Реквизиты СКБ-банка — банковские реквизиты и реквизиты для зачисления средств в валюте

Публичное акционерное общество «Акционерный коммерческий банк содействия коммерции
и бизнесу» является кредитной организацией, зарегистрированной Центральным
банком Российской Федерации 20 апреля 1992 года, регистрационный
номер
705.

Запись о государственной регистрации кредитной организации внесена в единый
государственный реестр юридических лиц 28 августа 2002 года, основной
государственный регистрационный № 1026600000460.

Полное фирменное наименование Банка

Публичное акционерное общество «Акционерный коммерческий банк содействия коммерции и бизнесу»

Сокращенное фирменное наименование Банка

ПАО «СКБ-банк»

Полное фирменное наименование Банка на английском языке

JOINT-STOCK COMMERCIAL BANK OF SUPPORT TO COMMERCE AND BUSINESS

Сокращенное фирменное наименование Банка на английском языке

SKB-BANK

Место нахождения Банка

г. Екатеринбург

Адрес центрального офиса

620026 г. Екатеринбург, ул. Куйбышева, 75

Телефон

8 (343) 355-75-75, 8-800-1000-600

Факс

8 (343) 251-42-22

Банковские реквизиты

Корр. счет

30101810800000000756 в Уральском ГУ Банка России

Реквизиты для зачисления средств в валюте

Доллары США

на счет клиента в ПАО «СКБ-банк» (SKB-BANK, Ekaterinburg, Russia, SWIFT: SKBERU4E) предпочтительно выбирать один из следующих банков-корреспондентов:

receiver’s correspondent (банк-корреспондент ПАО «СКБ-банк»): account —  0104195417 with VTB Bank (Europe) SE, Germany, SWIFT:  OWHBDEFF
receiver’s correspondent (банк-корреспондент ПАО «СКБ-банк»): account — 70-55.068.654 with Raiffeisen Bank International AG, Vienna, Austria, SWIFT: RZBAATWW

Евро

на счет клиента в ПАО «СКБ-банк» (SKB-BANK, Ekaterinburg, Russia, SWIFT: SKBERU4E) предпочтительно выбирать один из следующих банков-корреспондентов:

receiver’s correspondent (банк-корреспондент ПАО «СКБ-банк»): account — 0104195391 with VTB Bank (Europe) SE, Germany, SWIFT: OWHBDEFF
receiver’s correspondent (банк-корреспондент ПАО «СКБ-банк»): account — 01-55.068.654 with Raiffeisen Bank International AG, Vienna, Austria, SWIFT: RZBAATWW

Фунты стерлингов

receiver’s correspondent (банк-корреспондент ПАО «СКБ-банк»): account —  0104195425 with VTB Bank (Europe) SE, Germany, SWIFT: OWHBDEFF

Белорусские рубли

eceiver’s correspondent (банк-корреспондент ПАО «СКБ-банк»): account —  BY91BPSB17025832800119330000 with BPS-Sberbank, Minsk, Belarus, SWIFT:  BPSBBY2X

Реквизиты ПАО «МОСКОВСКИЙ КРЕДИТНЫЙ БАНК»

Полное фирменное наименование

«МОСКОВСКИЙ КРЕДИТНЫЙ БАНК»
(публичное акционерное общество)
CREDIT BANK OF MOSCOW (public joint-stock company)

Сокращенное фирменное наименование

ПАО «МОСКОВСКИЙ КРЕДИТНЫЙ БАНК»
CREDIT BANK OF MOSCOW

Корреспондентский счет

30101810745250000659
в Главном управлении Центрального банка Российской Федерации по Центральному федеральному округу г. Москва

Место нахождения

г. Москва

Юридический адрес

107045, Москва, Луков переулок, д. 2, стр. 1

Почтовый адрес

Москва, Луков переулок, д. 2, стр. 1, 107045

Телефон

(495) 777-4-888
8 (800) 100-4-888 (бесплатный звонок по России)

Телекс

614645 MCB RU

Адрес электронной почты

Адрес банка в сети Internet

Регистрационный номер Банка в соответствии с Книгой государственной регистрации кредитных организаций

1978

Стандартные платежные инструкции для платежей в иностранной валюте

Для просмотра полного списка банков-корреспондентов, пожалуйста, пройдите по следующей ссылке.

Территориальные учреждения Банка России, осуществляющие надзор за деятельностью ПАО «МОСКОВСКИЙ КРЕДИТНЫЙ БАНК»

Департамент надзора за системно значимыми кредитными организациями 107016, г. Москва, ул. Неглинная, д.12. Тел.: +7 495 771-91-00

Сведения об аудиторе Банка

Полное фирменное наименование

Акционерное общество «КПМГ»

Сокращенное наименование

АО «КПМГ»

Место нахождения

129110, г. Москва, Олимпийский проспект, д. 16, стр. 5, этаж 3, помещение I, комната 24е

Полное наименование саморегулируемой организации аудиторов, членом которой является (являлся) аудитор Банка

Саморегулируемая организация аудиторов «Российский Союз аудиторов» (Ассоциация)
Москва, Петровский пер., д. 8, стр. 2

Полное фирменное наименование

Акционерное общество «Аудиторско-консультационная группа «Развитие бизнес-систем»

Сокращенное наименование

АО «АКГ «РБС»

Место нахождения

123242, город Москва, Кудринский переулок, дом 3Б, строение 2, комната 3

Полное наименование саморегулируемой организации аудиторов, членом которой является (являлся) аудитор Банка

САМОРЕГУЛИРУЕМАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ АУДИТОРОВ АССОЦИАЦИЯ «СОДРУЖЕСТВО»
Местонахождение: 119192, г. Москва, Мичуринский пр-т, д. 21, корп. 4

Мы используем файлы cookies, чтобы вам было удобно работать с сайтом. Подробнее

Реквизиты для перечисления налоговых и неналоговых платежей

Реквизиты для перечисления неналоговых платежей,
администрируемых Комитетом по управлению государственным имуществом Волгоградской области,
действующих с 01.01.2021 года

1.                Для перечисления платежей за земельные участки государственная собственность на которые не разграничена и которые расположены на территории г. Волгограда, предоставленные для целей строительства, в т.ч. индивидуального жилого строительства, а также комплексного освоения в целях жилищного строительства:

1.1.Для перечисления арендной платы за земельные участки:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 05012 04 0000 120
ОКТМО	18701000
Назначение платежа:	Арендная плата за земельный участок  по договору №_____ от  ДД/ММ/ГГГГ

1.2.Оплата пени, неустоек, штрафов по неразграниченным земельным участкам, расположенным на территории г. Волгограда:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 16 07090 02 0000 140
ОКТМО	18701000
Назначение платежа:	Пеня (неустойка, штраф) на основании (№ договора, № и/листа, № судебного решения, № претензии и т.д.) от  ДД/ММ/ГГГГ

1.3.Оплата пени, неустоек, штрафов, в счет погашения задолженности, образовавшейся до 1 января 2020 года, по неразграниченным земельным участкам, расположенным на территории г. Волгограда

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 16 10123 01 0041 140
ОКТМО	18701000
Назначение платежа:	Пеня (неустойка, штраф) на основании (№ договора, № и/листа, № судебного решения, № претензии и т.д.) от  ДД/ММ/ГГГГ

2. Для перечисления платежей за земельные участи, имущество, находящееся в собственности Волгоградской области, прочие платежи, администрируемые Облкомимуществом:

2.1.Для перечисления арендной платы за земельные участки:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 05022 02 0000 120
ОКТМО	по территориальной принадлежности земельного участка
Назначение платежа:	Арендная плата за земельный участок  по договору №___ от  ДД/ММ/ГГГГ

2.2. Для перечисления арендной платы за имущество, составляющее казну Волгоградской области (за исключением земельных участков):

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 05072 02 0000 120
ОКТМО	по территориальной принадлежности имущества
Назначение платежа:	Арендная плата за имущество казны по договору №___ от  ДД/ММ/ГГГГ

2.3. Для перечисления платы за приобретение земельного участка:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 14 06022 02 0000 430
ОКТМО	по территориальной принадлежности земельного участка
Назначение платежа:	Средства от продажи земельного участка по договору №___  от ДД/ММ/ГГГГ

2.4.Для перечисления денежных средств от реализации имущества, находящегося в собственности Волгоградской области:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 14 02023 02 0000 410
ОКТМО	по территориальной принадлежности имущества
Назначение платежа:	Перечисление денежных средств от реализации имущества по дог. № ___  от ДД/ММ/ГГГГ

2.5.Для перечисления платы за пользование денежными средствами при продаже имущества,  находящегося в собственности Волгоградской области в рассрочку:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 09042 02 0000 120
ОКТМО	по территориальной принадлежности имущества
Назначение платежа:	Перечисление процентов за рассрочку платежа при приобретении имущества по дог. №___  от ДД/ММ/ГГГГ

2.6.Для перечисления части прибыли государственных унитарных предприятий Волгоградской области:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 07012 02 0000 120
ОКТМО	18701000
Назначение платежа:	Перечисление части прибыли за ___ г.

2.7.Для перечисления дивидендов по акциям, принадлежащим Волгоградской области:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 01020 02 0000 120
ОКТМО	18701000
Назначение платежа:	Перечисление дивидендов за ___г.

2.8.Для перечисления платы по соглашениям об установлении сервитута, в отношении земельных участков, находящихся в собственности Волгоградской области

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 05322 02 0000 120
ОКТМО	по территориальной принадлежности земельного участка
Назначение платежа:	плата по соглашению об установлении сервитута №___ от ДД/ММ/ГГГГ

2.9. Для перечисления платы по соглашениям об установлении публичного сервитута, в отношении земельных участков, находящихся в собственности Волгоградской области

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 11 05420 02 0000 120
ОКТМО	по территориальной принадлежности земельного участка
Назначение платежа:	плата по соглашению об установлении публичного сервитута №___ от ДД/ММ/ГГГГ

2.10. Для оплаты пени, неустоек, штрафов, зачисляемые в бюджет Волгоградской области:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 16 07090 02 0000 140
ОКТМО	по территориальной принадлежности
Назначение платежа:	Пеня (неустойка, штраф) на основании (№ договора, № и/листа, № судебного решения, № претензии и т.д.) от  ДД/ММ/ГГГГ

2.11.  Для оплаты пени, неустоек, штрафов, в счет погашения задолженности, образовавшейся до 1 января 2020 года, зачисляемые в бюджет Волгоградской области:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 16 10122 01 0000 140
ОКТМО	по территориальной принадлежности
Назначение платежа:	Пеня (неустойка, штраф) на основании  (№ договора, № и/листа, № судебного решения, № претензии и т.д.) от  ДД/ММ/ГГГГ

2.12. Для оплаты пени, неустоек, штрафов, в случае просрочки исполнения поставщиком (подрядчиком, исполнителем) обязательств, предусмотренных государственным контрактом:

Банк получателя:	ОТДЕЛЕНИЕ  ВОЛГОГРАД  БАНКА  РОССИИ// УФК  по Волгоградской области г.Волгоград
БИК	011806101
Счет банка получателя №	40102810445370000021
Получатель:	УФК по Волгоградской области (Облкомимущество)
ИНН	3444054540
КПП	344401001
Расчетный счет №	03100643000000012900
КБК	818 1 16 07010 02 0000 140
ОКТМО	18701000
Назначение платежа:	Пеня (неустойка, штраф), предусмотренная государственным контрактом (№ _____ от  ДД/ММ/ГГГГ)

ОКТМО Волгоградская область

: Информация об обновлениях программных продуктов 1С:Предприятие

Новое в версии 3.0.87.28 :: Информация об обновлениях программных продуктов 1С:Предприятие

. 2021 , ( 27.12.2019 479-). , 08.10.2020 -4-8/16504@. 30.04.2021 , 2020 .

: » — «.

: » — — «.

01.01.2021 15% 5 . . 15% 182 1 01 02080 01 1000 110 ( 12.10.2020 236). , , .

: » — «.

: » — — «.

4 2020 , 2021 2020 ( 23.11.2020 373-).

, .

: » — «.

: » — — «.

: » — — «.

: » — —

: » — — — , ( 4 . 2020 ) — , 4 . 2020 .».

: » — — — , ( 4 . 2020 .) — , 4 . 2020 .».

: » — — — 4 . 2020 .».

: » — — — 4 . 2020 .».

, , . 1 2021 . .

, . , . , , .

: » — — «.

: » — — «.

( 20.11.2020 -4-3/19053@), :

• , , 01.01.2021, 01.01.2021;
• , , 01.01.2021, 01.01.2021.

. 01.01.2021 ( 23.11.2020 373-).

: » — «.

: » — — «.

2020 ( 28.08.2020 496).

2021 .
, ,
.

— 2020 .

— 1- 2020 .

1 2021 .

, ,
.

: » — 1- — «.

: » — 1- — «.

байков на арендованных служебных автомобилях

24
Янв

байк на арендованных служебных автомобилях

Nous sommes le concessionaire de confiance pour tous vos besoins cars, de la vente à l’entretien! Следовательно, стоимость BIK составляет 33 535 фунтов стерлингов x 30% = 10961 фунт стерлингов. Следовательно, налогоплательщик по базовой ставке в GLB будет платить 10 961 фунт стерлингов x 20% = 2192 фунта стерлингов в год. Юридический адрес: Options House, Atkin Street, Worsley, Manchester, M28 3DG Телефон: 0161 826 9716. Возможно, наиболее важной частью бюджета на 2020 год для автопарков было то, что ставки налога на служебные автомобили, объявленные в июле прошлого года, были подтверждены и вступят в силу с 6 апреля.Это удобное руководство поможет вам рассчитать BIK, причитающийся с каждого сотрудника на его служебном автомобиле. Водители корпоративных автомобилей теперь будут платить 0% налог на электромобили (EV) в течение 2020/21 года. Leasing Options Limited авторизована и регулируется Управлением финансового надзора FRN 660061. Хотите самые свежие предложения? Для автомобиля с OMV 30 000 евро и пробегом 25 000, Категория A: Если работник внес 1000 евро на покрытие эксплуатационных расходов автомобиля, то денежная компенсация будет следующей: Все коммерческие автомобили освобождаются от натуральной льготы, если соблюдаются следующие правила: В случае невыполнения любого из вышеперечисленных условий следует применять 5% натуральную компенсацию.Однако налог на ваш фургон зависит от того, используете ли вы его только для бизнеса или для личного пользования. В настоящее время у фургонов фиксированная ставка BIK составляет 3 430 фунтов стерлингов. Montreal Motor Car Lease — это семейный бизнес, обслуживающий сообщество с 1993 года. Наша информация верна на момент написания, но всегда консультируйтесь с HMRC или налоговым специалистом, соответствующим вашим индивидуальным потребностям. Мы гордимся тем, что являемся членом BVRLA. Вот снимок некоторых СМИ, о которых мы недавно рассказывали.Ваш служебный автомобиль классифицируется государством как дополнительная льгота, поэтому он облагается налогом в виде натуральной льготы (BiK). Или, если вы предпочитаете вариант, который не повлияет на ваши налоговые обязательства, обратите внимание на лизинг личного автомобиля. Водители автомобилей компании платят 0% налог на электромобили (EV) в течение 2020/21 года. Налог на ваш фургон зависит от того, используете ли вы его исключительно в деловых или деловых и личных целях. Когда служебный автомобиль и топливо компании предоставляются сотруднику или директору для личного или, хотя и не обязательно, коммерческого использования, это классифицируется как пособие по трудоустройству и, следовательно, подлежит обложению подоходным налогом.Как независимая лизинговая компания, мы работаем с рядом дилеров и партнеров, чтобы обеспечить широкий выбор роскошных, экономичных, подержанных и новых автомобилей для личного и коммерческого использования. Мы можем получить комиссионные от поставщика финансовых услуг, если вы решите заключить с ним соглашение. Этот вариант по-прежнему привлекает BIK (пособие в натуральном выражении), поскольку у вас есть автомобиль, оплачиваемый компанией. BIK составляет 30% от первоначальной рыночной стоимости автомобиля под 52% годовых. Важно знать, что малейшее изменение опций транспортного средства, даже такое, казалось бы, незначительное, как добавление ковриков, может повлиять на размер налога, который необходимо уплатить.Нет… Когда вы арендуете автомобиль через компанию с ограниченной ответственностью как для бизнеса, так и для частного использования, есть одна деталь, которая высечена в камне — налог на корпоративный автомобиль / налог на натуральные льготы (байк). Продолжайте читать, чтобы узнать о наших лучших гибридных служебных автомобилях… Электронная почта: [email protected]. Сотрудник использует автомобиль, и у него из зарплаты нетто вычитается 350 фунтов стерлингов для покрытия арендных платежей. Арендные платежи за этот автомобиль снимаются со счета работодателя прямым дебетом, но автомобиль не сдается в аренду на имя работодателя. С 12% диапазоны повышаются с шагом 1% до максимума 37%, с дизельными моделями взимается дополнительная плата в размере 4%, если они не соответствуют тестам RDE2.Таким образом, выбрав гибридный или подключаемый гибридный автомобиль компании, вы должны иметь возможность платить меньше налогов, а также наслаждаться меньшими эксплуатационными расходами, которые связаны с реже заправкой. CO2: 47 г / км; Налоговый диапазон BIK 20/21: 0%; Налог в месяц: от 79 £; Дальность полета: 28 миль; Расход топлива: 134,5 миль на галлон; Получение максимальной отдачи от PHEV как служебного автомобиля. Если вы хотите, чтобы Scandi круто использовался в автомобиле вашей компании, то XC40 для вас. Она может тратить еще 4000 фунтов стерлингов в год на дорожный налог и топливо. Налог BIK рассчитывается путем умножения цены вашего автомобиля (значение P11D) на диапазон налоговых процентов BIK.фургоны (см. Частное использование фургонов компании) транспортные средства, которые обычно не используются в качестве частных транспортных средств и непригодны для такого использования, например катафалки и грузовики. Тарифы служебного автомобиля БИК 2020 — 2023. Плата за: предоставление автомобиля; расходы, связанные с предоставлением шофера. Если вы платите 20% налога, вы платите 20% от стоимости BIK. Специальные предложения, эксклюзивы и последние автомобильные новости и обзоры. BIK — Руководство по налогу на служебные автомобили. Все, что вам нужно знать о «натуральной льготе»; включая то, как он рассчитывается и что это значит для вас как водителя служебного автомобиля.Найдите полезную информацию, адрес и номер телефона местной компании, которую вы ищете. Чтобы получить сумму, которую ваша служебная машина будет стоить вам в виде налога в год, умножьте значение BIK на диапазон подоходного налога. Или вы можете использовать служебный калькулятор HMRC для автомобилей и автомобильного топлива, если он работает в вашем браузере. Деловые пробеги с 2009 года и все последующие периоды: сотрудники могут внести свой вклад в покрытие эксплуатационных расходов своего служебного автомобиля и тем самым уменьшить свои выплаты натурой. Однако это не относится к налогу на автомобили и страхованию, например, за обслуживание и личный взнос за пробег.После нескольких лет корректировок ставок натуральных льгот (BIK) у автопарков, наконец, должны быть… Для получения дополнительной информации см. Нашу Политику конфиденциальности. Select Car leasing может предоставить скидку на желаемый автомобиль. Если вам нужен новый или подержанный автомобиль или оборудование, мы можем купить его и сдать вам в аренду, и мы сделаем это быстро. Parade предоставит индивидуальный дизайн в аренду в соответствии с вашими потребностями. Стоимость аренды автомобиля в год составит 3600 фунтов стерлингов. Elegance Leasing, вы откроете для себя наш перечень подержанных автомобилей в районе Монреаля и все наши услуги.Мы находимся по адресу 6225A St-Jacques Ouest, Монреаль в Монреале, приходите к нам, и мы будем рады приветствовать вас. Parade Leasing предоставляет гибкие варианты долгосрочного финансирования потребительской и коммерческой аренды с 1983 года. Если вы их не знаете, воспользуйтесь налоговым калькулятором HMRC, чтобы определить, сколько вы заплатите за служебный автомобиль. ПОДХОДЯЩИЙ АВТОМОБИЛЬ ДЛЯ ВАС Изучите обширный ассортимент Claireview, чтобы выбрать подходящий автомобиль. Если ваш автомобиль арендуется компанией, в которой вы работаете, вы должны будете уплатить налог на служебный автомобиль, также известный как налог в натуральной форме.Такие факторы, как выбросы CO 2 и тип топлива — бензин, дизельное топливо, гибридное или электрическое — будут определять процентный диапазон BiK вашего автомобиля. Гибридный универсал Toyota Corolla Touring Sports — это наш второй выбор для водителей служебных автомобилей, предлагающий впечатляюще низкие… Текущие ставки BIK для служебных автомобилей начинаются с 0% для чисто электрических автомобилей, 3% для новых моделей PHEV, 21% для самых экологически чистых гибридов, и 23% для любого автомобиля с выбросом CO2 100 г / км или более. С 6 апреля 2020 года правительство ввело новую экономию BIK на эффективных электромобилях с аккумулятором и подключаемых гибридах, чтобы увеличить распространение полностью электрических автомобилей среди автопарков.Этот раздел применим только в том случае, если право собственности на автомобиль не переходит к сотруднику. Найдите полезную информацию, адрес и номер телефона местной компании, которую вы ищете. BIK будет составлять 25% от 30 000 фунтов стерлингов (7500 фунтов стерлингов), и он будет взиматься по предельной ставке налога — 20% или 40%, что составит годовой сбор 1500 или 3000 фунтов стерлингов соответственно. Для старых автомобилей, выпущенных до 2009 года, годовая денежная выгода за использование служебного автомобиля рассчитывается в размере 30% от OMV автомобиля.

Опасности Тихоокеанского гребня,
Кнопка с вертикальным многоточием,
Заклинание для повышения навыка Oblivion,
Ремесленник 33-галлонный воздушный компрессор, руководство,
Открытый отбеливатель Lowe’s,
Калькулятор доступности жилищного кредита,
Куклы Reborn Baby до 20 лет,
Улица Сезам, эпизод 1476,
Senza Mamma Suor Angelica Английский перевод,
Летние наряды для парней-подростков,

BIK на электромобили: больше нет налога на автомобили компании EV

С 6 апреля 2020 года водители служебных автомобилей больше не будут платить налог в натуральной форме (BIK) на электромобили.

Эта новая инициатива является частью продолжающихся усилий правительства по поощрению перехода на электромобили и автомобили с низким уровнем выбросов. Новые налоговые льготы и льготы означают, что предприятия, которые предоставляют экологически чистые электромобили, не будут платить налоговую ставку BIK в 2020/21 году.

Автопарки компании составляют почти шесть из десяти регистраций новых автомобилей в Великобритании. Однако обновленные меры будут стимулировать один миллион водителей корпоративных автомобилей Великобритании перейти на электрические, более чистые и экологически чистые модели, которые производят гораздо меньше выбросов CO2.

Что такое BIK?

Не путать с подоходным налогом. Натуральные льготы (BIK) — это льготы, которые люди получают от своей работы, которые не включены в их зарплату или пакет заработной платы. Примеры пособий в натуральной форме могут включать служебные автомобили и частное медицинское страхование.

Некоторые из них уже не облагаются налогом: например, взносы, уплачиваемые работодателем в утвержденную вами схему профессионального или личного пенсионного обеспечения. Однако натуральные льготы для служебных автомобилей облагаются налогом .

Ставка BIK, которая обычно охватывает налоговый год в зависимости от того, как вы решите ее платить, основана на выбросах, производимых автомобилем, и их стоимости.

Водители автомобилей компании, которые ездят на электротяге, с апреля 2020 года будут платить абсолютно нулевой налог BIK, что представляет собой еще одно огромное преимущество присоединения к электрической революции!

Нет BIK: как это будет работать?

Казначейство Ее Величества создало две новые таблицы BIK для водителей служебных автомобилей. Одна таблица предназначена для тех, кто водит служебный автомобиль, зарегистрированный после 6 апреля 2020 года, а другой — для тех, кто управляет служебным автомобилем, зарегистрированным до 6 апреля 2020 года.

Казначейство сообщает, что для автомобилей, впервые зарегистрированных с 6 апреля 2020 года, ставки налога на большинство служебных автомобилей будут снижены на два процентных пункта. Это означает, что для чисто электромобиля с нулевыми выбросами выхлопных газов водители служебных автомобилей будут облагаться налогом по ставке 0%: налог на BIK не взимается.

Нулевая процентная ставка также применяется к водителям служебных автомобилей на электромобилях, зарегистрированных до 6 апреля 2020 года, которые уже получали пониженную ставку в размере 2% на 2020/21 год.

Экспрессия BIK при раке — Резюме

АНДНО

Поле
Все название гена Класс белка Uniprot ключевое слово Хромосома Внешний идентификатор Оценка надежности ткань (IHC) Оценка надежности мозг мыши Оценка надежности клеток (ICC) Белковый массив (PA) Вестерн-блоттинг (WB) Иммуногистохимия (IHC) Иммуноцитохимия (ICC) Местоположение секретома Субклеточная аннотация (ICC) Субклеточная линия (ICC) Фаза пика субклеточного клеточного цикла Экспрессия ткани (IHC) Категория ткани (РНК) Категория типа клеток (РНК) Категория линии клеток (РНК) Категория рака (РНК) Категория области мозга (РНК) Категория клеток крови (РНК) Категория клеток крови (РНК) Категория мозга мыши (РНК) Категория мозга свиньи (РНК) Прогностический рак Метаболический путьСводка доказательств Доказательства UniProt Нет доказательствProt Доказательства HPA Доказательства MSС антителами Имеются данные о белках Сортировать по

Класс
, антигенные белки группы крови, гены, связанные с раком, гены-кандидаты, гены сердечно-сосудистых заболеваний, маркеры CD, белки, связанные с циклом лимонной кислоты, гены, связанные с заболеваниями, ферменты, одобренные FDA лекарственные мишени, рецепторы, сопряженные с G-белками, сопоставленные с neXtProt, сопоставленные с UniProt, SWISS-PROT, ядерные рецепторы, белки, защищающие плазму, прогнозируемые белки, секретируемые через мембрану, белки, секретируемые через плазму, прогнозируемые белки, секретирующие лекарственные средства. Белки Рибосомные белки Белки, родственные РНК-полимеразе Факторы транскрипции Транспортеры Ионные каналы, управляемые напряжением

Подкласс

Класс
Биологический процесс Молекулярная функция Болезнь

Ключевое слово

Хромосома
12345678

1213141516171819202122MTUnmappedXY

Надежность
ПовышеннаяПоддерживается УтвержденоНеопределено

Надежность
Поддерживается Одобрено

Надежность
ПовышеннаяПоддерживается УтвержденоНеопределено

Проверка
Поддерживается УтвержденоНеопределено

Проверка
Enhanced — CaptureEnhanced — GeneticEnhanced — IndependentEnhanced — OrthogonalEnhanced — РекомбинантнаяПоддерживаемаяПодтвержденнаяНеопределенная

Проверка
Enhanced — IndependentEnhanced — OrthogonalSupportedApprovedUncertain

Проверка
Enhanced — GeneticEnhanced — IndependentEnhanced — РекомбинантнаяПоддерживается УтвержденоНеопределено

Аннотация
Внутриклеточно и мембранно, секретно — неизвестное местоположение, секретируется в головном мозге, секретируется в женской репродуктивной системе, секретируется в мужской репродуктивной системе, секретируется в других тканях, секретируется в кровь, выделяется в пищеварительную систему, секретируется во внеклеточный матрикс

Расположение
актина filamentsAggresomeCell JunctionsCentriolar satelliteCentrosomeCleavage furrowCytokinetic bridgeCytoplasmic bodiesCytosolEndoplasmic reticulumEndosomesFocal адгезия sitesGolgi apparatusIntermediate filamentsKinetochoreLipid dropletsLysosomesMicrotubule endsMicrotubulesMidbodyMidbody ringMitochondriaMitotic chromosomeMitotic spindleNuclear bodiesNuclear membraneNuclear specklesNucleoliNucleoli фибриллярный centerNucleoli rimNucleoplasmPeroxisomesPlasma membraneRods & RingsVesicles

Поиски
УлучшеноПоддерживается УтвержденоНеопределенностьВариация интенсивностиПространственная вариацияКорреляция интенсивности клеточного циклаПространственная корреляция клеточного циклаБиологический клеточный циклЗависимые от клеточного цикла пользовательские данныеЗависимый от клеточного цикла белокНезависимый от клеточного цикла белокЗависимый от клеточного цикла транскриптСтранскрипт, не зависящий от клеточного циклаМультилокализацияЛокализация 1Локализация 2Локализация 3Локализация 4Местоположение

Расположение
AnyActin filamentsAggresomeCell JunctionsCentriolar satelliteCentrosomeCleavage furrowCytokinetic bridgeCytoplasmic bodiesCytosolEndoplasmic reticulumEndosomesFocal адгезия sitesGolgi apparatusIntermediate filamentsKinetochoreLipid dropletsLysosomesMicrotubule endsMicrotubulesMidbodyMidbody ringMitochondriaMitotic chromosomeMitotic spindleNuclear bodiesNuclear membraneNuclear specklesNucleoliNucleoli фибриллярный centerNucleoli rimNucleoplasmPeroxisomesPlasma membraneRods & RingsVesicles

Клеточная линия
анйа-431A549AF22ASC TERT1BJCACO-2EFO-21FHDF / TERT166GAMGHaCaTHAP1HBEC3-KTHBF TERT88HDLM-2HEK 293HELHeLaHep G2HTCEpiHTEC / SVTERT24-BHTERT-HME1HTERT-RPE1HUVEC TERT2JURKATK-562LHCN-M2MCF7NB-4OE19PC-3REHRH-30RPTEC TERT1RT4SH-SY5YSiHaSK-MEL-30SuSaTHP-1U-2 ОСУ-251 МГ

Тип
ProteinRna

Фаза
G1SG2M

Ткань
AnyAdipose tissueAdrenal glandAppendixBone marrowBreastBronchusCartilageCaudateCerebellumCerebral cortexCervix, uterineChoroid plexusColonDorsal rapheDuodenumEndometriumEpididymisEsophagusEyeFallopian tubeGallbladderHairHeart muscleHippocampusHypothalamusKidneyLactating breastLiverLungLymph nodeNasopharynxOral mucosaOvaryPancreasParathyroid glandPituitary glandPlacentaProstateRectumRetinaSalivary glandSeminal vesicleSkeletal muscleSkinSmall intestineSmooth muscleSoft tissueSole из footSpleenStomachSubstantia nigraTestisThymusThyroid glandTonsilUrinary bladderVagina

Тип ячейки

Выражение
Не обнаружено Низкое Среднее Высокое

Ткань
AnyAdipose tissueAdrenal glandBloodBone marrowBrainBreastCervix, uterineDuctus deferensEndometriumEpididymisEsophagusFallopian tubeGallbladderHeart muscleIntestineKidneyLiverLungLymphoid tissueOvaryPancreasParathyroid glandPituitary glandPlacentaProstateRetinaSalivary glandSeminal vesicleSkeletal muscleSkinSmooth muscleStomachTestisThyroid glandTongueUrinary bladderVagina

Категория
Обогащенная ткань Обогащенная группа Улучшенная ткань Низкая тканевая специфичность Не обнаружено Обнаружено у всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Тип клетки
AnyAlveolar клетки типа 1Alveolar клетки типа 2B-cellsBasal железистой cellsBasal keratinocytesBipolar cellsCardiomyocytesCholangiocytesCiliated cellsClub cellsCollecting канал cellsCone фоторецептор cellsCytotrophoblastsDistal трубчатой ​​cellsDuctal cellsEarly spermatidsEndothelial cellsEnterocytesErythroid cellsExocrine железистой cellsExtravillous trophoblastsFibroblastsGlandular cellsGranulocytesHepatocytesHofbauer cellsHorizontal cellsIntestinal эндокринного cellsIto cellsKupffer cellsLate spermatidsLeydig cellsMacrophagesMelanocytesMonocytesMucus-секретирующее cellsMuller глии cellsPancreatic эндокринных cellsPaneth cellsPeritubular cellsProximal трубчатых клетки: стержневые фоторецепторные клетки, клетки сертоли, гладкомышечные клетки, сперматоциты, сперматогонии, супрабазальные кератиноциты, синцитиотрофобласты, Т-клетки, недифференцированные клетки, уротелиальные клетки,

.

Категория
Тип клеток обогащенный Группа обогащенный Тип клетки улучшенный Низкая специфичность типа клеток Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Клеточная линия
анйа-431A549AF22AN3-CAASC diffASC TERT1BEWOBJBJ hTERT + BJ hTERT + SV40 большой Т + BJ hTERT + SV40 большой Т + RasG12VCACO-2CAPAN-2DaudiEFO-21FHDF / TERT166GAMGHaCaTHAP1HBEC3-KTHBF TERT88HDLM-2HEK 293HELHeLaHep G2HHSteCHL-60HMC-1HSkMCHTCEpiHTEC / SVTERT24-BHTERT-HME1HTERT- RPE1HUVEC TERT2JURKATK-562Karpas-707LHCN-M2MCF7MOLT-4NB-4NTERA-2OE19PC-3REHRH-30RPMI-8226RPTEC TERT1RT4SCLC-21HSH-3-SY5YSiHaSK-25-MGU-1 MGU-138-MGU-217-MGU-217-MGU-217-MGUSK-25-MGU-21-MGU-2B-MU-217-MGU-217-MGU-217-MGU-217 / 70U-266 / 84U-698U-87 MGU-937WM-115

Категория
Клеточная линия обогащена Группа обогащена Клеточная линия улучшена Низкая специфичность клеточной линии Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночных Наибольшая экспрессия

Рак
любой

Категория
Обогащенный рак Обогащенный группойРак усиленный Низкая специфичность рака Не обнаружено Обнаружено у всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Область мозга
Любая Амигдала Базальные ганглии Мозжечок Кора головного мозга Формирование гиппокампа Гипоталамус Средний мозг Обонятельная область Мосты и продолговатый мозг Таламус

Категория
Обогащенная по региону Обогащенная по группе Улучшенная по региону Низкая специфичность по региону Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Тип клеток
AnyBasophilClassical monocyteEosinophilGdT-cellIntermediate monocyteMAIT T-cellMemory B-cellMemory CD4 T-cellMemory CD8 T-cellMyeloid DCNaive B-cellNaive CD4 T-cellNaive CD8 T-cellNeutrophilas DC-monacyteonNeutrophilas DC-monacyteon000

Категория
Тип клеток обогащенный Группа обогащенный Тип клетки улучшенный Низкая специфичность типа клеток Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Клеточная линия
AnyB-клетки Дендритные клетки Гранулоциты Моноциты NK-клетки Т-клетки

Категория
Линия обогащенная Группа обогащенная Линия расширенная Низкая специфичность линии Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в одиночной Наивысшая экспрессия

Область мозга
AnyAmygdalaБазальные ганглии мозжечокКора большого мозга мозолистое тело Формирование гиппокампа Гипоталамус Средний мозг Обонятельная область Гипофиз Мосты и продолговатый мозг РетинаТаламус

Категория
Обогащенная по региону Обогащенная по группе Улучшенная по региону Низкая специфичность по региону Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Область головного мозга
AnyAmygdalaБазальные ганглии мозжечкаКора большого мозга мозолистое тело Формирование гиппокампа Гипоталамус Средний мозг Обонятельная область Гипофиз Мосты и продолговатый мозг Ретина Спинной мозг Таламус

Категория
Обогащенная по региону Обогащенная по группе Улучшенная по региону Низкая специфичность по региону Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Рак
Рак грудиРак шейки маткиКолоректальный ракКолоректальный ракРак эндометрияГлиомаРак головы и шеиРак печениРак легкихРак легкихМеланомаРак яичниковРак поджелудочной железыРак предстательной железыРак почкиРак почкиРак почкиРак желудкаРак тестаРак щитовидной железыУротелиальный рак

Рак рака

Прогноз
Благоприятный Неблагоприятный

Путь
Гидролиз ацил-КоА Метаболизм ацилглицеридов Аланин; метаболизм аспартата и глутамата, метаболизм аминосахаров и нуклеотидных сахаров, биосинтез аминоацил-тРНК, метаболизм андрогенов, метаболизм арахидоновой кислоты, метаболизм аргинина и пролина, метаболизм скорбата и альдарата, бета-окисление жирных кислот с разветвленной цепью (митохондриальные) (митохондриальные), бета-окисление бета-ненасыщенных жирных кислот, бета-ненасыщенные 6 диоксидных кислот. диненасыщенные жирные кислоты (n-6) (пероксисомальные) Бета-окисление жирных кислот с четной цепью (митохондриальные) Бета-окисление жирных кислот с четной цепью (пероксисомальные) Бета-окисление жирных кислот с нечетной цепью (митохондрии) Бета-окисление фитановых кислот кислотное (пероксисомальное) Бета-окисление полиненасыщенных жирных кислот (митохондриальные) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот (n-7) (митохондриальное) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот (n-7) (пероксисомальное) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот ( n-9) (митохондрии) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот (n-9) (пероксисомальный) Метаболизм бета-аланина Биосинтез желчных кислот Рециклинг желчных кислот Биоптерин me таболизм, метаболизм биотина, биосинтез группы крови, метаболизм бутаноатов, метаболизм C5-разветвленной двухосновной кислоты, карнитиновый челнок (цитозольный), карнитиновый челнок (эндоплазматический ретикуляр), карнитиновый челнок (митохондриальный), карнитиновый челнок (пероксисомальный), холестериновый, метаболический путь, биосинтез холестерина, метаболизм, биосинтез холестерина, биосинтез холестерина, путь биосинтеза, метаболизм, холестерин, метаболизм Биосинтез гепарансульфата Деградация хондроитинсульфата Синтез CoA Метаболизм цистеина и метионина Метаболизм лекарственных препаратов Метаболизм эстрогенов Метаболизм эфирных липидов Реакции обмена / спроса Активация жирных кислот (цитозольный) Активация жирных кислот (эндоплазматическая ретикулярная цепь) Биосинтез жирной кислоты биосинтез (ненасыщенные) Десатурация жирных кислот (четная цепь) Десатурация жирных кислот (нечетная цепь) Удлинение жирных кислот (четная цепь) Удлинение жирных кислот (нечетная цепь) Окисление жирных кислот Метаболизм жирных кислот Формирование d гидролиз сложных эфиров холестерина, метаболизм фруктозы и маннозы, метаболизм галактозы, биосинтез глюкокортикоидов, метаболизм глутатиона, метаболизм глицеролипидов, метаболизм глицерофосфолипидов, глицин; серин и треонин metabolismGlycolysis / GluconeogenesisGlycosphingolipid биосинтез-ganglio seriesGlycosphingolipid биосинтез-Globo seriesGlycosphingolipid биосинтез-лакто и neolacto seriesGlycosphingolipid metabolismGlycosylphosphatidylinositol (GPI) -anchor biosynthesisHeme degradationHeme synthesisHeparan сульфат degradationHistidine metabolismInositol фосфат metabolismIsolatedKeratan сульфат biosynthesisKeratan сульфат degradationLeukotriene metabolismLinoleate metabolismLipoic кислота metabolismLysine metabolismMetabolism из другой аминокислоты acidsMetabolism ксенобиотиков пути цитохром P450 Разное Метаболизм N-гликанов Метаболизм никотинатов и никотинамидов Метаболизм азота Метаболизм нуклеотидов Метаболизм O-гликанов Метаболизм жирных кислот омега-3 Метаболизм жирных кислот Омега-6 Метаболизм жирных кислот Окислительное фосфорилированиеПантотенат и КоА Биосинтез Пуронинатный путь метаболизм глюконатина тирозин и триптофан biosynthesisPhosphatidylinositol фосфат metabolismPool reactionsPorphyrin metabolismPropanoate metabolismProstaglandin biosynthesisProtein assemblyProtein degradationProtein modificationPurine metabolismPyrimidine metabolismPyruvate metabolismRetinol metabolismRiboflavin metabolismROS detoxificationSerotonin и мелатонина biosynthesisSphingolipid metabolismStarch и сахароза metabolismSteroid metabolismSulfur metabolismTerpenoid магистральная biosynthesisThiamine metabolismTransport reactionsTriacylglycerol synthesisTricarboxylic цикл кислота и глиоксилат / дикарбоксилат metabolismTryptophan metabolismTyrosine metabolismUbiquinone synthesisUrea cycleValine; лейцин; Метаболизм витамина A Метаболизм витамина B12 Метаболизм витамина B2 Метаболизм витамина B6 Метаболизм витамина C Метаболизм витамина D Метаболизм витамина E Метаболизм ксенобиотиков

Категория
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

В атласе
TissueCellPathologyBrainBlood — конц.иммуноанализ Кровь — конц. масс-спектрометрия кровь — горох детектированный

Столбец
Положение гена Оценка, специфичная для ткани Прогностическая надежность (IF) Надежность (IH)

BIK управляет агрессивным фенотипом рака молочной железы через сублетальный апоптоз и предсказывает плохой прогноз ER-положительного рака молочной железы

Препарат лизата из первичных мгновенно замороженных опухолей

Ткань пациента была собрана с одобрения совета по этике исследований (HREB Biomedical, Pro00030345).Первичные опухоли молочной железы, собранные во время операции, подвергали быстрой заморозке и хранили при -80 ° C до дальнейшей обработки. Опухолевые ткани размораживали на льду и измельчали ​​с использованием гомогенизатора Даунса в буфере RIPA с ингибиторами протеаз и фосфатаз. Затем образцы вращали на максимальной скорости при 4 ° C. Супернатант получали и хранили при -80 ° C. Общий белок определяли количественно с помощью набора для количественного определения белка BCA (Thermo Scientific, США). Для вестерн-блоттинга загружали 25 мкг общего белка.

Получение Dox-индуцибельных линий клеток

Dox-индуцибельных линий клеток MCF-7 Tet-On получали путем трансфекции клеток MCF-7 вектором pTet-On (631018, Clontech, США) с последующим отбором с использованием 100 мкг / мл G418 (Invitrogen, США).Был выбран единственный клон, и экспрессия репрессора Tet была подтверждена с помощью вестерн-блоттинга для дальнейших экспериментов. Линия клеток MDA-MB-231 Tet-On была подарком доктора Джудит Хью. Dox-индуцируемые BIK-экспрессирующие линии клеток получали путем клонирования кДНК Wt Bik или BikΔBh4 в вектор pRetroX-Tight-Pur (Clontech, США) между сайтами рестрикции BamH I и EcoR I. Ретровирусные частицы с дефицитом репликации были получены в соответствии с инструкциями производителя и были использованы для трансдукции клеток MCF-7 или MDA-MB-231 для создания стабильных клеточных линий (632104, Clontech, США).Вкратце, клетки GP2-293 временно трансфицировали плазмидами pRetroX-Tight-pur-Bik и pAmpho с использованием липофектамина 2000 для получения ретровирусных частиц. Супернатант, содержащий вирусные частицы, собирали с интервалами 24, 48 и 72 часа, и клетки MCF-7 или MDA-MB-231 Tet-On трансдуцировали этими частицами с интервалами 24, 48 и 72 часа (частицы не объединяли). согласно протоколу производителя. Через 24 часа после трансдукции среду заменяли селекционной средой, содержащей 1 мкг / мл пуромицина (Sigma, США) и 100 мкг / мл G418, в течение 7 дней для удаления нетрансдуцированных клеток.Стабильные колонии, образованные отобранными клетками, объединяли и увеличивали. Докс-титрование для проверки дозозависимого увеличения уровней белка BIK оценивали с помощью вестерн-блоттинга и иммунофлуоресценции. Все манипуляции с клетками до этого момента проводили в сыворотке без Tet (Clontech, США), а затем переключили на обычную сыворотку (Sigma, США) после подтверждения отсутствия протекающей экспрессии BIK с помощью вестерн-блоттинга. Для последующих экспериментов клеточные линии MCF-7 Tet-On BIK и MDA-MB-231 Tet-On BIK выращивали в среде RPMI + 10% FCS после подтверждения отсутствия какой-либо утечки экспрессии.

Вестерн-блоттинг

Лизаты клеток готовили в буфере RIPA (50 мМ Трис-Cl, 150 мМ NaCl, 0,1% SDS, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолата и 1 мМ EDTA, pH 7,5) с добавлением протеазы- (11873580001, Roche, США) и ингибиторов фосфатазы (047001, Roche, США) и концентрацию белка определяли с помощью набора для анализа белков BCA (Thermo Scientific, США). Двадцать микрограммов общего белка разделяли на 12% SDS-PAGE и наносили на нитроцеллюлозные мембраны (Amersham ^TM Protran ^TM Premium 0.2 мкм NC) с последующим зондированием указанными антителами (дополнительная таблица 3) в течение ночи при 4 ° C. На следующий день использовали вторичные антитела, конъюгированные с HRP (1: 5000) (Santa Cruz Biotechnology, BioRad и Cell signaling technologies, США), с последующим обнаружением сигнала с помощью реагента ECL (Amersham ^TM , Великобритания) и рентгеновской пленки ( FUJIFILM, Япония). Регулировки яркости и контрастности изображений были равномерно применены для лучшего визуального представления. Денситометрический анализ изображений сканированных блотов проводили с помощью программы ImageJ (1.51j8) программа.

Иммунофлуоресценция

1,5 × 10 ^{5 клеток} выращивали на стеклянных покровных стеклах (Fisher Scientific, США) на лунку в 24-луночных планшетах и ​​обрабатывали, как указано. Для окрашивания митохондрий живые клетки инкубировали с 150 нМ MitoTracker Red CMXRos (Invitrogen, США) в течение 30 мин перед фиксацией. Клетки фиксировали в 4% PFA (Thermo Scientific, США) при комнатной температуре в течение 15 мин, пермеабилизировали 0,1% Triton X-100 (Sigma, США), приготовленным в 1XPBS, и блокировали в течение 1 ч 4% нормальной козьей или ослиной сывороткой ( Life technologies и Millipore, США соответственно) в зависимости от соответствующего вторичного антитела.Затем клетки инкубировали с соответствующими первичными антителами, промывали четыре раза 1XPBS в течение 5 минут каждый и инкубировали с конъюгированными вторичными антителами 1: 250 Alexa Fluor 488 или 555 (Life Technologies, США) вместе с DAPI (0,25 мкг / мл) (Invitrogen, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). После трехкратной промывки 1XPBS покровные стекла помещали на предметные стекла с использованием антифадного реагента ProLong Gold (Molecular Probes, США). Флуоресцентные изображения получали с помощью микроскопа AxioObserver.Z1 (Carl Zeiss, Германия) при × 40 (NA: 1.4) объектив с использованием программы визуализации ZEN2. Конфокальные изображения получали с помощью микроскопа с вращающимся диском WaveFx (Quorum Technologies, ON, Канада) с использованием масляных иммерсионных объективов × 20 (NA: 0,85) или × 100 (NA: 1,4) с использованием камеры EM-CDD (Hamamatsu, Япония) и программного обеспечения Volocity. (PerkinElmer, США) установка на перевернутом стенде Olympus IX-81 (Olympus, Япония). Регулировки яркости и контрастности изображений были равномерно применены для лучшего визуального представления.

Анализ жизнеспособности клеток

Жизнеспособность клеток измеряли с использованием анализа исключения PI следующим образом.Вкратце, 1,5 × 10 ⁵ клеток высевали на лунку в 12-луночные планшеты с последующей 24 или 48-часовой стимуляцией Dox при указанных концентрациях Dox. STS (2,5 мкМ) использовали в течение 24 часов в качестве положительного контроля для индукции гибели клеток. По окончании обработок клетки собирали трипсинизацией, дважды промывали 1XPBS и ресуспендировали в 1XPBS, содержащем 0,5% BSA и 50 мкг / мл йодида пропидия (Invitrogen, США). Проточно-цитометрический анализ 10000 клеток для трех независимых экспериментов был проведен с использованием проточного цитометра BD-Accuri с использованием программного обеспечения C6.

Анализы клоногенной выживаемости

Тысячи клеток высевали на 6-луночные чашки в трех экземплярах и культивировали в течение 12 дней (8 дней для MDA-MB-231). Свежую питательную среду подавали каждые 3 дня. Колонии окрашивали окрашивающим раствором (0,4% кристаллического фиолетового, 4% PFA в 1XPBS), промывали, сушили в течение ночи и подсчитывали вручную.

Анализы подсчета клеток

1 × 10 ⁵ MCF-7 Tet-On BIK или пустые векторные клетки высевали на лунку в 6-луночных планшетах в дубликатах. На следующий день было начато лечение доксициклином.Каждые 3 дня добавляли свежую среду, содержащую доксициклин соответствующей концентрации. Во время сбора собирали популяцию плавающих клеток, клетки промывали один раз 1XPBS, обрабатывали трипсином и подсчитывали с помощью гемоцитометра в двух экземплярах. Для подсчета клеток использовали клетки, отрицательные по трипановому синему. Было проведено три независимых эксперимента.

Окрашивание TMRE и проточная цитометрия

2 × 10 ⁵ Клетки MDA-MB-231 высевали на лунку в 12-луночные чашки для культивирования клеток и индуцировали 250 нг / мл Dox или обрабатывали 2.5 мкМ стауроспорин в течение 24 часов. В конце обработок собирали среду для выращивания, содержащую плавающие частицы, прилипшие клетки промывали один раз 1 мл 1XPBS и трипсинизировали 50 мкл раствора трипсина в течение 5 мин. Трипсин нейтрализовали 1 мл полной ростовой среды и суспензию клеток центрифугировали при 300 × г в течение 5 мин. Полученные осадки клеток ресуспендировали в 500 мкл ростовой среды и 150 мкл из нее собирали в планшеты с V-образным дном и центрифугировали при 300 × g в течение 5 мин.Супернатант отбрасывали, а осадки клеток ресуспендировали в 200 мкл полной ростовой среды, содержащей 0,1 мкМ раствора этилового эфира тетраметилродамина (TMRE), с последующей инкубацией при 37 ° C в инкубаторе для культур клеток в течение 15 мин. Клетки центрифугировали при 300 × г в течение 5 минут, супернатант отбрасывали и осадок один раз промывали 1XPBS. Конечные осадки клеток ресуспендировали в 250 мкл 1XPBS и пропускали через нейлоновое сито 70 мкм для удаления любых скоплений клеток. Проточно-цитометрический анализ был выполнен на 10000 клеток с использованием проточного цитометра BD-Accuri, по крайней мере, для трех независимых экспериментов.Данные были проанализированы с помощью программы BD-Accuri c6, а репрезентативные гистограммы были подготовлены с помощью программы Flow Jo (версия X).

Активное окрашивание каспазой-3/7 и проточная цитометрия

2,5 × 10 ⁵ Клетки MDA-MB-231 высевали на лунку в 12-луночные планшеты для культивирования клеток и индуцировали 250 нг / мл доксициклина или стауроспорина в течение 24 дней. час Плавающие клетки собирали, прилипшие клетки обрабатывали трипсином (50 мкл), нейтрализовали 1 мл ростовой среды и центрифугировали при 300 × г в течение 5 мин.Полученные осадки клеток ресуспендировали в 0,5 мл ростовой среды и 200 мкл этой клеточной суспензии центрифугировали при 300 × г в течение 5 мин в планшетах с V-образным дном. Супернатант отбрасывали, а осадки клеток ресуспендировали в 250 мкл ростовой среды, содержащей 5 мкМ реагента Cell Event Green (кат. № C10723, Invitrogen, США), в течение 30 мин в инкубаторе для культур клеток. Затем клетки пропускали через нейлоновое сито 70 мкм, чтобы избавиться от комков, и проводили проточно-цитометрический анализ по меньшей мере 10 000 клеток.Данные были проанализированы с помощью программы BD-Accuri c6, а репрезентативные гистограммы были подготовлены с помощью программы Flow Jo (версия X).

Сортировка клеток с активированной флуоресценцией мягких и явных каспаз-положительных клеток

2 × 10 ⁵ Клетки MDA-MB-231 окрашивали реагентом Cell Event Green, как описано в разделе «Активное окрашивание каспазы-3/7 и проточная цитометрия». . Тысячи клеток были отсортированы непосредственно в 6-луночные планшеты, содержащие 2 мл ростовой среды в дубликатах для анализов образования колоний, в то время как 100000 клеток были собраны в смеси 50/50 1XPBS и FCS для вестерн-блоттинга.

Количественное определение фокусов γh3AX и апоптотических ядер

Анализ изображения фокусов на каждое ядро ​​выполняли в MATLAB (MathWorks). Для обнаружения границ ядер использовался подход сегментации по маске на основе Оцу ⁷³ с последующим разделением соприкасающихся ядер посредством водораздела. Неполные ядра (двойные объекты, соприкасающиеся с краями изображения) были удалены, а границы полученных ядер были проверены вручную. Для обнаружения очагов фоновое изображение было вычтено из необработанных изображений γh3AX, как подробно описано ранее ⁷³ , с использованием гаусса шириной 10 пикселей.Пятна локальной интенсивности очагов затем были обнаружены посредством итеративной фильтрации по значимым коэффициентам и преобразованы в двоичную форму. Затем по ядрам и бинарным изображениям фокусов рассчитывали количество фокусов на ядро. Клетки с тремя или менее очагами наблюдались в необработанных клетках и представляли базальные фоновые уровни положительности γh3AX. Для количественной оценки дискретных повреждений ДНК с помощью иммунофлуоресценции γh3AX мы подсчитали% клеток с 4–19 фокусами. Клеток с> 19 очагами не наблюдалось. Для идентификации апоптотических клеток диффузное панъядерное окрашивание γh3AX сегментировали с использованием вышеупомянутого метода обнаружения границ ядер.Результирующие бинарные объекты, соответствующие ядерным объектам, считались апоптотическими. Для каждой группы было проанализировано 19–20 кадров.

Анализ щелочных комет

Анализ комет выполняли, как описано ранее ^11,74 . Анализ проводили в условиях низкой освещенности, чтобы минимизировать индуцированное светом повреждение ДНК. Вкратце, клетки собирали после соответствующей обработки трипсинизацией с последующим центрифугированием (230 × г, при 4 ° C) и ресуспендировали в 1XPBS. Клетки ресуспендировали в 1% агарозе с низкой температурой плавления (LMP) при плотности 50 клеток / мкл; 50 мкл этой агарозы помещали на предметные стекла (предварительно покрытые 1% агарозой LMP) и давали возможность соединиться с покрытой агарозой в течение 30 минут при 4 ° C.Затем залитые агарозой клетки подвергали лизису in situ в буфере для лизиса (2,5 М NaCl, 100 мМ EDTA, 10 мМ основание Trizma, 1% TX-100, pH 10) при 4 ° C в течение 60 мин. Затем ядерную ДНК разматывали с использованием свежеприготовленного щелочного раскручивающего раствора (200 мМ NaOH, 1 мМ ЭДТА, pH 8) в течение 1 часа при 4 ° C. Затем слайды выровняли на одинаковом расстоянии от электродов и проводили электрофорез при 300 мА в течение 30 минут в растворе щелочного электрофореза (200 мМ NaOH, 1 мМ EDTA, pH> 13). Затем слайды дважды промывали dH ₂ O с последующей фиксацией 70% этанолом и сушкой.Электрофорезированная ДНК окрашивалась красителем ДНК RedSafe. Полученные кометы получали с помощью микроскопа AxioObserver.Z1 (Carl Zeiss, Германия) при увеличении × 10. % ДНК в хвосте рассчитывали с помощью программы анализа комет CasPLab (http://casplab.com/download) ⁷⁵ .

трансфекций миРНК

2 × 10 ^{5 клеток} высевали на лунку в 12-луночные планшеты. На следующий день 100 нМ олигонуклеотидов миРНК трансфицировали с использованием липофектамина 2000 в соответствии с инструкциями производителя.Нокдаун Dox-индуцированного Bik осуществляли трансфекцией ранее сообщенной siRNA против Bik за 24 часа с последующей индукцией Dox в течение 24 часов ²⁷ . Подавление CAD было выполнено аналогичным образом. Подробности олигонуклеотидов siRNA, использованных в исследовании, описаны в дополнительной таблице 2.

Измерение уровней ROS и повреждений ДНК

Клетки инкубировали в ростовой среде, содержащей 2,5 мкМ реагента CellRox Green (Invitrogen, США), в течение 30 мин при 37 °. С. Уровни ROS определяли количественно путем измерения средней интенсивности флуоресценции (MFI) в отдельных клетках с использованием проточного цитометрического анализа на проточном цитометре BD-Accuri с использованием программного обеспечения C6.TBHP ( трет, -бутилгидропероксид, 100 мкМ) (458149, Sigma, США) использовали в качестве положительного контроля. 2,5 мМ NAC (N-ацетилцистеин) (A9165, Sigma, USA) использовали в качестве поглотителя ROS в течение 30 минут до обработки TBHP. Повреждение ДНК, зависящее от ROS, измеряли обработкой клеток 50 мкМ H ₂ O ₂ в течение 30 мин в присутствии или в отсутствие ингибитора каспаз z-VAD-fmk (Promega, США) или скавенджера ROS NAC. Повреждение ДНК подтверждали с помощью вестерн-блоттинга с антителом против γh3AX.

Окрашивание CaspACE и проточная цитометрия

2 × 10 ⁵ клеток / лунку высевали в 12-луночные планшеты. Через 24 часа клетки обрабатывали докс или стауроспорином в указанных концентрациях (2,5 мкМ) в течение 24 часов. В конце обработок собирали плавающие клетки с последующей трипсинизацией (50 мкл) для сбора популяции прилипших клеток. Трипсин нейтрализовали с использованием 1 мл ростовой среды. Пробирки, содержащие суспензию клеток, центрифугировали при 300 × г в течение 5 мин при комнатной температуре.Осадки клеток ресуспендировали в 450 мкл ростовой среды и аликвоту 175 мкл переносили в 96-луночные планшеты с V-образным дном с последующим вращением при 300 × г в течение 5 минут при комнатной температуре. Полученные осадки клеток ресуспендировали в 200 мкл ростовой среды, содержащей 10 мкМ реагента CaspAce (# G7461, Promega, США), или просто ростовой среды для неокрашенного контроля и инкубировали в инкубаторе для культур клеток в течение 1 часа. Планшеты с V-образным дном центрифугировали в течение 5 мин при 300 × г и осадок клеток дважды промывали 200 мкл 0.5% BSA, содержащий 1XPBS, с последующим окончательным ресуспендированием в 200 мкл 0,5% BSA, содержащего 1XPBS. Проточную цитометрию проводили на проточном цитометре BD-Accuri на канале FL-1. Для dox-индуцированных клеток по меньшей мере 10 000 клеток, тогда как для клеток, обработанных стауроспорином, было получено 5000 клеток для трех независимых экспериментов. Анализ данных проводился на FlowJo program_V10.

Анализ миграции отдельных клеток

Клетки MCF-7 LTC ​​или MDA-MB-231 LTC высевали с плотностью 3000 клеток / лунку в 8-луночные камеры LabTek со стеклянным дном (# 155409, Thermo Fisher Scientific, США) .На следующий день визуализация живых клеток продолжалась до 24 часов на микроскопе ZEN AxioObserver, оборудованном подогреваемым и увлажненным предметным столиком. Покадровые изображения получали каждые 1 ч с помощью объектива с 10-кратным увеличением и камеры Rolera. Анализ треков одиночных клеток после получения был выполнен вручную на клетках, которые не подверглись клеточному делению, с использованием программы ImageJ. Скорость рассчитывалась делением длины трека в каждый момент времени на затраченное время (часы). Графики розы и стойкость были рассчитаны с использованием программы MATLAB.Стойкость рассчитывалась делением смещения на длину дорожки. Ограниченная и неограниченная классификация была определена на основе аппроксимации кривой среднеквадратичного смещения индивидуального трека альфа со значениями альфа <1, соответствующими ограниченному движению. Из трех независимых экспериментов было проанализировано по меньшей мере 57 и 60 треков в клетках MCF-7 LTC ​​и MDA-MB-231 LTC соответственно.

Анализы коллективной миграции клеток

2,5 × 10 ⁵ Клетки MCF-7 или MDA-MB-231 LTC высевали в 8-луночные камеры LabTek со стеклянным дном (# 155409, Thermo Fisher Scientific, США) для получения конфлюэнта. монослой на следующий день.Клетки обрабатывали 10 мкг / мл митомицина С (# M4287, Sigma, США) в течение 3 часов для блокирования пролиферации клеток. Затем одним быстрым движением наносили горизонтальные царапины с помощью наконечника пипетки на 200 мкл. Клеточный дебрис и митомицин С смывали тремя осторожными промываниями ростовой средой. Впоследствии визуализация живых клеток продолжалась до 15 часов на микроскопе ZEN AxioObserver, оборудованном подогреваемым и увлажненным предметным столиком. Покадровые изображения получали каждые 1 ч с помощью объектива × 10 и камеры Rolera.Для каждого эксперимента были выбраны три различных положения царапины на клеточную линию. Площадь, покрытая клетками, была вычтена из начальной площади, чтобы получить расстояние, пройденное с течением времени, с помощью программы визуализации ZEN pro. Было проведено не менее трех независимых экспериментов.

Образование колоний в мягком агаре

Формирование колоний в мягком агаре проводили, как описано ранее ^11,76 . Вкратце, 2500 клеток ресуспендировали в 0,35% агарозе (Invitrogen, США), смешанной с полной питательной средой, и наслаивали на смесь 1% агарозы: среды для роста.Колониям давали сформироваться в течение 7 недель (6 недель для MDA-MB-231 LTC), а слой агарозы поддерживали гидратированием путем добавления 200 мкл среды для выращивания (RPMI + 10% FCS) каждые 5 дней. Колонии окрашивали 0,005% раствором кристаллического фиолетового (Fisher Science education, США) в течение ночи с последующей визуализацией с помощью сканера EPSON. Колонии мягкого агара, образованные клетками LTC MDA-MB-231, было трудно визуализировать на сканере EPSON. Поэтому репрезентативные изображения были получены с помощью микроскопа ZEN AxioObserver с объективом × 10.

Анализ образования атмосферы

Планшеты с низким прикреплением клеток были приготовлены путем инкубации 24-луночных планшетов с 0,5 мл раствора поли-НЕМА (Sigma, США) с концентрацией 20 мг / мл, приготовленного в 95% EtOH, с последующим испарением в течение ночи в культуре клеток. капот. Единичные клетки EV-LTC-250, BIK-LTC-0 и BIK-LTC-250 повторно помещали в 24-луночные планшеты, покрытые поли-HEMA, при концентрации 5 клеток / мм. ³ суспензия (объем суспензии 500 мкл на лунку) в DMEM / F12 (1: 1) с добавлением 20 нг / мл FGF-2 (Sigma, США), 20 нг / мл EGF (PeproTech), 2% B27 без витамина A (GIBCO, США) и 1 × ITS (инсулин -трансферрин-селен, GIBCO).Для предотвращения агрегации клеток использовали 0,5% метилцеллюлозу (Sigma, США), что позволяло расти маммосферам в различных z-плоскостях среды. Каждые 3 дня в каждую лунку добавляли 500 мкл свежей среды, не удаляя старую среду. Матмосферы получали в светлом поле (микроскоп Zeiss AxioObserver.Z1) на 4, 8 и 12 дни (на 28 день для MDA-MB-231 LTC). Эффективность образования атмосферы определяли на 12-й день (28-й день для MDA-MB-231 LTC) и рассчитывали, исходя из количества сфер на лунку, деленного на количество высеянных клеток, умноженного на 100 (для преобразования в процент).

Сегментация изображений светлого поля Mammospheres

Анализ изображений был выполнен в MATLAB (MathWorks). Чтобы сегментировать маммосферы в изображениях светлого поля и определять их области, бинарная маска градиентного изображения маммосферы (ей) была рассчитана на основе порогового значения, определяемого краем и оператором Собеля. Линейные промежутки в градиентных изображениях были расширены с использованием линейных элементов структурирования, заполнены внутренние отверстия, и полученная граница атмосферы сглажена путем двойного размывания изображения с помощью структурирующего элемента ромба.Ручная проверка каждого изображения была сделана, чтобы гарантировать правильное определение границ.

Обработка антиэстрогеном

Тамоксифен (T5648, Sigma) растворяли в ДМСО в исходной концентрации 1 мМ. Эксперимент проводился в условиях низкой освещенности, чтобы минимизировать изменения хиральности тамоксифена. Клетки MCF-7 выращивали в среде RPMI + 10% FCS без фенолового красного и обрабатывали тамоксифеном в указанных концентрациях в течение 72 часов. Лизаты клеток готовили в буфере RIPA (50 мМ Tris-cl, 150 мМ NaCl, 0.1% SDS, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолат и 1 мМ EDTA, pH 7,5) с добавлением ингибиторов протеазы (11873580001, Roche, США) и ингибиторов фосфатазы (047001, Roche, США), и экспрессия BIK была подтверждена с использованием вестерн-блоттинг.

Наборы данных микрочипов генов

ER-положительные наборы данных, обработанные тамоксифеном, включают GSE17705 ⁴³ и GSE2990 ⁴² . Для этих наборов данных были загружены необработанные данные, скорректированы фоновые значения и нормализованы медианы с использованием процедуры Robust Multi-array Average (RMA) в MATLAB Bioinformatics Toolbox.Исходные нормализованные наборы данных TNBC были загружены и включают GSE31519 ⁵⁰ , GSE33926 ^{44 ​​} и GSE65194 ^45,46,47 . Чтобы разделить пациентов на группы BIK -low и BIK -high, оптимальная точка отсечения была определена для каждого набора данных с помощью анализа кривой характеристики оператора приемника (ROC) с рецидивом заболевания в качестве классификационной переменной в соответствии с подходом, описанным в ⁷⁷ с помощью MedCalc версии 15 (Остенде, Бельгия). Выживаемость без болезней рассчитывалась с помощью анализа Каплана-Мейера (КМ).Значительные различия между кривыми КМ измеряли с помощью лог-рангового теста.

Анализ тканей с помощью микроматрицы

Тканевые микроматрицы (ТМА) получали, как описано ранее ( n = 152) ¹⁵ . Информация о пациентах была собрана с одобрения совета по этике исследований (HREB Biomedical). ER-положительные пациенты были идентифицированы иммуногистохимическим анализом биоптатов опухоли. Иммуноокрашивание ТМА проводили с использованием антител против BIK (Santa Cruz Biotechnology, Inc.СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). Оценка иммуноокрашенного ТМА проводилась слепым методом в соответствии с обучением и рекомендациями патолога молочной железы исследования. Оптимальная точка отсечения оценок была определена путем анализа кривой ROC, где рецидив заболевания использовался в качестве классификационной переменной. Кривые безрецидивной и общей выживаемости были построены с использованием MedCalc версии 15 (Остенде, Бельгия). Значительные различия между кривыми КМ измеряли с помощью лог-рангового теста.

Статистический анализ

Все столбчатые и линейные графики были подготовлены с использованием GraphPad Prism версии 7.03 (GraphPad Software, США, www.graphpad.com). Статистическая значимость между двумя группами определялась с использованием двустороннего непарного теста t , в котором альфа была установлена ​​на 0,05. Для определения статистической значимости более чем двух групп данных использовался односторонний дисперсионный анализ (ANOVA). Когда ANOVA был значительным, различия между двумя выбранными группами анализировали апостериорным тестом Сидака и получали значения p . После дисперсионного анализа, в котором каждое среднее значение сравнивалось с любым другим средним, значения p были рассчитаны с использованием апостериорного критерия Тьюки, тогда как, когда каждое среднее значение сравнивалось со средним контрольным, значения p были рассчитаны с использованием поста Даннета. -hoc test.Наклоны линий для коллективной миграции клеток LTC рассчитывали с помощью анализа линейной регрессии, а статистическую значимость определяли с использованием GraphPad Prism версии 7.03 (GraphPad Software, США, www.graphpad.com). (* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001). Если среди проанализированных групп не было обнаружено статистической значимости, звездочки (*) не отображались.

Руководство по налогообложению автомобилей компании 2020/2021: все, что вам нужно знать

Автомобили компании уже давно используются в качестве способа вознаграждения и удержания сотрудников в качестве дополнительного бонуса сверх стандартной зарплаты.К сожалению, Правительство или, точнее, Казначейство Его Величества знает об этом виде стимула и взимает налог с служебных автомобилей.

Этот налог на служебные автомобили называется налогом на натуральную выплату (BIK), поскольку автомобили рассматриваются как дополнительная налогооблагаемая льгота, выходящая за рамки вашей стандартной заработной платы с учетом подоходного налога и взносов в национальное страхование. Независимо от того, участвуете ли вы в традиционной схеме служебных автомобилей или подарили служебные автомобили, важно знать, сколько налогов вы можете рассчитывать на уплату, особенно если вы выбираете служебный автомобиль.

Налог BIK — один из многих потоков доходов, используемых Налоговой и таможенной службой Ее Величества (HMRC) для пополнения государственной казны, и в результате он подлежит ежегодным изменениям. Неизбежно это приводит к увеличению суммы налогообложения, взимаемой с служебных автомобилей в целом.

Изменения в налоге на автомобили компании 2020/2021

Помните старую рекламу HMRC, в которой говорилось, что «налог не обязательно должен облагаться налогом»? Кто бы ни придумал этот лозунг, очевидно, не имел ни малейшего представления о том, что произойдет с налоговой системой корпоративного автомобиля Benefit-in-Kind (BiK) в 2020/21 финансовом году, который начался 6 апреля.

Эти изменения, объявленные в июле 2019 года, являются ответом на новые европейские WLTP (Всемирная согласованная процедура испытаний легких транспортных средств) тесты на выбросы и экономичность, в которых новые автомобили оцениваются с использованием более строгих и более реалистичных критериев, чем использованные старые тесты NEDC.

Одним из результатов этих новых испытаний является то, что автомобиль будет иметь более высокие выбросы CO2 (двуокиси углерода) на бумаге, если он будет оцениваться в соответствии с правилами WLTP, а не NEDC — даже если это тот же автомобиль, поэтому выбросы на дороге будут ниже. идентичный.

Поскольку ставки налога на подоходный налог на служебные автомобили основаны на том, сколько углекислого газа (CO2) выделяется автомобилем, это приведет к более высокому налогообложению для водителей служебных автомобилей с автомобилями, облагаемыми WLTP.

Таким образом, Казначейство изменяет свои ставки BiK, чтобы учесть более высокие выбросы CO2 на бумаге, полученные в результате новых испытаний на выбросы; это попытка не допустить несправедливого наказания водителей служебных автомобилей, протестированных в соответствии с режимом WLTP. Это делается путем разделения служебных автомобилей на две группы и использования двух новых отдельных наборов процентных значений натуральной выгоды.Полученная в результате система может быть более справедливой, чем если бы Казначейство оставило вещи без изменений, но оно создало несколько сложную, мягко говоря, структуру.

Чтобы показать, насколько сложна эта система, дизельный автомобиль, впервые зарегистрированный с 6 апреля 2020 года, получил бы ставку BiK в размере 33 процентов в 2020/21 финансовом году, потому что он не соответствует требованиям RDE и привлекает четыре процента доплата дизеля. Новые правила, однако, снижают его BiK на два процента в 2020/21 финансовом году, потому что он был оценен в соответствии с критериями WLTP, хотя это сокращение исчезнет в течение следующих двух лет.

Также стоит отметить, что выбросы CO2 от автомобилей, зарегистрированных с 6 апреля 2020 года, вероятно, будут примерно на 20% выше, чем выбросы от автомобилей, прошедших оценку NEDC. Хотя это зависит от модели к модели.

Налоговые диапазоны автомобилей компании 2020/2021

автомобилей NEDC, впервые зарегистрированных до 6 апреля 2020 года

Для автомобилей, которые были зарегистрированы до 6 апреля 2020 года, при расчете получаемой льготы используются данные, сопоставленные с NEDC, за 2020/21 финансовый год. Добрые налоговые ставки.

Таблицы для этих автомобилей отличаются от тех, которые Министерство финансов ранее прогнозировало, что оно будет использовать на 2020/21 год, с измененными диапазонами выбросов CO2 и различными процентными ставками во многих областях.

Предназначен для 20-процентного налогоплательщика и автомобиля стоимостью 30 000 фунтов стерлингов; Для автомобилей второй группы предполагается 20-процентное увеличение выбросов CO2 благодаря WLTP

Автомобили, впервые зарегистрированные до 6 апреля 2020 года	Финансовый год
	2020/21	2021/22	2022/23
Бензин, первая регистрация до 6 апреля 2020 г., CO2 = 114 г / км	27%	27%	27%
Ежегодные налоговые обязательства	1620 фунтов стерлингов	1620 фунтов стерлингов	41620 фунтов стерлингов
Дизель, не соответствует требованиям RDE2, впервые зарегистрирован до 6 апреля 2020 г., CO2 = 100 г / км	29%	29%	29%
Годовые налоговые обязательства	1740 фунтов стерлингов	1740 фунтов стерлингов	1740 фунтов стерлингов
PHEV, дальность полета 29 миль, CO2 = 37 г / км, первая регистрация до 6 апреля 2020 года	14%	14%	14%
Ежегодная налоговая ответственность s	840 фунтов стерлингов	840 фунтов стерлингов	840 фунтов стерлингов
EV, первая регистрация до 6 апреля 2020 года	0%	1%	2%
Годовые налоговые обязательства	437 фунтов стерлингов 60 фунтов стерлингов	фунтов стерлингов 120 фунтов стерлингов

автомобилей WLTP, впервые зарегистрированных с 6 апреля 2020 года

Для автомобилей, впервые зарегистрированных после 6 апреля 2020 года, новые значения выбросов углерода WLTP будут использоваться для определения ставок BiK.

Однако, чтобы отразить тот факт, что нормы выбросов CO2 WLTP обычно выше, чем нормы NEDC для точно такой же модели автомобиля, Минфин сокращает ставки BiK на два процентных пункта от ставок, используемых для старых автомобилей, оцененных NEDC.

Однако стоит отметить, что это сокращение упадет до одного процента в 2021/22 финансовом году и полностью исчезнет в следующем году. Это означает, что даже если ваш автомобиль прошел испытания по WLTP и, следовательно, имеет более высокие выбросы CO2 на бумаге, чем эквивалентный автомобиль, прошедший испытания NEDC, с апреля 2022 года его показатель BiK не будет снижен.

Автомобили, впервые зарегистрированные с 6 апреля 2020 г.	Финансовый год
	2020/21	2021/22	2022/23
Бензин, впервые зарегистрированный с 6 апреля 2020 г., CO2 = 137 г / км	30%	31%	32%
Годовые налоговые обязательства	1,800 фунтов стерлингов	1860 фунтов стерлингов	1,920 фунтов стерлингов
Дизель, не соответствует требованиям RDE2, с 6 апреля 2020 г., первая регистрация CO2 = 120 г / км	31%	32%	33%
Ежегодные налоговые обязательства	1860 фунтов стерлингов	1920 фунтов стерлингов	1980 фунтов стерлингов
PHEV, диапазон EV на 29 миль 44 г / км, первая регистрация после 6 апреля 2020 г.	12%	13%	14%
Годовые налоговые обязательства	720 фунтов стерлингов	780 фунтов стерлингов	840 фунтов стерлингов
EV, первое повторное Зарегистрировано с 6 апреля 2020 г. Чистые электромобили не будут облагаться никаким налогом на натуральную льготу в 2020/21 году — независимо от того, когда автомобиль был зарегистрирован.В 2021/22 году они привлекут ставку BiK всего на один процент, а в 2022/23 году — всего на два процента. Это означает, что водители служебных автомобилей, выбравшие электромобиль, сэкономят тысячи по сравнению с водителем сравнимого дизеля. А как насчет доплаты за дизельное топливо? Автомобили с дизельным двигателем, не отвечающие элементу RDE2 испытаний WLTP, по-прежнему будут подвергаться ставке BiK на четыре процента выше, чем автомобили с бензиновым двигателем. Тем не менее, ряд производителей, включая Jaguar Land Rover, BMW, Mercedes и Vauxhall, производят автомобили, соответствующие требованиям RDE2, поэтому по-прежнему можно воспользоваться сниженными налоговыми ставками, которые взимаются с дизелей благодаря низким выбросам CO2 по сравнению с их бензиновыми аналогами. . Итак, пришло время выбрать полностью электрический или подключаемый гибридный служебный автомобиль? Да, если можете. У электромобилей самые привлекательные ставки BiK, но подключаемые гибриды (PHEV) также облагаются меньшими налогами. «Типичный» PHEV, например, может проехать около 25 миль только от батареи и будет иметь выбросы CO2 49 г / км; Такой автомобиль привлек бы ставку BiK всего в 12-14%. Типичный бензин может выделять 130 г / км CO2, привлекая рейтинг BiK на уровне 29-31%, в то время как типичное дизельное топливо, не соответствующее требованиям RDE2, может выделять 105 г / км, что делает его владельца ответственным за 28-30%. БиК ставка. А как насчет дорожного налога? Разве это не растет? Во многом так же, как и в случае налога на служебные автомобили, измерения WLTP заменяют показания NEDC для дорожного налога (акцизный сбор на транспортные средства), полученные с этого года, но с 1 апреля, а не с 6 апреля. Но хотя ставки BiK применяются каждый год для водителей служебных автомобилей, только первый год дорожного налога связан с выбросами CO2 с фиксированной ставкой на последующие годы. Из-за этого, а также из-за того, что расходы на дорожный налог в первый год обычно включаются в стоимость нового автомобиля в пути, любые повышенные сборы, связанные с использованием WLTP для ставок дорожного налога, не так сильно ударили по покупателям в кошельке. . Если, например, автомобиль с выбросами CO2 в соответствии с NEDC 115 г / км имеет выбросы CO2 138 г / км благодаря WLTP (увеличение на 20%), покупатели должны будут внести дополнительный разовый платеж в размере 40 фунтов стерлингов по сравнению с когда использовались цифры NEDC. Однако следует отметить, что некоторые прыжки больше. Автомобиль с выбросами CO2 в соответствии с NEDC 150 г / км может увеличиться до 180 г / км согласно WLTP, что приведет к увеличению дорожного налога за первый год с 215 фунтов стерлингов до 870 фунтов стерлингов. Справочник по налоговым условиям на служебные автомобили BiK (натуральная выгода): налог на привилегии, не связанные с заработной платой, такие как служебный автомобиль, предоставляемый работодателем сотруднику. CO2 (диоксид углерода): загрязнитель, производимый автомобилями с бензиновым или дизельным двигателем, измеряется в граммах на километр (г / км) и используется для установления налога. Ставка BiK: облагаемый налогом процент от стоимости служебного автомобиля. Чем больше CO2 выбрасывает автомобиль, тем выше уровень BiK. NEDC (Новый европейский ездовой цикл): старая процедура испытаний для измерения выбросов автомобилей и экономии топлива. WLTP (Всемирная согласованная процедура испытаний легковых автомобилей): новая процедура испытаний на экономичность и выбросы; все новые автомобили, зарегистрированные с сентября 2019 года, проходят оценку WLTP. RDE2 (Real Driving Emissions, Step 2): Испытания на выбросы RDE проводятся на дороге в качестве элемента, сопровождающего лабораторные оценки WLTP. RDE2 устанавливает более строгие пределы выбросов, чем предыдущий стандарт RDE1. Доплата за дизельное топливо: автомобилей компании с дизельным двигателем, не соответствующих элементу RDE2 испытаний WLTP, автоматически получают четырехпроцентное увеличение BiK по сравнению с их эквивалентами с бензиновым двигателем. Полные налоговые диапазоны для служебных автомобилей 2020/21 — автомобили, впервые зарегистрированные с 6 апреля 2020 года % НЕТ 904 35 Выбросы CO2 (г / км) Электрический запас хода (мили) Соответствующий процент 0 N / A 0% 1-50 > 130 0% 1-50 70-129 3% 1-50 40-69 6% 1-50 30-39 10% 1-50 менее 30 12% 51-54 N / A 55-59 НЕТ 14% 60-64 НЕТ 15% 65-69 НЕТ 16 70-74 НЕТ 17% 75-79 90 432 НЕТ 18% 80-84 НЕТ 19% 85-89 НЕТ 20% 90-94 НЕТ 21% 95-99 НЕТ 22% 100-104 НЕТ 23% 105-109 A 24% 110-114 НЕТ 25% 115-119 НЕТ 26% 120-124 27% 125-129 НЕТ 28% 130-134 НЕТ 29% 135-139 НЕТ 30432 % 140-144 НЕТ 31% 145-149 НЕТ 32% 150-154 НЕТ 33% 155-159 НЕТ 34% 160-164 НЕТ 35% 165-169 Н / Д 36% 170+ Н / Д 37% Полные налоговые диапазоны для корпоративных автомобилей 2020/21 — автомобили, впервые зарегистрированные до 6 апреля 2020 г. 904 % 9 0437 51-54 -69 155 -159 Выбросы CO2 (г / км) Электрический запас хода (миль) Соответствующий процент 0 Н / Д 0% 1-50 > 130 1-50 70-129 5% 1-50 40-69 8% 1-50 30-39 12% 1-50 менее 30 14% НЕТ 15% 55-59 НЕТ 16% 60-64 НЕТ 17% НЕТ 18% 70-74 НЕТ 19% 75-79 НЕТ 20% 80-74 НЕТ 21% 85-89 НЕТ 22% 90-94 НЕТ 23% 95-99 НЕТ 24% 100-104 НЕТ 25% 105-109 НЕТ 26% 110-114 A 27% 115-119 НЕТ 28% 120-124 НЕТ 29% 125-129 НЕТ 30% 130-134 НЕТ 31% 135-139 НЕТ 4 3235% 140-144 НЕТ 33% 145-149 НЕТ 34% 150-154 НЕТ 35% Нет 36% 160+ Нет 37% Узнайте о налоговых льготах для пикапов с двойной кабиной здесь… Arco Timmermans обсуждает средние школы и BIK на голландском радио BNR Lobbypanel Группа независимых экспертов RED посоветовала правительству Нидерландов закрыть все (средние) школы. Правительству необходимо найти сложный баланс между ограничением числа инфекций и социальными последствиями закрытия школ. В результате первой изоляции многие студенты пострадали от социальной изоляции и депрессии. «Существует множество возможных решений между нынешней ситуацией и закрытием школ», — говорит Арко Тиммерманс, по специальному назначению профессор по связям с общественностью Института государственного управления Лейденского университета.Сдерживать риск заражения можно путем полного закрытия всех школ, но пока неизвестно, хочет ли это правительство. Также это можно сделать путем поэтапного выполнения мероприятий. «Я считаю, что можно найти компромисс между полным закрытием школ и сохранением их открытия», — говорит Тиммерманс. «Для университетов и других учебных заведений может быть иначе. Я сам смог провести два урока по связям с общественностью в аудитории, где легко поддерживать социальное дистанцирование.Однако мы не знаем, чем занимаются студенты, когда они дома, в своих студенческих домах ». БИК Правительство стимулирует компании делать инвестиции с помощью новой инвестиционной скидки, Baangerelateerde Investeringskorting (BIK), инвестиционной скидки, связанной с работой. Эта временная договоренность позволяет компаниям продолжать инвестировать в эти смутные времена. Компании могут использовать инвестиционную скидку для снижения налога на заработную плату. Исследование Нидерландского бюро анализа экономической политики (CPB) показывает, что BIK приводит к ограниченному объему инвестиций, но что BIK действительно имеет больший эффект, чем снижение налога на прибыль.«Отчет КПБ был своевременным, — говорит Тиммерманс. «Правительство занято обсуждением дополнительных пакетов поддержки. Лица, определяющие политику, теперь могут разрабатывать более эффективную политику, используя новые идеи. Однако я не думаю, что BIK окажет большое положительное влияние на инвестиции. Я думаю, что для большинства компаний это больше связано с перспективами на будущее. Слушайте весь отрывок (на голландском) на сайте BNR Radio. Проф. Др. Преподавание Арко Тиммерманса для Института государственного управления посвящено государственной политике в Нидерландах и ЕС, представлению интересов и связям с общественностью, например, в мастер-треке по связям с общественностью.Исследования Арко Тиммерманса посвящены динамике общественной и политической повестки дня. Он анализирует, как группы интересов играют в игру по получению или избеганию общественного и политического внимания, как они формируют лоббистские коалиции и как они находят доступ к площадкам для влияния. Эта учебная и исследовательская работа также направлена ​​на продвижение диалога между исследованием и практикой посредством гостевых лекций, мастер-классов и комментирования новостей. Рассчитать налог на служебные автомобили сотрудников Как работодатель, если вы предоставляете служебные автомобили или топливо для личного пользования своих сотрудников, вам необходимо определить налогооблагаемую стоимость, чтобы вы могли сообщить об этом в HM Revenue and Customs ( HMRC ). «Частное использование» включает поездки сотрудников из дома на работу, если они не выезжают на временное место работы. Расчет налогооблагаемой стоимости Вы можете рассчитать налогооблагаемую стоимость с помощью коммерческого программного обеспечения для расчета заработной платы. Или вы можете использовать служебный автомобиль и калькулятор топливных льгот компании HMRC , если он работает в вашем браузере. Использование калькулятора HMRC Выберите тип топлива «F» для дизельных автомобилей, соответствующих стандарту Euro 6d (также известный как Real Driving Emissions 2).Выберите тип «D» для других дизельных автомобилей. Выберите тип «A» для всех остальных автомобилей. Вы можете проверить выбросы CO2 от автомобиля. Для электромобилей и других автомобилей с утвержденным показателем выбросов CO2 75 г / км или менее ответьте «нет» на вопрос «предоставляется ли автомобиль по дополнительному соглашению о вознаграждении?». Если для вашего автомобиля утвержденный показатель выбросов CO2 составляет от 1 до 50 г / км, вам также необходимо заполнить поле для «пробега с нулевым уровнем выбросов» (также известного как электрический запас хода).Это расстояние, на которое автомобиль может проехать от электроэнергии до того, как его батареи потребуют подзарядки. Вы можете получить информацию о пробеге с нулевым уровнем выбросов по адресу: сертификат соответствия вашего автомобиля, если вы владеете автомобилем лизинговая компания или поставщик автопарка, если вы арендуете автомобиль Определить значение вручную Вы также можете вычислить значение вручную на рабочем листе P11D 2. Вам придется использовать этот метод, если в течение налогового года, за который вы представляете отчет, применимы оба следующих условия: автомобиль был недоступен не менее 30 дней подряд вы предоставляли топливо для личного пользования, но прекратили это делать Налогооблагаемая стоимость автомобилей Налогооблагаемая стоимость автомобиля не равна его стоимости. No related posts. Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт