, которые образовались в центросоме после
фотообесцвечивание, которое росло в направлении пути, тогда могло быть
визуализируются непрерывно, начиная с нескольких секунд после их рождения
(

Рис. 1А).

Рис. 1.

Фотообесцвечивание на пути выявляет стойкий рост МП внутри СНО
клетка. (A) Верхние панели: изображения с малым увеличением МТ, меченных Cy3, до и
после отбеливания зона примерно 20 × 3 мкм, проходящая через
центросомная область.Путь снижения флуоресценции позволяет визуализировать
возникающие центросомные МТ. Нижние панели: три МП, ориентированные по направлению
пути (окрашенные в желтый, красный и зеленый цвета) можно увидеть, чтобы удлиниться
настойчиво. Цифры в верхнем левом углу указывают время в секундах. Изображений
были получены каждые 4 секунды. Пруток, 5 мкм. (B) Графики истории жизни (длина vs
время) цветных МЦ. Нулевая длина представляет положение центросомы; нуль
время — время отбеливания. Плюс концы МТ прибыли на плазматическую мембрану через ~
60 секунд.(C) Мгновенные скорости возникающих МТ были измерены как
смещение МТ заканчивается между последовательными кадрами. Гистограмма показывает
что эпизоды укорачивания и паузы были нечастыми.

Новые MT демонстрировали замечательное поведение, о котором ранее не сообщалось в
клетки животных. Они показали незначительную динамическую нестабильность. Обычно
их ведущие (предположительно плюс) концы росли постоянно, пока они не были на
периферия клетки (

Рис. 1Б). Как
По операционному определению, мы считаем периферию клетки зоной ~
15% радиуса ячейки (3 мкм).В среднем 68% МП достигли
край клетки без перехода в фазу укорочения и непрерывного роста МТ
фазы иногда превышали 20 мкм. Скорость роста, полученная из частоты
гистограмма мгновенных ставок (

Инжир.
1С) составила 17,8 ± 13,8 мкм / мин ( n = 33 МП; 10
клетки; общее время наблюдения = 1228 секунд). Гистограмма подтвердила, что
эпизоды укорочения (8,4%) или паузы (0,6%) составляли незначительную долю
зарождающееся поведение МП. В то время как зарождающиеся МТ росли
постоянно в интерьере, сюжеты жизненного цикла МП на периферии
ячейка показала, что они проявляют характерную динамическую нестабильность, как
до и после фотообесцвечивания (данные не показаны).Следовательно, экспериментальные
протокол не оказал заметного влияния на поведение MT. Таким образом, наблюдения после пути
фотообесцвечивание предполагает, что возникающие МТ внутри клетки имеют разные
поведение, чем на периферии. Однако ограничение этого подхода
заключалась в том, что только те МТ, которые были ориентированы по пути (обычно 2-4 на
cell), ограничивая размер набора данных. Чтобы получить больше
полную картину мы исследовали цитопласты, в которых могли быть
отслеживается, начиная с центросомы.

Поведение МТ в цитопластах, содержащих центросомы

В результате энуклеации клеток цитопласты становятся меньше и более плоскими
чем целые клетки. Цитопласты обычно содержат пониженное количество МТ.
(~ 50%) по сравнению с таковыми в интактных клетках, что позволяет предположить, что некоторые
нуклеирующий материал был потерян или поврежден во время энуклеации. Тем не менее,
цитопласты, содержащие центросомы, сохранили сильный радиальный массив МТ с
центросома в его центре.Сочетание тонкости и уменьшенного количества
МТ позволяли четко видеть центросому и расти от нее до
быть легко отслеживаемым (

Рис. 2А).
Таким образом, можно было идентифицировать индивидуальный МП вскоре после того, как он был
зародился и контролировать его удлинение в цитопластах без необходимости
путь фотообесцвечивания. МТ росли с редкими паузами или сокращающимися эпизодами
(

Рис. 2Б) со скоростью
15,8 ± 5,9 мкм / мин (50 МП; 8 цитопластов), что аналогично
в целых клетках после фотообесцвечивания пути.Таким образом, свойство стойкого МП
рост сохранялся после энуклеации.

Рис. 2.

Жизненный цикл МТ, визуализированный в цитопластах СНО, содержащих центросомы. (А)
Покадровая последовательность показывает выбранные панели из историй жизни четырех МТ. (В)
Два MT (окрашенные в синий и красный цвета) зародились в центросоме (через 3 секунды).
и 39 секунд соответственно) и устойчиво росли к краю ячейки.
Эти МП переходили на укорочение только после того, как прибыли на
край ячейки (стрелки: красный MT, 102 секунды; синий MT, 120 секунд).В
длина синего МП больше, чем красного МП, потому что он вырос в изогнутом
путь и вдоль края ячейки, прежде чем начать сокращаться. (C) Два MT
(окрашенные в желтый и зеленый цвета) изначально отслеживались вблизи границы ячейки.
Эти МТ показали повторяющиеся эпизоды роста и укорачивания около мембраны.
и зеленый МТ в конечном итоге подвергся сокращающейся экскурсии обратно в
центросома. Цифры в верхнем левом углу указывают время в секундах. Штанга, 5 мкм
м. Графики истории жизни, построенные, как указано в

Инжир.1 легенда.

В качестве меры стойкости МП мы оценили частоту перехода
от роста к сокращению. Были зафиксированы времена роста зарождающихся МТ.
с того момента, как их можно было обнаружить возле центросомы, пока они не
«катастрофа» (эпизод укорочения> 0,5 мкм) или прибыла в клетку
периферия, в зависимости от того, что наступит раньше. Для МТ, прибывших на периферию клетки
без заметного эпизода сокращения, мы регистрировали их время, но не регистрировали
катастрофа.Поскольку МТ в целых клетках и цитопластах, содержащих центросомы
вели себя аналогично, мы объединили данные из обоих протоколов. Для 52 проанализированных МП
всего 12 переходов в укорочение зафиксировано за 2337 секунд наблюдения
время катастрофы с частотой 0,005 секунды ^-1 .

По мере приближения МТ к границе ячейки их поведение изменилось. Продолжение
наблюдение за МТ не менее 3 минут, начиная с центросомы
(

Рис. 2Б) или выбрав их
возле плазматической мембраны (

Инжир.2C) показал, что большинство плюсов отображены типично.
динамическая нестабильность вблизи края ячейки. Поведение МТ в зоне 3 мкм
от края клетки характеризовалась кажущейся катастрофической частотой
0,08 секунды ^-1 (207 событий за 2710 секунд, 61 MT проанализировано в 17
клеток и цитопластов), то есть в 16 раз больше, чем внутри клетки.
Таким образом, как и в экспериментах по фотообесцвечиванию, динамическая нестабильность
наблюдалась только на периферии клетки.

Выборочная визуализация растущих МТ заканчивается с помощью CLIP-170

Очевидное различие в поведении МТ внутри ячейки по сравнению с
периферия клетки представляет собой существенный отход от нашего понимания
динамики МП.Поэтому казалось целесообразным поискать подтверждения этим
выводы при независимом подходе. В идеале хотелось бы визуализировать
Рост МТ заканчивается без фона, вносимого остальными МТ.
Такая выборочная визуализация казалась возможной благодаря использованию CLIP-170 в качестве
маркер удлинения МП (

Perez et al.,
1999). Хотя Perez et al. показали, что CLIP-170 совмещает
с концами некоторых растущих МТ и не был нацелен на стационарный или
сокращая MT, они не могли определить, был ли CLIP-170 нацелен
для всех растущих МТ или только для определенного подмножества.Таким образом, нам сначала нужно было
оцените этот момент. Для этого мы сравнили рост MT с GFP-CLIP-170.
поведение с использованием протокола двойной маркировки цитопластов. Интактные клетки были
трансфицированы путем микроинъекции ДНК CLIP-170, меченной GFP, в ядра. К
чтобы избежать потенциальных проблем со сверхэкспрессией, мы выбрали клетки через 10 часов
после трансфекции экспрессирует низкие уровни флуоресцентного GFP-CLIP-170. Эти
Затем GFP-положительные клетки инъецировали тубулином, меченным Cy3, и инкубировали.
за 60-120 минут до подготовки цитопласта.Совместная локализация
GFP-CLIP-170 (красный) и концы MT (зеленый) в центросомах, содержащих
цитопласт показан в

Рис. 3A.
Смещение этикетки CLIP-170 в последовательных кадрах было идентично перемещению
рост МТ плюс заканчивается (

Инжир.
3Б). Маркировка CLIP-170 исчезла в течение 5 секунд (время
разрешение нашей двухканальной покадровой серии, 2,5 секунды на канал)
когда МТ приостановился или претерпел переход от роста к сокращению
(

Рис. 3C). Несколько типичных
История CLIP-170 и MT представлена ​​в

Инжир.3D. Неизменно
( n > 100), треки CLIP-170 совпадали со смещением кончика МТ,
это указывает на то, что CLIP-170 был нацелен на все растущие концы и
их использование в качестве инструмента для выборочной визуализации роста МП.

Рис. 3.

Выборочная визуализация растущих МТ завершается CLIP-170. Клетки СНО были
трансфицированы ядерной микроинъекцией ДНК GFP-CLIP-170, позволили экспрессировать
Белок GFP-CLIP, затем микроинъектированный Cy3-тубулином и, наконец, энуклеированный
для создания цитопластов.Были получены покадровые последовательности, чтобы показать динамику
МЦ и КЛИП-170. (A) Низкое увеличение МТ, CLIP-170 и объединенного изображения
(зеленый — Cy3-MTs; красный — CLIP-170). (B) Покадровая последовательность области, выделенной рамкой
панель A. Два динамических MT обозначены стрелками. CLIP-170 присутствует на
их плюс заканчивается во время фазы роста, но исчезает в течение 5 секунд после
переход от роста к фазе паузы или сокращения. Цифры в верхнем левом углу
углы указывают время в секундах. Интервал между съемками изображений в
чередующихся каналов было 2.5 секунд, что давало интервал между
последовательные изображения в канале GFP или Cy3 продолжительностью 5 секунд. Шкала шкалы, 5 мкм
м. (C) Графики жизненного цикла МТ (зеленый) и треков CLIP-170 (красный)
обозначены стрелками на панели B. Точки данных CLIP-170 были сдвинуты по времени на
2,5 секунды для компенсации задержки между получением CLIP и MT
изображений. Отсутствие красных точек данных на участках графиков указывает, когда
CLIP-170 исчез с конца МТ. (D) Примеры графиков возникающих MT (зеленый)
рост от центросомы и соответствующих треков CLIP-170 (красный) после
сдвиг во времени 2.5 с. Графики произвольно расположены в шахматном порядке по оси времени.
для ясности. Масштабы осей указаны в правом верхнем углу графика. Для некоторых
МТ либо рядом с центросомой, либо в областях с высокой плотностью МТ, конец МТ
не могли быть четко визуализированы. Тем не менее, механизм CLIP-170 мог быть
видимый. Это представлено на графиках как красные точки без соответствующих
зеленые. Во всех случаях сплошные растущие МТ имели на концах CLIP-170.

Устойчивый рост MT подтвержден длинными дорожками CLIP-170

Предсказание устойчивого роста MT, начиная с центросомы, является
что CLIP-170 будет связан с наконечником MT почти постоянно, пока
MT плюс конец приближается к краю ячейки. Поэтому мы использовали движение
CLIP-170 помеченные зоны как инструмент для оценки роста MT внутри клетки.
Для визуализации центросомы в некоторых экспериментах использовали ДНК GFP-Hscen2 (человеческий
конструкция, экспрессирующая центрин) была смешана с ДНК GFP-CLIP-170, и они были
используются вместе для трансфекции.

Мы оценивали рост МТ как в интактных клетках, так и в цитопластах, содержащих
центросома. Как и предполагалось, зоны с пометкой GFP-CLIP-170 отображали длительные переходы.
с течением времени (непрерывная продолжительность часто> 1 минуты) через ячейку
интерьер (

Инжир.4А). Отслеживать
диаграммы были построены из последовательных позиций зон, помеченных CLIP-170 на
индивидуальные МП. По трекам видно, что зоны CLIP-170 смещаются радиально наружу.
от центросомы. Средняя непрерывная длина треков GFP-CLIP-170 составила
17,3 ± 4,8 мкм ( n = 78) в целых клетках
(

Рис. 4B) и 15,8 ± 5,8 мкм
м / мин ( n = 40) в цитопластах, содержащих центросому. Значение
скорость зон CLIP-170 составила 16,5 ± 6,0 мкм / мин ( n = 110)
для целых клеток и 18,3 ± 4,8 мкм / мин ( n = 39) для
цитопласты.Скорость движения CLIP-170 была аналогична определенной.
для роста МТ под прямым наблюдением как в целых клетках, так и в цитопластах. Мы
На основании этих измерений можно сделать вывод, что механизм CLIP-170 является хорошим
прокси для роста МТ, и что цитопласты являются хорошим показателем для интактных клеток.
Нормализация распределения длины треков CLIP по расстоянию
между центросомой и краем клетки
(

Рис. 4C) показывает, что
большинство МТ, зародившихся на центросоме, достигали ~ 85% (84 ± 16%)
радиуса ячейки без катастроф и длительных пауз.Этот результат означает
что большинство MT постоянно растут с момента своего рождения на центросоме
пока их положительный конец не приблизится к краю ячейки.

Рис. 4.

Устойчивый рост МП подтверждается длинными треками CLIP-170. GFP-CLIP-170
движение было проанализировано с помощью покадровой микроскопии. Изображения были получены каждые 3
секунд. (A) Показаны три следующих ближайших кадра с радиальным
организация и перемещение нашивок CLIP-170. Наконечники четырех патчей CLIP-170
указываются с течением времени стрелками.Цифры в верхнем левом углу
указать время в секундах; бар, 5 мкм. На диаграмме показаны 25 треков CLIP-170 на
90-секундный период, из которых четыре трека (1-4) соответствуют патчам CLIP
обозначены стрелками на изображениях. Многие треки длинные, указывающие
постоянный рост МП; радиальный рисунок гусениц позволяет идентифицировать
область центросомы (пунктирный круг) как точка, от которой следы
происходят. Центросома обозначена на схеме двумя точками. (В)
Гистограмма распределения длин треков CLIP-170.Средняя длина,
17,3 ± 4,8 мкм ( n = 78). (C) Гистограмма распределения длин
Дорожки CLIP, нормализованные по расстоянию между центросомой и плазмой
мембрана. Гистограмма показывает, что большинство МТ, рожденных на центросоме
устойчиво растут до ~ 85% радиуса клетки.

Поскольку новые зоны, помеченные CLIP-170, постоянно появлялись возле
центросомы, по их внешнему виду можно было оценить частоту
образования МТ в центросоме, операционально определяемого как круг из 2 мкм
м радиуса, нарисованного вокруг фокуса массива MT.По этому критерию мы
оценили скорость нуклеации МТ центросомой в клетках СНО как
5,6 ± 2,3 в минуту (178 зон CLIP-170; 7 ячеек; 1997 сек).

Сравнение постоянного роста и treadmilling

Единственный ранее зарегистрированный случай устойчивого положительного роста в
клетки млекопитающих — это беговая дорожка МТ, наблюдаемая in vivo в отсутствие
центросома (

Родионов и Борисы,
1997;

Родионов и др.,
1999). В нашем предыдущем исследовании
(

Родионов и др., 1999) мы
предположили, что беговая дорожка в цитопластах без центросомы является результатом
открытые МТ минус-концы, деполимеризация которых вызвала повышенный пул тубулина
что подавляло переходы от фазы роста к фазе укорочения на MT plus
конец. Вопреки этому предположению, это исследование выявило устойчивый рост
МТ плюс заканчивается при отсутствии значительного количества свободных минус концов.
Поэтому мы переоценили вопрос о том, есть ли
центросома оказала какое-либо существенное влияние на скорость роста плюс-конца.С нашим
улучшенных процедур, мы сравнили цитопласты, содержащие и не содержащие
центросома.

В цитопластах без центросом МТ спонтанно появлялись в цитоплазме,
затем перемещается с помощью беговой дорожки и в конечном итоге попадает в клетку
поле (

Рис. 5А). После
выходя на край ячейки, плюс концы часто становились паузой и МТ разбирались
из-за минус-конца деполимеризации. Скорость роста плюс конец
во время беговой дорожки измеряли так же, как и для МТ, растущих из
центросомы в интактных клетках или цитопластах, содержащих центросомы.Из
покадровые наблюдения МТ, меченных Cy3, скорость роста положительного конца во время
беговая дорожка составляла 20,3 ± 8,3 мкм / мин ( n = 66; 11 цитопластов).
При устойчивом беге по беговой дорожке рост положительных концов должен уравновешиваться
минус укорачивание концов. В соответствии с этим ожиданием, скорость минус-конца
Укорочение в цитопластах без центросомы составило 18,2 ± 5,8 мкм.
м / мин ( n = 66; 11 цитопластов).

Рис. 5.

Беговая дорожка

MT и GFP-CLIP-170.Динамика MT и механизм GFP-CLIP-170
были проанализированы в цитопластах без центросомы. (A) MT и CLIP-170
изображения (два левых изображения) и покадровая последовательность объединенных изображений с
GFP-CLIP-170 настроен на красный канал и MTs на зеленый канал,
соответственно. Плюс и минус беговых дорожек MT обозначены значком
наконечники стрел. CLIP-170 маркирует плюсовые концы беговых дорожек MT, а минусовые концы
всегда CLIP-170-отрицательные. Цифры в верхнем левом углу указывают время в
секунды; бар, 5 мкм. (B) Примеры истории треков CLIP-170 в цитопластах
без центросомы.Отдельные участки произвольно расположены в шахматном порядке по
ось времени для ясности. Масштаб осей указан в правом верхнем углу окна.
график. (C) График жизненного цикла беговой дорожки МТ (положительный и отрицательный концы
зеленый) и CLIP-170 (красный). Временной сдвиг между положительным концом истории и CLIP-170
история 2,5 секунды. CLIP-170 сохраняется на растущем плюсе
беговая дорожка MT.

Наше измерение путем прямого наблюдения за средней плюс конечной скоростью роста включает
паузы и укорачивающие эпизоды.Чтобы сравнить реальный потенциал роста
плюс заканчивается, что эти эпизоды нужно исключить. Подход CLIP-170 обеспечивает
естественная реализация этого алгоритма, так как CLIP исчезает с плюсов
когда они остановятся. Следы CLIP-170 в цитопластах без центросомы
(

Рис. 5B) дает положительный конец MT
скорость роста 22,0 ± 10,1 мкм / мин ( n = 75; 7 цитопластов),
в то время как в цитопластах, содержащих центросомы, измеренная скорость была
18,3 ± 4,8 мкм / мин ( n = 39; 5 цитопластов), разница
20%.Таким образом, по обоим показателям рост МТ в цитопластах был немного быстрее.
отсутствие центросомы, что соответствует повышенному пулу тубулина. Однако, поскольку
устойчивый рост — обычная черта МТ в интактных клетках и
цитопластов, содержащих центросомы, очевидно образование свободных минус-концов.
не является предпосылкой для этого явления.

Беговые дорожки МТ позволили провести дополнительную проверку локализации
CLIP-170 исключительно на растущих концах. Так как один конец беговой дорожки MT
сокращается, в то время как другой растет, ожидается, что CLIP-170 будет присутствовать на
ведущий (плюс) конец, но отсутствует в конце (минус).Этот
прогноз был подтвержден прямым двойным наблюдением
(

Рис. 5C). Таким образом, CLIP-170 может
использоваться в качестве маркера полярности для растущего плюсового конца MT.

Укорочение МЦ

Полимерный баланс МТ беговых дорожек на уровне индивидуальных МТ
при этом сокращение от минусового конца в среднем равно росту на
плюс конец. Однако в интактных клетках или цитопластах, содержащих центросомы, минус
концы привязаны к центросоме. С момента выхода из центросомы и
укорочение минус-конца нечасто
(

Китинг и Бориси, 1999;

Waterman-Storer и Лосось,
1997;

Воробьев и др.,
1999), большая часть баланса должна приходиться на динамику положительного
конец. Следовательно, устойчивый рост MT plus заканчивается внутри клетки.
в первую очередь необходимо уравновесить укорочением других плюсовых концов MT.

Соблюдается требование устойчивого состояния баланса роста и сокращения
для каждой позиции в клетке, включая центросому. С момента зарождения МТ
рождаются на центросоме со скоростью 5,6 ± 2,3 в минуту, мы
предсказал, что эквивалентная скорость сокращения МТ назад к центросоме
следует соблюдать.Для оценки этой проблемы мы случайным образом выбрали МТ, имеющие
их плюс концы близко к краю и следили за их судьбой
(

Рис. 6А). В отличие от
рост, укорочение не было стойким. Укорочение происходило со скоростью
28,8 ± 14,1 мкм / мин ( n = 474; 10 ячеек)
(

Рис. 6Б, В). Частота
гистограммы укороченных расстояний показали примерно экспоненциальный
разлагаться (

Рис. 6D) со средним значением
расстояние 2,9 ± 3,4 мкм. Эти свойства соответствуют
процесс перехода первого порядка обратно в растущее состояние (спасение).В
частота спасения составила 0,12 секунды ^-1 (91
переходов, 100 МП, 735 секунд наблюдения) путем отслеживания сокращения МП
обратно с маржи, пока они не начали расти. Таким образом, спасение в отличие от
катастрофы случались часто, что приводило к частым сокращенным экскурсиям
а длинные — редко. Тем не менее, возврат к центросоме может быть
наблюдается непосредственно, хотя и с низкой частотой. Поскольку МТ, укороченные длинные
расстояния обычно терялись, поскольку их положительные концы приближались к перегруженной территории
вокруг центросомы мы оценили, как более надежную оценку, количество
МТ, укороченные на две трети радиуса соты.Из всех серий
сокращения, мы получили 6,4 ± 2,7 в минуту, что сокращало более чем
две трети расстояния до центросомы.

Рис. 6.

Анализ укорачивания МП. (A) Покадровая съемка показывает редкое событие
плюс укорочение концов (стрелки) от плазматической мембраны обратно к
центросома в течение 12 секунд. (B) Гистограмма мгновенных скоростей МП
укорочение от плазматической мембраны. (C) Распределение длины укорочения MT
эпизоды.Концы MT, прилегающие к краю ячейки, отслеживались, и длина
был определен эпизод непрерывного сокращения. Гистограмма показывает небольшие
эпизоды укорочения были частыми, а длительные — редкими ( n = 319). (D)
Покадровая последовательность показывает высвобождение МТ из центросомы, за которым следует
сокращение с минусового конца (стрелки). Время в секундах; стержни, 5 мкм
м.

Помимо укорачивания с плюсовой стороны, нечастые выпуски МТ из
центросома также произошла.Выпущенные МТ имели короткий срок службы и быстро
деполимеризуется с минусового конца (

Инжир.
6E). В цитопластах частота высвобождения составила 1,0 ± 0,5.
МТ процентов центросомы в минуту (58 выпусков, 11 цитопластов). Таким образом, плюс конец
смерть (6,4 в минуту) + минус конец выпуска (1,0 в минуту) приблизительно равнялась
плюс окончание родов (5,6 МП / мин). Это примерное равенство подтверждает, что МТ
система в клетках CHO действительно находится в устойчивом состоянии, и это указывает на то, что баланс в
центросома в клетках CHO происходит в основном (~ 85%) с положительного конца
путь с минус-концом, что составляет незначительную (∼15%), но значительную
вклад.

Распределение длин МЦ

Постоянный рост зарождающихся МП — явно парадоксальный результат.
потому что неясно, как это поведение может быть согласовано с динамическим
наблюдается нестабильность вблизи края ячейки. Чтобы ответить на этот вопрос,
мы использовали концептуальную основу диффузии плюс дрейфа и процедуру
последовательного анализа вычитания для получения необходимых данных.

Последовательное вычитание изображений (

Инжир.7A) позволяют идентифицировать растущие и укорачиваемые концы МП как
черные или белые отрезки, соответственно, даже в регионах с высоким МП
плотности, что в противном случае исключает прямое наблюдение отдельных МТ. МЦ
которые не претерпевают смещения (т. е. стабильны или приостановлены) между
последовательные кадры отменяются и не появляются при вычитании
изображение.

Рис. 7.

Популяционный анализ МП. (A) Анализ последовательного вычитания для
выявление роста и укорочения.Изображение Cy3-меченых МТ из
покадровая серия и соответствующее дифференциальное изображение (I _n —
I _{n + 1} ), полученный вычитанием из изображения (I _n )
следующее изображение (I _{n + 1} ) из серии. Черные и белые сегменты представляют
Рост и укорочение МП соответственно на временном интервале. Пять
трапециевидные зоны, каждая пятая часть радиуса ячейки, обозначают области
где оценивались события роста и сокращения. На двух панелях справа
пятая трапеция увеличена и показаны экскурсии роста и сокращения
по цветам — зеленый и красный соответственно.Параллельный черный и белый
сегменты возникают из-за бокового смещения МТ и не оценивались. (B) Частота
распределение скоростей роста и укорачивания в районе 0,6-0,9 клетки
доля радиуса, полученная методом вычитания. (C) Коэффициент дрейфа как
рассчитывается по гистограмме скоростей роста и сокращения. Дрейф
положительный и довольно однородный внутри ячейки, снижающийся до отрицательного
значения только около границы ячейки. (D) Раздача MT заканчивается. Позиция
активных концов МТ (рост или укорачивание) оценивали методом вычитания
и назначен одной из пяти трапециевидных зон, показанных на панели A
( n = 7421 эпизод; 4244 роста; 3177 укорочение; 4 клетки).Данные были
соответствуют одной экспоненциальной функции. Экспоненциальные функции взяты
отдельно для эпизодов роста или укорачивания были практически идентичны.

Скорости роста и сокращения определялись по длине
отрезки линий на дифференциальных изображениях, разделенные на время между
получение изображений. Частотные гистограммы скоростей были
бимодальный с событиями роста медленнее, чем укорачивание, но более частыми. An
пример гистограммы показан на

Инжир.7B для области между 0,6-0,9 радиуса ячейки. Для того же
области, доля растущих МЦ, f _g , составила 0,70, а их
скорость, v _г , составила 17,0 ± 5,9 мкм / мин, n = 372,
в то время как доля шортенинговых МТ, f _s , составляла 0,30, а их
скорость, v _с , составила 29,7 ± 13,4 мкм / мин, n = 156.
Коэффициент сноса, v _d , отражает дисбаланс роста более
сокращение и рассчитывается как

или как среднее значение гистограммы скоростей.На основании этого анализа гистограммы,
расчетные значения коэффициента дрейфа составили ∼5 мкм / мин в
внутренняя часть ячейки, несколько уменьшающаяся к краю ячейки
(

Рис. 7C), указывая, что
по всему внутреннему пространству клетки рост значительно превышал укорочение.
Вблизи границы ячейки (<3 мкм) рассчитанный коэффициент дрейфа составлял отрицательные (-2,7 ± 0,4 мкм / мин; n = 235 событий роста; 197
сокращающие события), что отражает увеличение доли сокращающихся событий
из-за влияния границы ячейки. Следует отметить, что поскольку
приостановленные МП не отображаются на изображениях вычитания, они не влияют на
расчет дрейфа. В качестве проверки результата мы также оценили
гистограммы смещения, полученные в результате прямой флуоресцентной визуализации в клетке
интерьер. Такие гистограммы также были бимодальными, хотя в настоящее время насчитывается
были обнаружены приостановленные МП. Внутри камеры приостановленные МТ встречались нечасто.
(15%), а у края клетки их было много (70%). В камере
внутренние, скорости и коэффициенты дрейфа (данные не показаны) были аналогичны
полученные в результате анализа вычитания.Однако около края ячейки
большая доля пауз приводила к пропорциональному снижению абсолютного
значение коэффициента дрейфа.

Коэффициент диффузии отражает колебания поведения
прогнозируется по дрейфу и рассчитывается как дисперсия скорости
частотная гистограмма. Расчет дал кажущийся коэффициент диффузии как
13,1 ± 1,3 мкм ² / мин для внутреннего, 15,1 ± 1,1 мкм
м ² / мин для середины и 13,1 ± 1,3 мкм
м ² / мин для внешних третей ячейки соответственно. В
отношение коэффициентов диффузия / дрейф составляло ∼3 мкм и не менялось
значительно по радиусу ячейки. Как показано ранее
(

Воробьев и др., 1999),
положительный дрейф предсказывает неслучайное распределение концов МТ.

Для определения распределения концов МТ по радиусу соты весь
ячейка была разделена на пять радиальных зон. Количество черной или белой линии
сегментов показали, что концы МТ, как растущие, так и укорачивающиеся, редко встречаются вблизи
центросома и экспоненциально увеличивается к краю клетки
(

Инжир.7D). Таким образом, в клетках CHO
распределение длин концов динамических МП является восходящим, и большинство МП
длинные. От экспоненциальной кривой до данных в

Рис. 7D, соотношение
коэффициенты были независимо оценены как 5,8 мкм, что находится в пределах
коэффициент 2 измеренного значения. Таким образом, структура диффузии плюс дрейфа
достаточно, чтобы учесть наблюдаемое распределение концов МТ.

Устойчивый рост — характерная черта культивируемых клеток

Поскольку постоянный рост клеток CHO казался замечательным свойством, это было
важно проверить его общность. Следовательно, мы изучили жизненный цикл МП.
в клетках NRK и полученных из них цитопластах. Для этих ячеек мы наблюдали
устойчивый рост МТ к плазматической мембране со скоростью
17,4 ± 5,7 мкм / мин (данные не показаны). Последовательный анализ вычитания
цитопластов NRK давали бимодальное распределение, подобное таковому для клеток CHO
(данные не показаны) с коэффициентом дрейфа внутри ячейки
4,0 ± 1,1 мкм / мин ( n = 488, 5 цитопластов). Дополнительная поддержка
для этого вывод был получен расчетом коэффициента дрейфа от
данные, имеющиеся в литературе.Используя выражение, представленное ранее,

,
рассчитываем коэффициент дрейфа 4,4 мкм / мин для ламелей NRK
фибробласты (

Михайлов и Гундерсен,
1998), 3,4 мкм / мин для периферии клеток СНО
(

Шелден и Уодсворт, 1993),
и 3,8 мкм / мин для МТ, растущих параллельно краю клетки в легком тритона.
клетки (

Waterman-Storer и Лосось,
1997). Таким образом, очевидный дисбаланс роста по сравнению с укорочением — это
характерная особенность многих культивируемых клеток. Делаем вывод, что стойкие
рост и положительный дрейф — общие черты динамики МП.

Обсуждение

В этом исследовании мы использовали комбинацию новых подходов к изучению МП.
поведение в интерьере камеры. Результаты дают обновленную картину
Жизненный цикл МТ в клетках с радиальным массивом, исходящим из центросомы
(

Рис. 8А). MT рожден
зародышеобразование на центросомном шаблоне, оно растет за счет постоянного удлинения
добавлением субъединиц на плюсовом конце; в непосредственной близости от края ячейки,
МП претерпевает колебания по продолжительности в течение эпизодов положительной
сокращение и рост; и, наконец, он умирает, когда один из стохастических
эпизоды укорочения имеют достаточную продолжительность, чтобы полностью деполимеризовать его
обратно к центросоме.Альтернативный путь смерти — освобождение от
центросома с последующим стойким укорочением с минусового конца. В СНО и
другие фибробласты, эти свойства в совокупности создают очевидный дисбаланс
роста над укорочением (дрейфом) отдельных МТ внутри клетки, которые
приводит в установившемся режиме к распределению MT плюс заканчивается, что круто
поднимается в зависимости от положения по радиусу ячейки. Этот взгляд на МТ
Жизненный цикл и установившееся состояние отличается от предыдущей работы тремя способами: (1) тем, что
поведение МТ внутри клетки по умолчанию — постоянный рост; (2)
что МТ на периферии клетки демонстрируют поведение типа «динамической нестабильности»
из-за граничного эффекта; и (3) положительный «дрейф» порождает
Распределение длин МП по возрастанию.

Рис. 8.

Жизненный цикл MT и распределение длины в установившемся состоянии (A). История жизни
типичный МП, реконструированный по данным двух отдельных МП. Часть первая (вверх
до разрыва оси времени) отслеживает устойчивый рост к границе ячейки
за которыми следуют катастрофы, вызванные границами, которые спасаются на высоком
частота. Вторая часть (после разрыва оси времени) показывает редкое событие
сокращение обратно к центросоме. (B) Схема радиальной решетки MT, показывающая
распределение длин в соответствии с экспоненциальной функцией, подогнанной к данным
из анализа вычитания. Длинные МТ преобладают над короткими.

Стойкий рост возникающих микротрубочек

Частота перехода от роста к укорочению МТ в клетке
интерьер был определен как очень низкий, 0,005 секунды ^-1 , что
приравнивается к 140 секундам полупериода фазы роста. Предполагая радиус
20 мкм для типичной клетки CHO и скорость роста для MT плюс конец
17 мкм / мин, МТ потребуется всего ~ 70 секунд, чтобы вырастить
расстояние радиуса ячейки, что означает, что зарождающийся МП обычно прибывает
на краю ячейки, прежде чем она успела укоротиться.Если предположить
процесс перехода к сокращению первого порядка, мы рассчитываем, что
72% возникающих МТ, начинающихся с центросомы, все еще будут расти
фазе к тому времени, когда они достигли границы ячейки. Этот результат по сути
то же, что и экспериментально наблюдаемое значение 68% для клеток. Цитопласты
меньше, чем ячейки, и, следовательно, они имеют более высокий процент MT, которые
прибыть на край без укорачивания. Таким образом, стойкий рост зарождающейся
МТ можно понимать как результат сочетания большого удлинения
скорость и низкая частота катастроф.Эта замечательная особенность жизни МТ
цикл ранее не распознавался. Основное объяснение этой оплошности
наиболее вероятно, что наблюдения за динамикой МТ in vivo в целом были
производится там, где технически проще получить данные, а именно на
периферия клеток, где цитоплазма тонкая, а плотность МТ относительно низкая,
таким образом облегчая визуализацию отдельных MT. Неявный и непроверенный
было сделано предположение, что параметры динамики МП оцениваются в ячейке
периферия действительны по всей клетке.Наши результаты показывают, что при
по крайней мере, в клетках CHO и NRK это не так.

Данные, согласующиеся с постоянным ростом, можно найти в последних публикациях.
сосредоточение на маркерах плюсовых концов, помеченных GFP
(

Perez et al., 1999;

Mimori-Kiyosue et al., 2000a).
Хотя в этих отчетах не подчеркивается постоянное поведение роста МП,
они действительно содержали данные, из которых можно было сделать такие выводы. In Vero
клеток, часто встречались дорожки GFP-CLIP-170 длиной 10 мкм.
(

Perez et al., 1999) и
аналогичная картина возникает из фильмов о треках EB-1-GFP в клетках Xenopus A6.
(

Mimori-Kiyosue et al., 2000а;
дополнительный материал). Устойчивый рост как свойство МТ также
описан в делящихся дрожжах, S. pombe , где большинство МТ
росли, пока не достигли конца ячейки
(

Бруннер и медсестра, 2000).
Принимая эти результаты вместе с нашими наблюдениями, мы заключаем, что
устойчивый рост МТ внутри клетки не является исключительным свойством
клеток СНО. Скорее, это может быть эволюционно избранный и широко распространенный
характеристика, которая ранее ускользнула от внимания, потому что она видна в первую очередь
в интерьере камеры.

Динамическая нестабильность вблизи границы ячейки

Когда MT приблизились к границе ячейки, их поведение изменилось на частое
чередование кратких фаз укорочения и роста. Такое поведение как
динамическую нестабильность стали характеризовать in vivo. Например, рост
и длины укорочения в клетках PtK ₁ составили 1,3 и
1,6 мкм и в клетках CHO 3,2 и 4,3 мкм соответственно
(

Шелден и Уодсворт, 1993).
Аналогичные значения мы получили для клеток CHO для МТ вблизи края клетки.Таким образом
небольшая продолжительность роста, наблюдаемая для МТ у края клетки, отличалась от
устойчивый рост внутри клетки.

Чем может быть объяснение этой разницы в поведении? МТ
динамика внутри ячейки принципиально отличается от самой ячейки
маржа или только видимо так? Более тщательное изучение поведения МП показало, что
не все параметры зависят от положения в ячейке. Скорости роста и
укорочение (17 и 30 мкм / мин, соответственно) — нет.Мы получили
одинаковые значения независимо от того, проводились ли определения в ячейке
поля или внутри камеры, и они были похожи на полученные
ранее на периферии клетки (

Shelden
и Wadsworth, 1993). Точно так же частота спасения была
по существу постоянный. Внутри клетки среднее расстояние сокращения
была небольшой (2,9 ± 3,4 мкм), а частота спасения была высокой (0,12
второй ^-1 ). Укорочение МТ назад от края ячейки сопровождалось
экспоненциальная функция убывания, означающая, что вероятность перехода к
фаза роста не зависела заметно от степени укорочения или
положение в камере.Значения длины укорочения и частоты спасения
были практически такими же, как и ранее полученные на периферии клетки.
(4,3 ± 3,3 мкм и 0,13 секунды ^-1 соответственно)
(

Шелден и Уодсворт, 1993).
Наконец, когда мы оценили кажущуюся частоту катастроф вблизи ячейки
маржа, мы получили значение (0,08 секунды ^-1 ), подобное этому
ранее сообщалось (0,06 секунды ^-1 ) (Sheldon and Wadsworth, 1993).
Таким образом, основное различие в поведении МП — очевидная высокая частота
катастрофа на краю ячейки по сравнению с низкой частотой (0.005
второй ^-1 ), который мы находим внутри камеры.

Мы предполагаем, что разница в частоте катастроф является только кажущейся
и может быть объяснен «граничным эффектом» границы ячейки. В
граница препятствует продолжению роста, вызывая паузу и / или катастрофу.
Отсюда следует, что наблюдения, ограниченные периферией клетки, недооценивают
собственной продолжительности роста и переоценить частоту катастроф. Высота
частота спасения не позволяет MT полностью сокращаться до
центросома.Вместо этого сокращающиеся MT быстро превращаются в растущие,
которые затем возвращаются к клеточной мембране. Таким образом, асимметрия
частоты переходов и граничный эффект в совокупности создают устойчивые
рост внутри клетки, но множество небольших колебаний длины МТ вблизи
маржа ячейки.

Каков характер границы? Самая простая возможность состоит в том, что
сама мембрана или плотная актиновая сеть, которая обычно лежит в ее основе
представляет собой физическое препятствие для роста.В качестве альтернативы химический сигнал
испускаемый с поверхности клетки может изменить состояние МТ. Растущие МТ
отмечены наличием белков семейства CLIP-170 (CLIP-170 и CLIP-115
для клеток млекопитающих) (

Perez et al.,
1999;

Hoogenraad et al.,
2000), ЗАСТЕЖКА (

Ахманова и др. ,
2001), комплекс EB-1 / APC
(

Mimori-Kiyosue et al., 2000a;

Mimori-Kiyosue et al., 2000b)
и динактиновый комплекс (

Vaughan et al.,
1999) на их положительных концах. Связь между наличием
эти белки и динамика MT еще предстоит установить для клеток млекопитающих.Белки семейства CLIP-170 могут быть хорошими кандидатами для обеспечения роста MT в
внутренность клетки, как ортолог делящихся дрожжей CLIP-170, tip1p,
стабилизирует рост МП, предотвращая преждевременную катастрофу
(

Бруннер и медсестра, 2000).
Комплекс EB1 / APC, который способствует полимеризации MT in vitro
(

Накамура и др., 2001), и
повышает стабильность МТ in vitro и in vivo
(

Zumbrunn et al., 2001), может
также предотвращают деполимеризацию растущих наконечников MT. Если что-то или все из них
белки были необходимы для поддержания низкой частоты катастроф или высокой
частота спасения и если фактор на поверхности клеток вызвал их диссоциацию
со стороны МТ плюс результатом будет вынужденный переход к
фаза сокращения.

Устойчивое состояние

Простейшим критерием устойчивого состояния является то, что количество и количество МТ
полимер не меняется со временем. Кажется парадоксальным результатом является то, что в
в устойчивом состоянии некоторые МП устойчиво растут. Откуда приходит сокращение
от сбалансировать рост?

Инжир.
8A дает качественное объяснение. Пренебрежение несовершеннолетним
вклад, который играет минус-конец пути в клетках СНО, рост
зарождающийся МП по сути компенсируется полным сокращением другого МП
с положительного конца.Колебания роста и укорочения около края клетки,
в среднем, приравнивают друг к другу, потому что устойчивый рост до клетки
граница восстанавливает полимер, потерянный из-за укорочения границы. Таким образом, сотовая
уровни полимера МТ остаются постоянными при наличии устойчивого роста
индивидуальные МП.

Более глубокий парадокс — восходящее распределение концов МП. Почему
распределение неравномерное в ячейке? Ответ снова связан с
граничный эффект. Устойчивый рост и непостоянное сокращение МТ — это
эквивалентно заявлению, что частота катастроф невелика и
частота высокая.В клетках CHO частота катастроф настолько мала, что
зарождающиеся МП обычно достигают границы ячейки, прежде чем у них будет возможность
сократить. Напротив, МТ обычно укорачиваются лишь на небольшое расстояние перед
возвращаются к краю ячейки. Поскольку по определению граница накладывает
предел роста, асимметрия в частотах переходов приведет к концам МП
проводить больше времени и, таким образом, накапливать у края ячейки
(

Рис. 8Б).

Количественную оценку распределения длин МТ дает
концептуальная основа трактовки концов МП как динамических элементов, подвергающихся
1-мерная диффузия и дрейф.Обработка диффузией плюс дрейф
ранее использовался для оценки динамики МП у меланофоров
(

Воробьев и др., 1999) и
было теоретически показано, чтобы быть допустимым приближением динамического
нестабильность (

Малый, 2001). В
В этой структуре устойчивое состояние достигается, когда потоки МП заканчиваются из-за дрейфа
и диффузия равны и противоположны. Это равенство можно выразить как

,
где n означает количество концов MT в любой заданной плоскости ячейки, а ∂
n / ∂x — градиент концентрации концов поперек плоскости.

Каркас диффузии плюс дрейфа позволяет рассчитать распределение
MT plus заканчивается в установившемся состоянии согласно уравнению

(

Воробьев и др. , 1999). В
отношение коэффициентов D / v _d дает оценку того, насколько круто
распределение возрастает. Для клеток СНО соотношение составляло ~ 3 мкм, как
определяется кинетически и 5,8 мкм при определении длины
распределение. Принимая значение из подбора распределения длин, получаем
удвоение расстояния
.Этот
означает, что в пределах 5 мкм от клетки будет в 20 раз больше МТ-концов.
края, чем в зоне 5 мкм вокруг центросомы.

Динамика MT in vivo по сравнению с чистым тубулином in vitro

Асимметрия динамики МТ in vivo отличается от МТ in vitro,
где и рост, и сокращение имеют тенденцию к постоянному
(

Митчисон и Киршнер,
1984b;

Хорио и Хотани,
1986;

Уокер и др.,
1988). Разница между параметрами, наблюдаемыми in vitro и in vitro.
vivo предполагают, что существует регуляторный механизм на конце MT plus.Несколько
Было высказано предположение, что белки увеличивают частоту катастроф, включая
XKCM1 (

Walczak et al., 1996;

Desai et al. , 1999;

Tournebize et al., 2000) и
stathmin / Op18 (

Бельмонт и Митчисон,
1996;

Хауэлл и др.,
1999). Некоторые MT-ассоциированные белки (MAP4, Xenopus XMAP
215 и его человеческий гомолог TOGp) могут играть противоположную роль, спасая МТ путем
стабилизация и / или сборка-продвижение
(

Tournebize et al., 2000;

Spittle et al., 2000;

Попов и др., 2001) (для
обзоры, смотрите

Андерсен, 2000;

Хилд, 2000).Кроме того, плюс
концевые связывающие белки, такие как CLIP-170
(

Perez et al., 1999) или EB1
(

Mimori-Kiyosue et al., 2000b)
представляют собой потенциальные регуляторные факторы, хотя механистические исследования
демонстрации того, как они могут повлиять на динамику МП, отсутствуют.

Рост растущих МТ в клетках СНО был не только постоянным, но и быстрым. В
скорость, которую мы получили, 15-20 мкм / мин, была выше, чем большинство заявленных значений
для роста МТ в других клетках, клеточных экстрактов или очищенного тубулина (обзор
к

Odde and Buettner, 1995). Однако аналогичные мгновенные значения были зарегистрированы для клеток CHO.
(

Шелден и Уодсворт, 1993),
GFP-CLIP-170 треки в ячейках Vero (

Перес
et al., 1999) и треков EB-1-GFP в клетках Xenopus A6
(

Мимори-Кийосуэ и др.,
2000а). Неясно, какие факторы ответственны за
различия в заявленных показателях, но наше исследование и несколько цитированных отчетов
указывают на то, что рост MT in vivo может быть удивительно быстрым. Нормы in vivo
почти на порядок выше, чем предсказывает in vitro
исследования чистого тубулина (

Walker et al.,
1988). Это соображение предполагает, что константа скорости для MT
рост in vivo выше, чем тот, который определен in vitro, или что клетка имеет
механизм для поддержания пула свободного тубулина значительно выше критического
концентрация.

Биологическое значение модели жизненного цикла МТ

Жизненный цикл MT в клетках CHO и NRK имеет несколько характерных особенностей.
особенности, включая постоянный рост внутри клетки, асимметричный
частоты переходов и эффекты границы ячейки. Что может быть
биологическое значение этого набора свойств? Предлагаем ответ
заключается в обеспечении механизма, с помощью которого массив MT может быстро «обнаруживать» изменения
периферия клетки. Быстрый и постоянный рост позволяет зарождающимся МТ удлиняться.
от центросомы до границы клетки за короткое время. Это было бы
выгодно для двигающейся ячейки, в которой край ячейки продвигается в
что цитоскелет MT может быстро приспособиться к любому выступу или изменению
в форме клетки. Такое размещение также может иметь важное значение для содержания
мембранный перенос внутри клетки, включая транспорт пузырьков либо
к поверхности клетки или от нее.Наконец, эффективное зондирование периферии
с помощью MT могут быть важны для координации подвижной активности в клетке.
периметр для достижения направленной подвижности.

Новое понимание динамики МП, полученное в результате этого анализа МП
жизненный цикл в клетках CHO и NRK предполагает, что аналогичный комплексный анализ в
другие типы клеток будут полезны. Будет важно определить,
различные типы клеток, такие как фибробласты, эпителиальные или нейрональные клетки, имеют
аналогичные или отличительные «стили жизни» МП.В любом случае это исследование указывает
острая необходимость проведения определений поведения МП в
внутренность клетки и признание того, что клетка — это конечная система, в которой ее
граница оказывает важное влияние.

Brodsky & Smith, LLC объявляет о расследовании компании MTS Systems Corporation (NASDAQ: MTSC)

TipRanks

По этим двум акциям дно? Аналитики говорят «покупайте»

Сегодня мы смотрим на две биотехнологические компании с малой капитализацией, акции которых резко упали.Каждая компания недавно столкнулась с клинической неудачей, которая привела к падению цены акций, уничтожив предыдущие достижения и вернув ее к низкому уровню. Подобные неудачи не редкость в биотехнологической отрасли и фактически подчеркивают риск и спекулятивный характер отрасли. Так что же делать инвесторам, когда акции рушатся? Дело в плохих основах? И цена акции еще не достигла своего минимума? Вот где вступают в дело профессионалы с Уолл-стрит. Отмечая, что каждый из них собирается снова свернуть на восходящую траекторию, некоторые 5-звездочные аналитики видят привлекательную точку входа для обоих.Используя базу данных TipRanks, мы выяснили, что эти два тикера получили консенсус-рейтинг умеренного или сильного покупателя от аналитического сообщества и могут похвастаться сильным потенциалом роста. Cortexyme, Inc. (CRTX) Первое, на что мы обращаем внимание, — это Cortexyme, биофармацевтическая компания клинической стадии, специализирующаяся на дегенеративных заболеваниях, особенно болезни Альцгеймера. Главный кандидат компании — COR388, также называемый атузагинстат. Атузагинстат в настоящее время исследуется в рамках исследования GAIN, изучения его эффективности против болезни Альцгеймера.В исследовании приняли участие 643 пациента, и компания двигалась к разделу открытого набора (OLE) фазы 2/3 исследования. Во время планового обновления нормативных требований Cortexyme объявила, что фаза OLE будет остановлена, хотя первичное исследование GAIN будет продолжено, а результаты должны быть опубликованы в 4 квартале 2021 года. Объявление о частичной остановке вызвало падение цены акций на 35%. Частичное удержание было вызвано побочными эффектами на печень во время исследования атузагинстата. Печеночные симптомы были обратимыми и не проявляли долгосрочных эффектов.FDA проверило эти записи, и в сотрудничестве с Cortexyme было принято решение сохранить OLE при продолжении GAIN. Это решение позволяет продолжить основной упор программы при разработке нового протокола для OLE. Целью OLE является проверка долгосрочной эффективности и переносимости препарата. В обзоре Cortexyme после объявления 5-звездочный аналитик HC Wainwright Эндрю Фейн отметил: «Объявление Cortexyme о частичном прекращении клинических исследований OLE-исследования атузагинстата вызывает разочарование, но обратимая природа токсичности для печени может дать некоторый луч надежды. для Cortexyme.Мы считаем, что продолжение основного исследования предполагает, что повреждение печени, вызванное лекарством, может быть недостаточно серьезным, чтобы остановить программу ». Обращаясь к краткосрочным перспективам, Фейн добавляет: «Продолжение испытания GAIN обнадеживает, несмотря на частичное удержание OLE. Это говорит о том, что FDA планирует дождаться дополнительных данных основного исследования, прежде чем делать какие-либо выводы. Руководство сообщило, что почти треть пациентов GAIN завершили исследование и прошли 12-недельный срок, что говорит о том, что они вне риска.С этой целью Фейн оценивает CRTX как «Покупать», и его целевая цена в 76 долларов США указывает на уверенность в потенциале роста на 147%. (Чтобы посмотреть послужной список Фейн, нажмите здесь). В целом, Cortexyme имеет средний рейтинг покупок согласно консенсусу аналитиков, при этом 6 недавних обзоров разбиты на 4: 1: 1, покупка-удержание-продажа. Средняя целевая цена этой акции в 83,60 доллара предполагает, что Уолл-стрит видит здесь высокий потенциал, порядка 170% от торговой цены в 30,74 доллара. (См. Анализ запасов CRTX в рейтинге TipRanks). Иммуновант (IMVT) Далее идет Immunovant, биофармацевтическая исследовательская фирма клинической стадии, специализирующаяся на разработке методов лечения пациентов с аутоиммунными расстройствами — классом заболеваний, при которых иммунная система атакует собственное тело пациента. Ведущий кандидат на лекарство от компании, IMVT-1401, проходит испытания для лечения заболеваний щитовидной железы, миастении и сердечной аутоиммунной гемолитической анемии. Лекарство, описанное как «новое, полностью человеческое моноклональное антитело против FcRn», доставляется подкожной инъекцией. 2 февраля акции Immunovant упали на 42%, и с тех пор они продолжают падать. Провоцирующим фактором стало объявление компании о том, что клиническое испытание IMVT-1401 в фазе 2b по лечению заболеваний щитовидной железы временно приостановлено из-за опасного повышения уровня ЛПНП у пациентов.ЛПНП — потенциально опасная форма холестерина, связанная с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Несмотря на клиническую неудачу, пятизвездочный аналитик Stiffel Дерек Арчила подтвердил рекомендацию «покупать» акций IMVT вместе с целевой ценой в 28 долларов. Эта цифра предполагает потенциал роста на 52% по сравнению с текущими уровнями. (Чтобы посмотреть послужной список Арчилы, нажмите здесь) «Интересно, что увеличение наблюдалось только у пациентов с TED, и наш обзор литературы предлагает несколько вещей: (1) вероятно, это специфично для TED, учитывая биологию — подробности см. Ниже , но мы не думаем, что подобное увеличение ЛПНП будет наблюдаться при других показаниях за пределами TED; и (2) другие методы лечения щитовидной железы, используемые в Graves / TED, также показывают аналогичное повышение ЛПНП, которое в конечном итоге является временным.Мы думаем, что IMVT-1401 воспроизводит этот механизм », — отметил аналитик. Арчила резюмировал:« Хотя нам потребуются дополнительные данные от компании, чтобы подтвердить … мы не думаем, что эта программа мертва. ” В целом, консенсус-прогноз аналитиков Strong Buy на IMVT предполагает, что Уолл-стрит в целом согласна с оценкой Арчилы. Этот рейтинг основан на 8 недавних обзорах, которые включают 7 покупок и только одно удержание. Средняя целевая цена здесь составляет 40,38 доллара, что предполагает потенциал роста примерно на 121% в следующие 12 месяцев.(См. Анализ акций IMVT на сайте TipRanks). Чтобы найти хорошие идеи для торговли акциями по привлекательной оценке, посетите сайт «Лучшие акции для покупки» TipRanks, недавно выпущенный инструмент, который объединяет все аналитические данные TipRanks по акциям. Отказ от ответственности: мнения, выраженные в этой статье, принадлежат исключительно упомянутым аналитикам. Контент предназначен для использования только в информационных целях. Прежде чем делать какие-либо инвестиции, очень важно провести собственный анализ.

ПМЭФ 2019 Генеральный директор МТС защищает решение Huawei, но работает с другими

Ведущий российский оператор мобильной связи МТС защищал свое решение позволить китайской Huawei строить свои сети 5G, но продолжит сотрудничество с другими компаниями, заявил в пятницу генеральный директор компании.

В интервью корреспонденту CNBC Джеффу Катмору на Петербургском международном экономическом форуме (ПМЭФ) генеральный директор МТС Алексей Корня сказал, что Huawei «полностью квалифицирована» для обеспечения инфраструктуры для беспроводных сетей следующего поколения в России. Заявление напрямую связано с предупреждениями официальных лиц США о том, что программное обеспечение и оборудование 5G Huawei представляют угрозу национальной безопасности.

«Каждая страна имеет свои права и возможности определять, представляет ли тот или иной тип оборудования определенные проблемы», — сказал Корня.«В этом смысле Huawei полностью соответствует требованиям для работы в наших сетях».

Корня добавил, что МТС также работает с шведской Ericsson и финской Nokia над технологией 5G, заявив, что «все три основных поставщика представлены в нашей сети». По данным исследовательской компании Dell’Oro Group, Huawei — крупнейший в мире поставщик телекоммуникационного оборудования, за которым следуют Nokia и Ericsson.

«В бизнес-мышлении вы всегда балансируете между поставщиками и не хотите попадать в зависимость от одного поставщика», — сказал он.

Администрация Трампа внесла Huawei в черный список, предупредив, что ее оборудование представляет угрозу безопасности, поскольку может открыть лазейку для китайского шпионажа. Официальные лица США указывают на китайские законы, которые, по всей видимости, требуют, чтобы местные компании помогали правительству в сборе разведданных, когда этого требует коммунистическая партия в Пекине. Huawei неоднократно отрицала, что будет заниматься шпионажем в какой-либо форме.

На этой неделе МТС объявила о подписании соглашения с Huawei о проведении тестовых запусков новых сетей 5G в этом году и в 2020 году.Председатель КНР Си Цзиньпин присутствует на форуме в рамках трехдневного государственного визита в Россию, где назвал президента Владимира Путина своим «лучшим другом». Как сообщается, в четверг министерство торговли Китая заявило, что Пекин и Москва подписали в ходе визита сделки на сумму более 20 миллиардов долларов для развития экономических связей в таких областях, как технологии и энергетика.

На вопрос, оказывалось ли давление на МТС с целью подписания сделки с Huawei на этой неделе, Корня ответил «абсолютно нет».

5G обеспечивает более высокую скорость и меньшее время задержки по сравнению с предыдущими беспроводными сетями.Он позиционируется как потенциальный фактор, который изменит правила игры для таких отраслей, как беспилотные автомобили и удаленные отделения, где требуется быстрое и надежное подключение к Интернету.

Топ 5 неофициальных серверов Ark для ПК

С недавним выпуском последней карты ARK от Studio Wildcard, Crystal Isles и последним анонсом грядущего DLC Ark Genesis Part 2, вы можете задаться вопросом, в какой сервер Ark потратить свое время.

После тысяч часов погружения в Ark (теперь моя самая популярная игра в моей библиотеке Steam) я испытал свою изрядную долю неофициальных серверов Ark.Хотя мне нравятся официальные тарифы на серверы Ark, я отчаянно хотел, чтобы они внедрили S + (Structures Plus), потому что это делает игру , а значит, намного более приятной.

Это то, что заставило меня изучить неофициальные варианты, отправив меня в путешествие по некоторым довольно крутым серверам, стоимость которых была не слишком далеко от официальных. Я все еще получал удовлетворение от строительства базы и времени в игре, без раздражающих частей официальных серверов.

Вот список моих любимых неофициальных серверов Ark для вашего удовольствия! Надеюсь увидеть тебя в Ковчеге.

1. Холодный ковчег (PvP)

Chilled Ark существует с самого начала первого выпуска Ark Survival Evolved, и большая часть сообщества знала друг друга по другим играм еще до этого.

С 6 кластерными серверами на выбор (на момент написания) и включенным кросс-чатом среди других удивительных функций есть масса причин попробовать Chilled Ark.

Текущие серверы:

Щелкните ссылки ниже, чтобы присоединиться к серверам, или посетите их веб-сайты, чтобы узнать больше, или присоединитесь к Discord.

Как следует из названия сообщества, серверы холодные, дружелюбные и очень ориентированные на сообщества, не позволяя ругаться, чтобы гарантировать, что сервер также зрелый, но дружелюбный для всех возрастов.

Администраторы проделывают огромную работу, чтобы убедиться, что на серверах нет токсичности, и поощряют игроков к дружественному подходу к PVP, что делает игру более привлекательной для зрелых игроков.

Оценок:

• XP x 3
• урожай X 3
• Скорость спаривания X 3
• Скорость приручения X 3
• Скорость взросления малыша X 3

2.Астральный ковчег (PvP)

Первый сервер Astral Ark был запущен в июле 2015 года и является частью Astral Imperium, основанной в 2014 году.

Astral теперь обслуживает 9 (скоро будет 10, когда выйдет Часть 2 Книги Бытия) серверов Ark Survival Evolved. Если вы перейдете на их веб-сайт, вы увидите список серверов, которые они размещают, и ссылки на каждый из них.

Стоимость сервера Astral Ark

Astral — мой любимый неофициальный сервер Ark на все времена, потому что их ставки так похожи на официальные, что мне нравится, с дополнительным преимуществом некоторых полезных модов.

Вдобавок ко всему, сообщество просто потрясающее, и их администраторы более чем рады ответить на любые вопросы в игре или через Discord.

• Опыт: 1x
• Ресурсы: 2x
• Приручение: 2x
• Вылупление: 4x
• Созревание: 4x

Награды

Вы можете заработать различные награды через систему голосования Astral, в результате чего вы получите металлические слитки, элементы, очки в магазине и даже шанс получить чертеж седла или чибис.

Предметы доставляются игрокам в игре мгновенно. Проголосовать очень легко, нажав кнопку «Голосовать за ресурсы» или кнопку «Голосовать за BP / Chibis» на веб-сайте Astral.

Маг.

Магазин

Astral позволяет вам покупать стартовые наборы, ресурсы и динозавров в их магазине, используя игровые очки, которые вы можете заработать, голосуя.

балла начисляются за ежедневное голосование, что означает, что вы можете постепенно заработать достаточно баллов, чтобы потратить их в магазине. Хотя некоторых игроков может отпугнуть тот факт, что вы можете покупать динозавров, таких как Огненные Виверны, для накопления очков требуется много времени.

3. Остров Каос (PvP)

The Kaos Island — это англо- и испаноязычный кластер серверов с неофициальной скоростью сервера x10. Максимальная вместимость каждого сервера — 70 игроков на следующих картах:

Особенности острова Каос

На серверах Kaos Island круглосуточно работает команда администраторов, которая решает любые проблемы или вопросы, которые могут возникнуть у игроков. Все их серверы обновляются в 06:00 по Гринвичу, чтобы обеспечить обновление серверов до последней версии.

За каждые 15 минут активности игрока на серверах острова Каос он зарабатывает 1 очко, которое можно потратить в магазине. Игроки также могут ежедневно голосовать, чтобы получать награды, а также участвовать в регулярных мероприятиях, чтобы выиграть призы, такие как яйца динозавров.

При первом входе на сервер у племени может быть до 3 дней защиты от нападения на его структуры. В это время защищенные игроки также не могут атаковать другие постройки.

4.Бесплотное владычество (PvE)

Ethereal Dominion — это модифицированный PvE-сервер с внутриигровым магазином и событиями на следующих серверах:

Скорость сервера Ethereal Dominion

• 1,5x XP
• 5,0x Приручение
• 3,0x Сумма урожая
• 16,0x Скорость вылупления яйца
• 10,0x Скорость созревания
• 0,25x BabyCuddleIntervalMultiplier
• 0,5x Интервал откладки яиц
• Интервал откладки яиц
• . 30x Качество рыболовной добычи
• 0,7x Дневная скорость / 1,3x Ночная скорость

Внутриигровой магазин

Игроки могут получить доступ к внутриигровому магазину, изучив и создав Обменник. После того, как обменник будет помещен на базу игрока, он может получить доступ к магазину и потратить свои золотые монеты.

золотых монет можно заработать, ежедневно голосуя за их серверы Ragnarok, Valguero и Crystal Isles, а также посещая серверные мероприятия.

5. Скорость ковчега (PvPvE)

Ark Speed ​​- отличный сервер, если вы уже потратили много времени на Ark и просто хотите построить отличную базу без гринда более низких ставок.Вот серверы Ark Speed:

с колоссальной скоростью x100.

Цены на сервер Ark Speed ​​

Хотя я, естественно, выбрал бы неофициальный сервер Ark с более низкими показателями, иногда вам нужно расслабиться и повеселиться. Серверы Ark с более высокими скоростями могут быть отличным способом построить эпические базы и получить доступ к конечному игровому контенту, который в противном случае вы бы не смогли испытать.

• Сбор x25
• Спаривание x100
• Разведение x100
• Crosshair ON
• Hardcore OFF
• От третьего лица
• ~ 50 минут днем, ~ 10 минут ночью
• Dinos: максимальный уровень Wild 180 + 100 мгновенный + 150 уровень по уровню = + 250 уровень
• Игрок: мгновенно Уровень 300

6.МТС (ПВП)

Серверы

MTS обеспечивают конкурентное взаимодействие с Ark в огромном кластере, который стирается в среднем каждые 3+ месяца. В основной кластер МТС входят:

Тарифы сервера МТС

Если вы ищете более сбалансированный неофициальный сервер Ark, MTS предлагает тарифы, которые в большей степени соответствуют официальным тарифам, но без лишнего шума.

• Опыт = 2,5
• Сбор урожая = 2,5
• Приручение = 2,5
• Разведение = 5.0
• Интервал спаривания = 0,5
• Интервал отпечатка ребенка = 0,5
• Масштаб количества отпечатка = 1,5
• Рост урожая = 3,0
• Повреждение пещеры = 6,0
• Потребление еды / воды игроком = 0,5
• Качество добычи = 1,0
• Качество рыболовной добычи = 1,2
• PlayerFortitudePerLevelStatsMultiplier = 5,0
• PerPlatformMaxStructuresMultiplier = 0,5
• Дневная скорость = 1,0
• Скорость в ночное время = 1,0
• Зажим для брони седла = 124% / 99. 2%
• Зажим урона от оружия = 298%
• Зажим для брони = 496
• Зажим максимальной прочности = 1250

Модификации сервера MTS

Когда я ищу неофициальный сервер Ark с модификациями, мне нравится находить такой, как MTS, где моды сбалансированы и полезны, не переусердствуя.

• Structures Plus +
• MTS Stacking Mod 500-50
• Бинокль Bitou2k
• Пистолет для захвата (с защитой от дублирования)
• MTSARK.co.uk Community Mod
• Авто энграмм!
• WShopUI

Функции MTS

MTS приложили действительно большие усилия, чтобы сделать свой сервер уникальным, предлагая другие внутриигровые функции, такие как магазин, где вы можете использовать комплекты и покупать / продавать предметы.

Вы также можете сыграть свои игровые очки в лотерее MTS, выбрасывая число от 1 до 1000, где наибольший результат выигрывает банк входа.

Если вам не нравится разговаривать по всему миру, но вы хотите отправить сообщение кому-то, кто не принадлежит к вашему племени или группе союзников, вы можете отправить личное сообщение другим игрокам на вашей карте на серверах MTS.

CINTA ADHESIVA ANCHO 5 CMS LARGO 4,5 MTS 40959-111 Otros Coleccionismo

COVID 19: наши обязательства перед вами

Уважаемые пациенты HealthActions, физиотерапевты и участники HealthActions Fitness,

Сейчас:

Наши фитнес-центры открыты согласно CDC и государственным правилам.

Физическая терапия классифицируется Белым домом / CDC и Министерством внутренней безопасности как критически важная инфраструктурная отрасль и, следовательно, как важная услуга.

Как поставщики медицинских услуг, мы здесь, чтобы помочь вам ДВИГАТЬСЯ ЛУЧШЕ И ЖИТЬ ЛУЧШЕ. Если вы испытываете боль, трудности с движением, головокружение или проблемы с равновесием, мы здесь, чтобы помочь вам восстановить функции и способность двигаться. Движение является ключом к здоровью, и хотя мы все ограничены и практикуем социальное дистанцирование, мы должны иметь возможность перемещаться по дому и на работе, чтобы способствовать укреплению нашего здоровья и предотвращать болезни.

В НАШИХ КЛИНИКАХ:

Персонал или пациенты с какими-либо признаками или симптомами болезни, если они контактировали с кем-либо, кто болел: им сообщают ОСТАВАТЬСЯ ДОМА.
Всем, кто побывал в зонах Уровня 3 согласно CDC, был в круизе или путешествовал в любом замкнутом пространстве с группами, было сказано ОСТАВАТЬСЯ ДОМА в течение 14 дней.

Клиники проходят дезинфекцию в соответствии с рекомендациями CDC. Персонал соблюдает все рекомендации CDC.

В НАШИХ ФИТНЕС-ЗАЛАХ:

Все оборудование подвергалось глубокой очистке и дезинфекции несколько раз в день.
Все инструкции местных органов власти, правительства штата и федерального правительства были пересмотрены.

Мы будем работать на 100% в соответствии со всеми директивами

Чтобы ВОЙТИ НА НАШИ ОБЪЕКТЫ ВЫ ДОЛЖНЫ:

1.Держитесь на расстоянии 6 футов от других участников
2. Вымойте или продезинфицируйте руки при входе и выходе
3. Продезинфицируйте оборудование, которое вы планируете использовать, до и после использования дезинфицирующим средством из комплекта поставки
4. Если у вас есть любые признаки / симптомы кашля, чихания, лихорадки или боли в горле: ОСТАВАЙТЕСЬ ДОМА
5. Если вы были рядом с кем-либо с этими признаками или симптомами: ОСТАВАЙТЕСЬ ДОМА
6. Если вы побывали в любом районе уровня 3 вспышки, или путешествовали в самолетах, поездах, круизных лайнерах или подвергались воздействию больших групп: STAY HOME
7.Если вы классифицированы как старший: ОСТАВАЙТЕСЬ ДОМА (ВСЕ СТАРШИЕ КЛАССЫ ТЕПЕРЬ ПРИОСТАНОВЛЕНЫ)
8. В одной комнате или помещении одновременно могут находиться не более 25 человек, расстояние между которыми не должно превышать 6 футов.

Мы здесь, чтобы помочь ВАМ! Осуществляется постоянный мониторинг всех местных, государственных и национальных правил. Мы будем держать вас в курсе любых изменений в нашей доступности, поскольку мы все вместе работаем в условиях чрезвычайной ситуации в стране.